分析乙肝病毒DNA病毒載量與各型乙型肝炎血清標(biāo)志物之間的關(guān)系

魏穎

沛縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇徐州 221600

我國(guó)是乙型肝炎病毒攜帶人口大國(guó)，乙型病毒性肝炎是我國(guó)發(fā)病率極高的慢性傳染病，其患者免疫功能變差遷延難愈導(dǎo)致病情惡化使肝臟長(zhǎng)期受累發(fā)展為肝硬化，以至于患者生活受到嚴(yán)重干擾[1]。世界衛(wèi)生組織報(bào)道全球乙型病炎病毒感染率極高，慢性乙型肝炎是乙型肝炎病毒造成常見(jiàn)且嚴(yán)重一類疾病，我國(guó)作為乙型肝炎病毒攜帶人口大國(guó)之一，乙型肝炎病毒感染給我國(guó)社會(huì)造成了極大的不良影響，給患者家庭以及社會(huì)帶來(lái)了沉重負(fù)擔(dān)[2]。HBV-DNA測(cè)定從分子生物學(xué)水平進(jìn)行觀察，可準(zhǔn)確得到病毒存在以及復(fù)制的相關(guān)信息?；瘜W(xué)發(fā)光試驗(yàn)依靠檢查血清標(biāo)志物可得到不同免疫模式在病毒感染后出現(xiàn)的免疫應(yīng)答。為提高診斷準(zhǔn)確率，該次研究針對(duì)2017年2月—2018年2月該院收治的82例乙肝患者采取HBV-DNA測(cè)定以及檢查血清標(biāo)志物的方式進(jìn)行診斷，旨在通過(guò)對(duì)乙肝病毒DNA病毒載量與各型乙型肝炎血清標(biāo)志物之間的關(guān)系進(jìn)行觀察，以此了解化學(xué)發(fā)光法以及熒光定量PCR法測(cè)定HBV的應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取該院收治的82例慢性乙型肝炎患者。82例患者均知情并同意參加該研究且獲倫理委員批準(zhǔn)?；颊吣挲g區(qū)間 17.8～70.3 歲，平均年齡（62.32±12.24）歲，男49例，女33例。

1.2 方法

選取 HBV 血清標(biāo)志物 HBsAg、HBsAb、HBcAb、HBeAb以及HBeAg試劑。利用化學(xué)發(fā)光法測(cè)定82例患者 HBV 血清標(biāo)志物 HBsAg、HBeAg、HBeAb、HB-sAb、HBcAb等，使用儀器為雅培i2000SR。乙型肝炎病毒DNA水平采用熒光定量PCR方法進(jìn)行檢測(cè)，乙肝DNA采用的定量?jī)x器為廈門(mén)安普利公司提供的9820型PCR擴(kuò)增儀。

1.3 診斷指標(biāo)

乙肝標(biāo)志物 ：HBsAg＜0.05 IU/mL 為 陰性；HB-sAb＜10.00 mIU/mL 為陰性；HbeAg＜1.000 S/CO 為陰性；HBeAb＜1.00 S/CO 為陰性；HBcAb＜1.000 S/CO 為陰性，反之判斷為陽(yáng)性。 HBV核酸熒光PCR檢測(cè)＜5×102U/mL低于最低檢出限診斷為陰性。反之則判斷為陽(yáng)性。

2 結(jié)果

結(jié)果表明，82例患者血清標(biāo)志物為大多呈Hbs Ag（+ ）、HBsAb （- ）、HBeAb （+ ）、HBeAg（+ ）、HBcAb（+），HBsAg陽(yáng)性總例數(shù)82例，HBV陽(yáng)性總例數(shù)為42例，陽(yáng)性檢出率為52.50%。乙肝免疫標(biāo)志物模式與HBV-DNA比率具體見(jiàn)表1。

表1 乙肝免疫標(biāo)志物模式以及HBV-DNA陽(yáng)性例數(shù)以及比率

3 討論

乙型肝炎病毒感染的診斷主要依據(jù)包括患者的臨床癥狀、既往病史、體征、天門(mén)冬酸氨氯基轉(zhuǎn)移酶（Aspartate aminotransferase；AST）、 丙氨酸基轉(zhuǎn)移酶（Alanine transferase；ALT）等生化指標(biāo)以及分子生物學(xué)指標(biāo)等。此外乙肝兩對(duì)半在診斷乙型肝炎病毒感染發(fā)揮了重要作用，是目前乙肝診斷中具有檢測(cè)簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確率高、耗時(shí)短等諸多優(yōu)點(diǎn)的最常用方法。其主要包括了血清學(xué)標(biāo)志物檢測(cè)指標(biāo) HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb[3-4]。 HBV-DNA 載體含量檢測(cè)是判斷HBV病毒復(fù)制的準(zhǔn)確率最高、結(jié)果最為可靠以及最直接的方法。臨床通過(guò)檢測(cè)HBV-DNA或者HBsAg是否呈陽(yáng)性以此判斷是否急性肝炎、慢性肝炎以及無(wú)癥狀攜帶者。

諸多臨床研究結(jié)果表明HBV-DNA檢測(cè)陽(yáng)性較為準(zhǔn)確，該次研究采用熒光定量PCR檢測(cè)HBV-DNA以此判斷HBV病毒載體含量的多少，免疫模式1,3,5的陽(yáng)性率為91.67%。與李仁杰等[5]研究中此模式陽(yáng)性率90.9%的結(jié)果較為接近，證實(shí)陽(yáng)性結(jié)果較為準(zhǔn)確，可得出HBsAg是否呈陽(yáng)性是判斷乙型肝炎病毒感染的主要病原學(xué)診斷指標(biāo)。該次研究通過(guò)對(duì)82例患者進(jìn)行檢測(cè)，選用了近年來(lái)新出現(xiàn)的一種較之酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)更高敏感性與特異性的化學(xué)發(fā)光法，其中部分患者臨床檢測(cè)顯示HBsAg陽(yáng)性而HBV-DNA病毒載體檢測(cè)為陰性，這種情況可能與FQ-PCR擴(kuò)增只能通過(guò)血中游離的HBV-DNA病毒載體進(jìn)行判斷有關(guān)。臨床研究中表明HBV感染后病毒整合到肝細(xì)胞DNA染色體上，然后會(huì)同肝細(xì)胞的分裂、復(fù)制一同表達(dá)，此種情況下FQ-PCR檢測(cè)結(jié)果可呈陰性而利用酶聯(lián)免疫試驗(yàn)法可檢測(cè)出陽(yáng)性。在恢復(fù)期或者既往乙肝病毒感染病史的患者在通過(guò)藥物等治療方式清除乙肝病毒后抗原、抗體仍處于陽(yáng)性，但血清中無(wú)法通過(guò)熒光定量擴(kuò)增檢測(cè)到，而血清中無(wú)法通過(guò)FQ-PCR擴(kuò)增檢測(cè)到HBV顆粒存在，所以檢測(cè)結(jié)果為陰性[6-10]。此外出現(xiàn)乙肝病毒突變的情況，此種情況下不能與熒光探針結(jié)合，所以檢測(cè)結(jié)果呈陰性。

此外該次研究中有少數(shù)乙肝患者被診斷為HB-sAg陰性，此種情況發(fā)生的因素可能與急性乙肝發(fā)生時(shí)出現(xiàn)抗-HBs消失的窗口期。臨床無(wú)法檢測(cè)到抗-HBs時(shí)或者僅出現(xiàn)低水平的感染可能會(huì)影響HBsAg方法的靈敏性。此外重疊感染同樣會(huì)影響HBsAg檢測(cè)，其具體機(jī)制是患者HBeAg以及HBsAb的感染亞型不同，相同或相繼被不同的乙肝病毒亞型感染會(huì)出現(xiàn)HBsAb中和同一血清病毒的情況。HBV的s區(qū)變異進(jìn)而導(dǎo)致HBsAg的不表達(dá)，由于受檢人員者是感染乙肝的高危人群，為保證患者的安全性性，應(yīng)根據(jù)醫(yī)療條件為患者進(jìn)行HBV-DNA以及血清標(biāo)志物兩種檢測(cè)方法，提高臨床診斷準(zhǔn)確性。

該次研究結(jié)果表明1，3，5陽(yáng)性組以及1，3陽(yáng)性組HBV-DNA檢出率達(dá)到91.67%以及更高，其中1，3組中的HBV-DNA陽(yáng)性含量大于105U/mL，說(shuō)明HBeAg陽(yáng)性患者具有較高傳染性，可以將HBeAg陽(yáng)性患者單獨(dú)分組進(jìn)重點(diǎn)治療。HBeAg是一種可準(zhǔn)確反應(yīng)體內(nèi)HBV復(fù)制以及增殖水平常用的生化免疫學(xué)指標(biāo)。HBeAg具有靈敏度高以及特異性好的優(yōu)點(diǎn)。HBeAg通常用于判斷是否感染恢復(fù)、HBV復(fù)制能力是否減弱以及HBV傳染性強(qiáng)弱。

該次研究中2，4，5陽(yáng)性組HBV-DNA檢出率較低，僅有37.50%，說(shuō)明患者體內(nèi)雖然存在抗體在殺傷HBV，但部分患者體內(nèi)仍存在HBV-DNA復(fù)制的現(xiàn)象，利用酶聯(lián)免疫測(cè)試法所得到的陽(yáng)性率會(huì)更低，說(shuō)明未產(chǎn)生免疫應(yīng)答以及出現(xiàn)免疫耐受的情況往往無(wú)法有效檢測(cè)，其多是由于低濃度的HBsAg漏檢以及免疫功能低下引起的。

綜上所述，利用乙肝患者的血清標(biāo)志物指標(biāo)和HBV-DNA檢測(cè)會(huì)更有利于判斷患者的病情進(jìn)展，可結(jié)合患者病毒載量與感染的免疫標(biāo)志物模式為臨床制定治療方案提供參考依據(jù)，也為臨床研究具有高耐藥屏障和多作用靶點(diǎn)的藥品提供理論依據(jù)，有利于臨床以合理的治療方式改善患者肝功能病理改變。