兩種孵化溫度對中華鱉性別分化的影響

（1.河南師范大學水產(chǎn)學院,河南新鄉(xiāng) 453007；2.洛陽市漁業(yè)船舶檢驗與水產(chǎn)技術(shù)推廣站，河南洛陽 471000）

中華鱉（Pelodiscus sinensis），俗稱團魚、甲魚等，主要分布在越南、日本、朝鮮、俄羅斯等國，我國主要分布在長江、黃河流域[1]。中華鱉營養(yǎng)價值較高，具有一定藥用價值，其深受消費者喜愛。在養(yǎng)殖過程中，雄性中華鱉較雌性中華鱉生長速度快，因此培育全雄鱉是提高養(yǎng)殖效益的途徑之一[2-3]。

爬行動物的性別決定機制有染色體性別決定型和環(huán)境性別決定型。研究表明，溫度對龜鱉目中許多物種的性別有決定性影響，其中烏龜（Chinemys reevesii）[4]，中華條頸龜（Mauremys sinensis）[5]，黃喉擬水龜（Mauremys mutica）[6]等性別決定方式均屬溫度依賴型性別決定。關(guān)于中華鱉的性別分化機制，早期研究認為其溫度對中華鱉性別分化有較大的影響[7-8]。Mu等[9]對不同孵化溫度條件下的個體染色體進行了分析，發(fā)現(xiàn)不同個體的表型性別與性染色體類型均一致，表明溫度未影響中華鱉的性別分化。因此特設(shè)計試驗，以求探明孵化溫度與中華鱉性別比例間的關(guān)系，為人為控制中華鱉性別分化提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

實驗所用中華鱉卵來源于信陽固始縣晨源水產(chǎn)養(yǎng)殖公司同一日收集的受精鱉卵。孵出后的稚鱉前期投喂魚糜，后期以投喂鱉類專用飼料為主。

1.2 試驗方法

1.2.1 孵化

將中華鱉卵均勻埋在裝滿蛭石的塑料盆中，分別置于溫度為27℃、32℃的恒溫孵化箱中進行孵化。定期向蛭石表面噴水，維持環(huán)境濕度在80%左右。并定時翻動鱉卵保持透氣，以免鱉卵表面堵塞導(dǎo)致變質(zhì)。

1.2.2 稚鱉飼養(yǎng)

出生后稚鱉體重約3～5 g，于盆中暫養(yǎng)2～3 d后選擇生理狀態(tài)相近、體形勻稱的健康個體，浸浴低濃度高錳酸鉀水溶液消毒并放入稚鱉池繼續(xù)培養(yǎng)，放養(yǎng)密度以50只/m2為宜。

不同溫度下孵出的稚鱉在相似環(huán)境下隔離培養(yǎng)，設(shè)投飼臺以供稚鱉取食。日常管理過程中保證不同孵化溫度的稚鱉生存環(huán)境相似，并及時清除剩余餌料、定期消毒，防止水質(zhì)污染。

1.2.3 性別鑒定

雌鱉體較厚，背甲圓形，裙邊較寬，尾部不外露。腹甲后緣略向內(nèi)凹入,尾部鈍錐體形,末端驟然變細呈點狀或者內(nèi)卷，泄殖孔小且靠近尾部末端，后肢間距大；雄鱉體薄，背甲橢圓形，裙邊較窄，尾端露出裙邊。腹甲后緣弧形，尾部尖呈錐體形，泄殖孔距尾部末端有小段距離，后肢間距小[10]。

當稚鱉第二性征不易辨別時，可通過性腺組織切片辨別其性別。方法如下：取稚鱉性腺-中腎復(fù)合體（AKG），Bouin′s試劑固定18－24 h后用70%的酒精洗滌去顏色。梯度酒精洗滌脫水，每濃度處理10-30 min。將脫水后的性腺組織依次浸沒二甲苯無水酒精混合液（二甲苯：無水酒精=1∶1）10-30 min、二甲苯溶液10-30 min，使之透明。將透明處理的性腺組織依次用二甲苯：石蠟（體積比1∶1） 處理 10-20 min、56-70℃熔點的石蠟處理20-40 min，重復(fù)兩次后，將脫水透蠟的組織樣品進行包埋。使用石蠟切片機切片，于37℃水浴展片后置于50℃左右的烤片機上烤片固定。染色采用蘇木精-伊紅復(fù)染法，然后用中性樹膠封片。

2 結(jié)果與分析

2.1 孵化結(jié)果

不同溫度下中華鱉的孵化率不同（表1）。在一定溫度范圍內(nèi)，隨著溫度升高，中華鱉的孵化率升高。32℃下孵化率達95.3%，27℃下孵化率較低，約為91.25%。

表1 兩種孵化溫度下受精卵孵化情況Tab.1 The situation of the fertilized eggs which hatched at two different temperature

2.2 性別鑒定結(jié)果

雄性稚鱉的精巢切片可觀察到精巢壁分外層腹膜和內(nèi)層白膜，其中不規(guī)則的精細管是由白膜向內(nèi)部延伸形成的。精細管間被濾泡細胞分隔，雌性稚鱉的卵巢切片可觀察到卵巢膜和基質(zhì)將卵巢分成數(shù)個小室，原始的卵泡在此發(fā)育。卵原細胞無濾泡[10]。

圖1 中華鱉稚鱉精巢與卵巢比較Fig.1 Comparison of the nests and ovaries of the juvenile P.sinensis

孵化溫度對中華鱉性別分化有影響（表2）。在一定溫度范圍內(nèi)，雄性孵化比例隨孵化溫度變化而改變。27℃下孵化的中華鱉雌性個體多于雄性個體，雄性個體只占36.17%；而32℃孵化的中華鱉雄性比例明顯提升，達到49.06%。

表2 兩種孵化溫度下稚鱉的性別比例Tab.2 The sex ratio of juvenile P.sinensis at two incubation temperatures.

3 討論

3.1 不同環(huán)境因素對中華鱉性別比例、孵化率及后續(xù)生長發(fā)育的影響

Georges等[11]研究表明，不同于由基因決定性別的哺乳動物和鳥類，爬行動物的性別由遺傳物質(zhì)和環(huán)境因子共同決定，孵化過程中溫度是影響最大的環(huán)境因子。同時Ji等[12]認為，孵化溫度對中華鱉的性別沒有影響。本次實驗結(jié)果表明：32℃下雄性比例較高，達49.06%，27℃下雄性比例較低，為36.17%，這與朱道玉等[7]，聶劉旺等[8]的研究結(jié)果一致。本次實驗還發(fā)現(xiàn)，爬行動物的孵化成功率受到孵化溫度的影響。在一定溫度范圍內(nèi)，孵化溫度越高，孵化成功率越高。另外王玲等[13]研究表明環(huán)境濕度對中華鱉卵的孵化率也有一定影響。中華鱉卵失水速率與孵化期環(huán)境濕度相關(guān)，受精卵內(nèi)容物過于干燥將會影響胚胎成活率。環(huán)境濕度控制在80%～82%左右時，孵化率可達95%以上，且可有效縮短中華鱉孵化時間。

此外，本實驗過程中發(fā)現(xiàn)，同一溫度下不同直徑的中華鱉卵孵化出的稚鱉在后續(xù)生長發(fā)育過程中，稚鱉的生理狀態(tài)、質(zhì)量與孵化前鱉卵的形態(tài)存在關(guān)聯(lián)。直徑、重量大的鱉卵比較小的鱉卵孵化期略長（平均長1～2 d），其孵化出的稚鱉生長速度快、存活率高。推測原因，可能是較小的鱉卵中所含營養(yǎng)物質(zhì)有限，雖能供給正常孵化，但胚胎發(fā)育后期營養(yǎng)不足會影響稚鱉生長。這種特性為生產(chǎn)實踐中篩選中華鱉卵提供了依據(jù)，為保證稚鱉體內(nèi)積存營養(yǎng)物質(zhì)足夠供其后續(xù)健康發(fā)育及順利越冬，應(yīng)選擇大小適中、外觀均勻的受精卵（卵重3 g以上，直徑1.8 cm左右）進行孵化。

研究孵化溫度對中華鱉性別分化的影響，不僅為爬行動物性別決定機制的研究提供資料，在生產(chǎn)實踐上也具有重要意義。養(yǎng)殖者可通過控制孵化溫度獲得自己所需性別的中華鱉，從而有目的地進行人工育苗。