元胡水煮液對(duì)炎癥痛大鼠的鎮(zhèn)痛作用

于曉利 曹公譯胡文昭 梁 雪 沈 勇 周 強(qiáng) 付立波

(長(zhǎng)春師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春 130032)

元胡，又名延胡索、玄胡，為罌粟科紫堇屬多年生草本植物，在《本草綱目》中歸納元胡有“活血，利氣，止痛，通小便”4大功效，并推崇元胡“能行血中氣滯，氣中血滯，故專(zhuān)治一身上下諸痛”。以塊莖入藥，其調(diào)經(jīng)止痛功效尤為顯著，臨床上常將元胡用于治療痛經(jīng)、血虛頭痛、腰腹疼痛等癥。元胡止痛方主要由延胡索和白芷組成；元胡在治療痛經(jīng)方面是通過(guò)抑制子宮收縮起直接鎮(zhèn)痛作用。炎癥是疼痛最常見(jiàn)的原因之一，臨床上很多原因不明的疼痛實(shí)際上是由于軟組織的無(wú)菌性炎癥所致〔1〕。所以，只有建立炎癥痛動(dòng)物模型以研究炎癥痛的特征及其作用機(jī)制，才可以為研究更有效的鎮(zhèn)痛方法提供支持與幫助。炎癥過(guò)程一般在注射后3～4 h內(nèi)開(kāi)始，炎癥癥狀一般能在24 h后基本復(fù)原〔2〕。已經(jīng)有研究表明，給實(shí)驗(yàn)性偏頭痛大鼠灌胃元胡止痛膠囊有明顯的鎮(zhèn)痛作用〔3，4〕。但至今尚未發(fā)現(xiàn)有元胡水煮液對(duì)慢性痛當(dāng)中的炎癥痛大鼠的鎮(zhèn)痛效果，為進(jìn)一步研究元胡鎮(zhèn)痛作用，本實(shí)驗(yàn)以鹿角菜作為致炎劑建立炎癥痛模型，采用元胡水煮液對(duì)炎癥痛大鼠灌胃方法，以熱板和壓板測(cè)痛儀對(duì)大鼠進(jìn)行痛覺(jué)測(cè)試，來(lái)研究元胡水煮液對(duì)炎癥痛大鼠的鎮(zhèn)痛作用。

1 材料與方法

1.1試驗(yàn)動(dòng)物 本實(shí)驗(yàn)全部使用雄性Wistar大鼠8只，體重200～220 g，由吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。在實(shí)驗(yàn)期間保持分籠飼養(yǎng)，自由進(jìn)食和飲水，確保自然光照，飼養(yǎng)溫度控制在(22±2)℃，確保恒定的晝夜節(jié)律的生活環(huán)境。實(shí)驗(yàn)中盡量減少大鼠的使用數(shù)量，并盡可能減少其他因素對(duì)大鼠所造成的不良影響。

1.2主要試劑與儀器 元胡，購(gòu)于義善堂大藥房南廣場(chǎng)店。稱(chēng)取元胡于瓷缸中，加入蒸餾水煮沸后獲得元胡水煮液母液，然后用母液配制濃度分別為24、48、96 mg/ml的元胡水煮液；生理鹽水由長(zhǎng)春豪邦藥業(yè)有限公司制造，鹿角菜為Sigma公司制造的產(chǎn)品；智能熱板儀(YLS-6B)，電子壓痛儀(YLS-3E) 均來(lái)自于安徽省的淮北正華生物儀器設(shè)備有限公司。

1.3炎癥痛模型的建立與行為測(cè)痛 在大鼠右側(cè)足底皮下注射鹿角菜(鹿角菜需現(xiàn)用現(xiàn)配，避免變性而存在誤差)，建立大鼠炎癥痛模型。注射時(shí)間應(yīng)該調(diào)整在行為學(xué)測(cè)試之前的3 h，注射后3～4 h，大鼠后爪將會(huì)出現(xiàn)明顯紅腫，皮溫顯著升高，此時(shí)將進(jìn)行痛覺(jué)測(cè)試；在進(jìn)行致炎和灌胃實(shí)驗(yàn)之前，先要對(duì)大鼠進(jìn)行熱板和壓板測(cè)試的訓(xùn)練，主要目的是使大鼠熟悉測(cè)試環(huán)境，從而減少因緊張或不熟悉環(huán)境而造成的實(shí)驗(yàn)誤差。訓(xùn)練總共需要進(jìn)行7 d，每天5輪，每輪3次。熱板測(cè)試：采用智能熱板儀進(jìn)行測(cè)試，智能熱板儀的溫度需要控制為(52±0.3)℃。左手握住大鼠身體，右手持于大鼠待測(cè)腿髖關(guān)節(jié)處，使其腿完全伸直，下壓使得待測(cè)爪與熱板面的充分接觸。接觸時(shí)輕踏踏板開(kāi)關(guān)開(kāi)始計(jì)時(shí)，后爪主動(dòng)回縮離開(kāi)熱板表面時(shí)再次踏開(kāi)關(guān)以停止，這段時(shí)間作為大鼠后爪縮爪反應(yīng)潛伏期(HWL)。壓力測(cè)試：使用電子壓痛儀進(jìn)行測(cè)試。左手握住大鼠身體，右手持于大鼠待測(cè)腿髖關(guān)節(jié)處，使其腿完全伸直，下壓使得其爪與實(shí)驗(yàn)小平面接觸，接觸時(shí)同時(shí)輕踏踏板開(kāi)關(guān)，楔形有機(jī)玻璃下降落在大鼠后爪上，壓力將以30 g/s的速度增進(jìn)，同樣方法測(cè)得大鼠對(duì)機(jī)械刺激的HWL。訓(xùn)練后大鼠對(duì)傷害性熱刺激的HWL不得超過(guò)5 s，對(duì)傷害性機(jī)械刺激的HWL不得超過(guò)6 s。注射藥物前先測(cè)量3組HWL作為基礎(chǔ)值；注射藥物后各時(shí)間點(diǎn)的HWL以相對(duì)于基礎(chǔ)值的變化百分比表示。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

給炎癥痛大鼠灌胃24 mg/ml元胡水煮液與灌胃生理鹽水作為對(duì)照，大鼠對(duì)熱刺激和機(jī)械刺激的HWL變化百分比見(jiàn)表1，與對(duì)照組比較，炎癥痛大鼠灌胃24 mg/ml元胡水煮液后左、右爪機(jī)械刺激的HWL有極顯著差異(均P<0.001)，左、右爪熱刺激無(wú)明顯差異(均P>0.05)。給炎癥痛大鼠灌胃48 mg/ml元胡水煮液與灌胃生理鹽水作為對(duì)照，大鼠對(duì)熱刺激和機(jī)械刺激的HWL變化百分比見(jiàn)表2，與對(duì)照組比較，炎癥痛大鼠灌48 mg/ml元胡水煮液后的左、右爪機(jī)械刺激的HWL均有顯著差異(均P<0.01)，左、右爪熱刺激無(wú)明顯差異(均P>0.05)。給炎癥痛大鼠灌胃96 mg/ml元胡水煮液與灌胃生理鹽水作為對(duì)照，大鼠對(duì)熱刺激和機(jī)械刺及的HWL變化百分比見(jiàn)表3，與對(duì)照組比較，炎癥痛大鼠灌96 mg/ml元胡水煮液后的左、右爪熱刺激和機(jī)械刺激的HWL均有顯著差異(均P<0.01)，即明顯延長(zhǎng)了大鼠的HWL。

表1 灌胃24 mg/ml元胡水煮液的炎癥痛大鼠與對(duì)照組(生理鹽水)大鼠的HWL(n=8)

與對(duì)照組同側(cè)別比較：1)P<0.001

表2 灌胃48 mg/ml元胡水煮液的炎癥痛大鼠與對(duì)照組大鼠HWL比較

與對(duì)照組同側(cè)別比較：1)P<0.01,下表同

表3 灌胃96 mg/ml元胡水煮液的炎癥痛大鼠與對(duì)照組大鼠的HWL比較

3 討 論

元胡史載于《開(kāi)寶本草》，性溫，味辛苦，入心、脾、肝、肺，是活血化瘀、行氣止痛之妙品，在臨床上的應(yīng)用也并不少見(jiàn)，經(jīng)過(guò)多年臨床用藥驗(yàn)證，具有良好行氣止痛，活血化瘀的功效，特別在治療痛經(jīng)方面有很好的效果〔5〕。此外，已有相關(guān)學(xué)者研究元胡止痛膠囊對(duì)小鼠活血鎮(zhèn)痛的作用，結(jié)果表明元胡止痛膠囊可以明顯改善血瘀癥小鼠的血液流變性，并有很好的鎮(zhèn)痛效果〔6〕。也有研究發(fā)現(xiàn)，元胡止痛栓能夠提高小鼠熱板法、大鼠甲醛法動(dòng)物的痛閾；延長(zhǎng)小鼠、大鼠痛經(jīng)模型的扭體潛伏期、降低扭體次數(shù)及扭體發(fā)生率〔7〕，具有良好的鎮(zhèn)痛作用，并能夠?qū)勾弋a(chǎn)素所致離體子宮平滑肌的收縮作用〔8〕。元胡的鎮(zhèn)痛作用機(jī)制主要是由其內(nèi)含有的化學(xué)成分決定，決定其鎮(zhèn)痛作用的化學(xué)成分有延胡索甲素、延胡索乙素、延胡索癸素、延胡索丑素，這些成分都為生物堿。已有研究證實(shí)延胡索乙素的鎮(zhèn)痛作用最強(qiáng)，次之為延胡索丑素，并且表明延胡索乙素在治療痛經(jīng)時(shí)是通過(guò)抑制子宮收縮起到鎮(zhèn)痛作用。而在其他方面的鎮(zhèn)痛作用主要是因?yàn)檠雍饕宜刈鳛槎喟桶?型受體的受體抑制劑，其抑制脊髓以上D2受體達(dá)到鎮(zhèn)痛作用。炎癥痛是一種常見(jiàn)的慢性痛，患有炎癥痛的患者數(shù)不勝數(shù)。因此，研究新型鎮(zhèn)痛類(lèi)藥物具有重大的生理學(xué)意義。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，元胡水煮液對(duì)炎癥痛疼痛變化具有調(diào)節(jié)作用。