南寧市獻(xiàn)血人群登革熱血清流行病學(xué)調(diào)查*

林健燕，郭澤強(qiáng)，羅必泰，周艷君，邱昌文，龐興旺

(1.廣西壯族自治區(qū)南寧市中心血站 530003；2.南寧市疾病預(yù)防控制中心 530023)

登革熱病毒(Dengue virus，DENV)的感染譜表現(xiàn)為無癥狀的隱性感染、非特征性發(fā)熱、登革熱、登革出血熱、登革休克綜合征[1]；且約75%的感染者表現(xiàn)為無癥狀的隱性感染[2]。處于隱性感染的獻(xiàn)血者在獻(xiàn)血前征詢時(shí)不能排除其獻(xiàn)血，且我國尚未把登革熱病毒納入采供血機(jī)構(gòu)的血液檢測項(xiàng)目，那么其所捐獻(xiàn)的血液中很可能攜帶病毒，成為經(jīng)血傳播的傳染源。為了解南寧市獻(xiàn)血人群中登革熱病毒的感染狀況，收集了1 712例獻(xiàn)血者標(biāo)本進(jìn)行登革熱病毒抗原和抗體檢測，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 2015年12月至2017年9月的每月10日分別在南寧中心血站的不同采血點(diǎn)隨機(jī)抽取部分經(jīng)過健康征詢合格及血液初篩檢測合格的獻(xiàn)血者。每位獻(xiàn)血者在血液采集時(shí)均留取約5～6 mL血樣于EDTA抗凝管中，用于DENV NS1抗原、DENV IgM抗體及DENV IgG抗體的檢測。

1.2標(biāo)本保存 現(xiàn)場采集的血液保存于2～8 ℃冰箱，并用2～8 ℃冰盒運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室，實(shí)驗(yàn)室在3 000 r/min的條件下離心15 min分離血清，并將血清存放于-20 ℃低溫冰箱。所有標(biāo)本在采集后的4 d內(nèi)完成檢測。

1.3主要試劑與儀器 NS1抗原檢測試劑盒購自北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司，IgM和IgG抗體診斷試劑盒購自中山生物工程有限公司。全自動加樣儀和全自動酶免儀為瑞士HAMILTON公司的產(chǎn)品。

1.4檢測方法 按照試劑盒的使用說明書進(jìn)行標(biāo)本的檢測和結(jié)果判讀。

NS1抗原采用雙抗體夾心ELISA的原理進(jìn)行檢測。微孔板上設(shè)定陰性對照3孔、陽性對照2孔和空白對照1孔，在除空白孔外的各孔中加入稀釋液50 μL，然后分別在相應(yīng)孔中加入待測標(biāo)本或陰、陽性對照各50 μL振蕩混勻。37 ℃溫育60 min后在除空白孔外的各孔中加入酶標(biāo)試劑50 μL振蕩混勻，繼續(xù)37 ℃溫育30 min后用洗滌液洗板5遍。每孔先后加入顯色劑A、B液各50 μL振蕩混勻于37 ℃顯色15 min后加入終止液50 μL，立即讀取A450 nm值，空白孔調(diào)零。結(jié)果判定：以陰性對照孔A值的均值+0.10為截?cái)嘀?Cut off)，待測標(biāo)本的A值大于等于截?cái)嘀禐殛栃?，小于截?cái)嘀禐殛幮浴?/p>

IgM和IgG抗體采用間接ELISA進(jìn)行檢測。將10 μL待測血清標(biāo)本加入500 μL樣品稀釋液中對標(biāo)本進(jìn)行稀釋。包被板上設(shè)定陰性對照、陽性對照和空白對照各2孔，在每個陰性對照、陽性對照孔中分別加入陰性對照血清和陽性對照血清100 μL。每個空白對照孔中加入洗滌劑100 μL，其余各孔中加入已稀釋好的待測標(biāo)本100 μL。振蕩混勻后于37 ℃溫育40 min，用洗滌液洗板5遍后在除空白孔外的各孔中加入酶標(biāo)試劑50 μL振蕩混勻，繼續(xù)37 ℃溫育30 min后用洗滌液洗板5遍，每孔先后加入底物A、B液各50 μL振蕩混勻于37 ℃顯色10 min后加入終止液50 μL，立即讀取A450 nm值，空白孔調(diào)零。結(jié)果判定：IgM檢測以陰性對照孔A值的均值+0.20為截?cái)嘀?Cut off)，IgG檢測以陰性對照孔A值的均值+0.15為截?cái)嘀?Cut off)，待測標(biāo)本的A值大于等于截?cái)嘀禐殛栃?，小于截?cái)嘀禐殛幮浴?/p>

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1血清學(xué)檢測結(jié)果 1 712例獻(xiàn)血者中，DENV NS1抗原陽性18例，陽性率1.1%；DENV IgM抗體陽性4例，陽性率0.2%；DENV IgG抗體陽性121例，陽性率7.1%。表1中顯示存在雙重指標(biāo)陽性的情況，其中1例NS1抗原和IgM抗體均陽性，1例NS1抗原和IgG抗體均陽性。將1 712例獻(xiàn)血者分為以下4種類型：(1)1 571例獻(xiàn)血者NS1、IgM、IgG均為陰性，沒有感染過登革熱病毒；(2)20例獻(xiàn)血者NS1和(或)IgM陽性，新近感染了登革熱病毒；(3)120例獻(xiàn)血者只是IgG陽性，曾經(jīng)感染過登革熱病毒；(4)1例獻(xiàn)血者NS1和IgG均陽性，存在登革熱病毒的二次感染。見表1。

表1 獻(xiàn)血人群登革熱病毒抗原抗體陽性檢出情況(n=1 712)

表2 血清學(xué)檢測結(jié)果與人群基本特征之間的相關(guān)性[n(%)]

-表示無數(shù)據(jù)

2.2血清學(xué)檢測結(jié)果與人群特征的關(guān)系 對血清學(xué)檢測結(jié)果陽性的獻(xiàn)血人群按照性別、年齡、文化程度、居住地等特征進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)IgM與性別之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，男性IgM陽性率更高；IgG與年齡之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，30歲以上的人群IgG陽性率更高。見表2。

3 討 論

登革熱在全球100多個國家流行，但是東南亞和西太平洋地區(qū)作為登革熱的主要流行區(qū)，該地區(qū)的患者約占全球患者的75%[3]。廣西壯族自治區(qū)與東盟多國相毗連，南寧市作為廣西壯族自治區(qū)的省會城市是中國-東盟博覽會的永久舉辦地，是中國與東盟各國聯(lián)系的橋頭堡。隨著中國東盟自由貿(mào)易區(qū)的建立，每年經(jīng)南寧市進(jìn)出中國和東盟的旅游、經(jīng)商、務(wù)工、學(xué)習(xí)人員日益增多，包括登革熱在內(nèi)的東南亞常見傳染病對廣西乃至全國的威脅迅速增大。本研究在分析人群特征與血清學(xué)檢測結(jié)果之間的關(guān)系時(shí)，發(fā)現(xiàn)IgM抗體與性別有關(guān)，男性IgM陽性率更高，說明男性由于野外作業(yè)機(jī)會較多尤其到東盟各國經(jīng)商、務(wù)工機(jī)會較多，更易于遭受有效蚊蟲叮咬導(dǎo)致感染。IgG抗體與年齡有關(guān)，30歲以上人群IgG陽性率更高，說明隨著年齡增長，暴露可能性增加，尤其是30歲以上的人群有更多的機(jī)會到東南亞旅游、經(jīng)商和務(wù)工，獲得感染的可能性增大。正是由于地理位置、氣候條件及社會活動等因素的存在，南寧市一直是登革熱傳播和流行的高風(fēng)險(xiǎn)地區(qū)。

登革熱病毒有4種血清型，主要通過蚊媒叮咬傳播；然而，針刺傷[4-5]、器官移植[6-7]、輸血[8-9]等非蚊媒叮咬途徑的有效傳播感染案例已有報(bào)道。由于大量的患者需要輸血治療，涉及范圍廣泛，因此輸血傳播登革熱病毒的案例自報(bào)道以來就一直引起全球輸血工作者和研究者的高度關(guān)注。南寧市每年約13萬人次參與獻(xiàn)血，然而獻(xiàn)血人群或健康人群中登革熱病毒的感染狀況一直少有研究報(bào)道。本次研究發(fā)現(xiàn)南寧市獻(xiàn)血人群中DENV NS1抗原、IgM抗體、IgG抗體的陽性率分別是1.1%、0.2%、7.1%。有研究指出：NS1抗原和(或)IgM抗體陽性提示正遭受病毒感染，處于感染期；IgG抗體陽性提示既往曾經(jīng)受過感染，感染已恢復(fù)并能抵抗同型病毒的再次感染[10-12]。說明登革熱病毒在南寧市既有既往流行也有現(xiàn)時(shí)流行，獻(xiàn)血者中既有曾經(jīng)受感染者也有正在受感染者。已發(fā)現(xiàn)的21例NS1抗原和(或)IgM抗體陽性的獻(xiàn)血者，其所捐獻(xiàn)的血液中可能攜帶有登革熱病毒并有可能導(dǎo)致受血者感染。121例IgG抗體陽性的獻(xiàn)血者，其所捐獻(xiàn)的血液有可能會讓受血者被動獲得DENV IgG抗體。然而，有研究指出由于登革熱病毒存在抗體依賴性感染增強(qiáng)效應(yīng)，曾經(jīng)感染過登革熱病毒的個體，一旦重新感染不同型別的登革熱病毒時(shí)，易于發(fā)展為病死率較高的登革出血熱或登革休克綜合征[13-14]。因此，輸注了帶DENV IgG抗體血液的受血者，在獲得同型登革熱病毒的免疫力的同時(shí)也承擔(dān)了相應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)。南寧市獻(xiàn)血人群中DENV NS1抗原、IgM抗體、IgG抗體的陽性率明顯低于周邊部分亞洲國家報(bào)道的結(jié)果[3，12-13]，表明南寧市登革熱的流行率較低，同時(shí)也提示抵抗登革熱病毒的人群免疫力較低，當(dāng)?shù)歉餆岵《据斎霑r(shí)易引起暴發(fā)流行。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)存在NS1抗原和IgG抗體同時(shí)陽性的情況，說明二次感染的存在，提示南寧市可能同時(shí)存在不同型別的病毒流行，進(jìn)一步提示了輸注IgG抗體陽性的受血者所面臨的風(fēng)險(xiǎn)。

因此，結(jié)合南寧市的實(shí)際情況，在綜合考慮成本-效益的前提下，建議按照以下方式適當(dāng)完善當(dāng)前的獻(xiàn)血者血液篩查策略，以減少登革熱病毒經(jīng)血傳播的可能。(1)在獻(xiàn)血前的健康征詢表中增加登革熱病毒感染風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)問題的條目；(2)從東南亞、非洲等登革熱流行區(qū)回來的人員應(yīng)自入境時(shí)起14 d后才能參與獻(xiàn)血，并在獻(xiàn)血前同時(shí)進(jìn)行DENV NS1抗原和DENV IgM抗體的篩查；(3)利用病毒滅活技術(shù)對血制品開展病毒滅活。