化學(xué)發(fā)光檢測系統(tǒng)測定總甲狀腺素的正確度研究

石 佳， 盧興兵， 李 勤， 楊舒羽， 王俊卿， 劉冠財(cái)， 孫可其， 曾素根

（1. 四川大學(xué)華西醫(yī)院實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)科，四川 成都 610041；2. 四川邁克生物股份有限公司參考系統(tǒng)部，四川 成都 611731）

血清甲狀腺素（thyroxine，T4）水平的準(zhǔn)確測定對甲狀腺中毒、T4型甲狀腺功能亢進(jìn)等疾病的診斷和治療具有重要意義。臨床常用的T4測定方法主要有放射免疫分析法和化學(xué)發(fā)光免疫分析法，目前應(yīng)用最廣泛的是化學(xué)發(fā)光免疫分析法。由于各廠家的檢測系統(tǒng)不完全相同，因此可能會(huì)導(dǎo)致檢測結(jié)果出現(xiàn)不一致。為此，本研究以同位素稀釋液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（isotope dilution liquid chromatography tandemmass spectrometry，ID-LC-MS/MS）作為血清T4測定的參考方法，將臨床常用的3種化學(xué)發(fā)光檢測系統(tǒng)與參考方法進(jìn)行方法學(xué)比對，評價(jià)3種化學(xué)發(fā)光檢測系統(tǒng)的正確度。

1 材料和方法

1.1 樣本

收集四川大學(xué)華西醫(yī)院臨床新鮮血液樣本40例，每例5 mL，濃度范圍為29.7～237.8 nmol/L。樣本要求無溶血、黃疸及脂血，無任何抗凝劑及分離膠，試管（紅頭）由美國BD公司提供。T4標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（IRMM-468）由歐洲標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)與測量研究所（the Institute for Reference Materials and Measurements，IRMM）提供。

1.2 儀器與試劑

Xevo TQS超高效液相色譜串聯(lián)三重四級桿質(zhì)譜儀由美國Waters公司提供。cobas e601全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀及配套試劑（電化學(xué)發(fā)光法）由瑞士羅氏公司提供，簡稱e601；ARCHTECT i2000SR化學(xué)發(fā)光免疫分析儀及配套試劑（吖啶酯化學(xué)發(fā)光法）由美國雅培公司提供，簡稱i2000SR；IS1200全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光測定儀及配套試劑（化學(xué)發(fā)光法）由四川邁克生物股份有限公司提供，簡稱IS1200。

1.3 方法

1.3.1 參考方法正確度驗(yàn)證 嚴(yán)格按照檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)溯源性聯(lián)合委員會(huì)（the Joint Committee for Traceability in Laboratory Medicine，JCTLM）推薦的T4參考方法制備標(biāo)準(zhǔn)液和內(nèi)標(biāo)溶液，篩選色譜和質(zhì)譜條件，建立檢測T4的ID-LC/MS/MS方法，并對其正確度進(jìn)行驗(yàn)證[1-5]。

1.3.2 方法學(xué)比對 參考方法以正確度質(zhì)控物進(jìn)行質(zhì)量控制，要求測定結(jié)果與靶值的相對偏移＜2%。3種化學(xué)發(fā)光檢測系統(tǒng)（e601、i2000SR、IS1200）分別按照實(shí)驗(yàn)室校準(zhǔn)和質(zhì)控規(guī)則進(jìn)行校準(zhǔn)和室內(nèi)質(zhì)控。參考方法和3種化學(xué)發(fā)光檢測系統(tǒng)滿足要求后同時(shí)測定40例新鮮臨床血清樣本，參照美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)（the Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）EP9-A3文件及WS/T 407—2012《醫(yī)療機(jī)構(gòu)內(nèi)定量檢驗(yàn)結(jié)果的可比性驗(yàn)證指南》對結(jié)果進(jìn)行線性回歸和偏移分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

參照YY/T 1223—2014《總甲狀腺素定量標(biāo)記免疫分析試劑盒》和美國臨床實(shí)驗(yàn)室改進(jìn)修正法規(guī)（the Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988，CLIA'88）制定各檢測系統(tǒng)測定T4的評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，數(shù)據(jù)采用Excel 2013軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。（1）線性回歸分析：以參考方法測定結(jié)果為X值，化學(xué)發(fā)光檢測系統(tǒng)的測定結(jié)果為Y值，作最小平方和線性回歸分析，線性相關(guān)系數(shù)（r）應(yīng)≥0.975；（2）偏移分析：以參考方法的測定結(jié)果為X值，以化學(xué)發(fā)光檢測系統(tǒng)測定結(jié)果與參考方法的相對偏移為Y值，作散點(diǎn)圖，以±15%為相對偏移的控制限，95%以上樣本的測定結(jié)果應(yīng)滿足要求。計(jì)算40例樣本的測定結(jié)果與參考方法測定結(jié)果的平均相對偏移并以此評價(jià)3種化學(xué)發(fā)光檢測系統(tǒng)的系統(tǒng)偏移。

2 結(jié)果

2.1 參考方法的正確度

建立的參考方法（ID-LC-MS/MS）連續(xù)3年參加由國際臨床化學(xué)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)聯(lián)合會(huì)（the International Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine，IFCC）組織的參考實(shí)驗(yàn)室外部質(zhì)量控制（the International Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine External Quality Assessment Scheme for Reference Laboratories in Laboratory Medicine，RELA）評價(jià)，結(jié)果顯示該法與主導(dǎo)實(shí)驗(yàn)室（德國波恩大學(xué)臨床生物化學(xué)研究所）的測定結(jié)果十分接近，相對偏移均＜2%。該法還通過了中國合格評定國家認(rèn)可委員會(huì)（China National Accreditation Service for Conformity Assessment，CNAS）ISO15195的認(rèn)可，并進(jìn)入了JCTLM的醫(yī)學(xué)參考測量服務(wù)實(shí)驗(yàn)室列表，由此表明建立的參考方法是正確、可靠的[6-8]。

2.2 方法學(xué)比對

2.2.1 e601與參考方法的比對結(jié)果 e601與參考方法的線性回歸方程為Y=0.958 2X+3.76，r2=0.963 9，結(jié)果為可接受，見圖1。偏移分析結(jié)果顯示單個(gè)樣本的相對偏移僅有1例超出限值，平均相對偏移為-0.83%，結(jié)果為可接受，見圖2。

圖1 e601與參考方法的線性回歸分析

圖2 e601的相對偏移

2.2.2 i2000SR與參考方法比對結(jié)果 i2000SR與參考方法的線性回歸方程為Y=0.747 7X+11.21，r2=0.967 1，結(jié)果為可接受，見圖3。偏移分析結(jié)果顯示單個(gè)樣本的相對偏移有27例超出限值，平均相對偏移為-15.24%，結(jié)果為不可接受，見圖4。

2.2.3 IS1200與參考方法的比對結(jié)果 IS1200與參考方法的線性回歸方程為Y=0.992 5X+10.59，r2=0.969 0，結(jié)果為可接受，見圖5。偏移分析結(jié)果顯示單個(gè)樣本的相對偏移有2例超出限值，平均相對偏移為5.83%，結(jié)果為可接受，見圖6。

圖3 i2000SR與參考方法的線性回歸分析

圖4 i2000SR的相對偏移

圖5 IS1200與參考方法的線性回歸分析

圖6 IS1200的相對偏移

3 討論

近年來，隨著社會(huì)的不斷發(fā)展，人們生活及工作的壓力越來越大，導(dǎo)致甲狀腺疾病的發(fā)病率持續(xù)上升。另外，隨著國家二胎政策的放開，孕婦人群數(shù)量陡增，甲狀腺功能也成為了孕檢必查的項(xiàng)目。因此，總T4、促甲狀腺素和游離甲狀腺激素等5項(xiàng)甲狀腺功能指標(biāo)對基層保健醫(yī)生和內(nèi)分泌科醫(yī)生尤為重要。目前，臨床實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)認(rèn)識到甲狀腺功能檢測標(biāo)準(zhǔn)化的重要性。為此，IFCC在2015年開展了甲狀腺功能檢查標(biāo)準(zhǔn)化的合作組項(xiàng)目，旨在解決甲狀腺功能檢查的標(biāo)準(zhǔn)化和一致性。

本研究采用方法學(xué)比對的方式對3種臨床實(shí)驗(yàn)室常用的化學(xué)發(fā)光檢測系統(tǒng)（e601、i2000SR、IS1200）測定T4的正確度進(jìn)行了初步評價(jià)。評價(jià)結(jié)果顯示e601和IS1200的正確度良好，而i2000SR雖然與參考方法相關(guān)性較好，但是出現(xiàn)較明顯的系統(tǒng)偏移，需對檢測系統(tǒng)進(jìn)行偏移校正。雖然本研究參考了CLSI EP9-A3等文件的評價(jià)方法，但由于實(shí)驗(yàn)條件的限制，考慮到采用的參考方法和3種化學(xué)發(fā)光檢測系統(tǒng)分別來自2個(gè)不同的實(shí)驗(yàn)室、參考方法樣本測定時(shí)間較長、臨床實(shí)驗(yàn)室很難收集到高濃度樣本等因素，因此本研究并未嚴(yán)格按照CLSI EP9-A3文件的要求，對40例樣本分5 d進(jìn)行雙份重復(fù)測定，而是對CLSI EP9-A3文件規(guī)定的評價(jià)方式進(jìn)行了一定的簡化。這樣雖然在一定程度上影響了本研究評價(jià)結(jié)果的精確度，但由于采用了線性回歸分析和偏移分析這2種直觀、簡便的分析方法，還是具有一定的客觀性和合理性。

建立檢驗(yàn)結(jié)果的量值溯源是保證各實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果準(zhǔn)確、可比的有效手段，也是促進(jìn)行業(yè)技術(shù)交流的基礎(chǔ)，更是評價(jià)體外診斷產(chǎn)品質(zhì)量和臨床實(shí)驗(yàn)室檢測質(zhì)量的重要指標(biāo)。開展量值溯源工作的基礎(chǔ)是建立檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)參考系統(tǒng)，包括參考方法、參考物質(zhì)、參考實(shí)驗(yàn)室。2005年，在國家衛(wèi)生計(jì)生委臨床檢驗(yàn)中心的倡導(dǎo)和組織下，國內(nèi)開始建立臨床酶學(xué)參考方法，經(jīng)過10余年的發(fā)展，現(xiàn)已從最初的臨床酶學(xué)、小分子代謝物等采用紫外分光光度法測定原理的二級參考方法擴(kuò)展到甾體激素、25-羥基維生素D、糖化血紅蛋白等采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（liquid chromatography tandem-mass spectrometry，LC-MS/MS）測定原理的一級參考方法。目前，國內(nèi)已經(jīng)有7家醫(yī)學(xué)參考實(shí)驗(yàn)室進(jìn)入了JCTLM的參考測量服務(wù)實(shí)驗(yàn)室列表，意味著國內(nèi)完全有條件將部分檢測項(xiàng)目進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，但是檢測標(biāo)準(zhǔn)化通常應(yīng)具有完整的溯源鏈，而處在溯源鏈中間層次的生產(chǎn)廠商是關(guān)鍵的一環(huán)，起到承上啟下、量值傳遞的作用。檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的檢測系統(tǒng)包括儀器、試劑、校準(zhǔn)品等，通常都是由生產(chǎn)廠商提供，也就是說檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)產(chǎn)品的提供者能在很大程度上左右最終檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，這就需要生產(chǎn)廠商建立檢測系統(tǒng)的溯源性，保證其提供的儀器和/或試劑所給出的檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。本研究評價(jià)的e601和IS1200的T4項(xiàng)目均具有量值溯源性描述，分別溯源至同位素稀釋氣相質(zhì)譜和ID-LC-MS/MS參考方法，而i2000SR的T4項(xiàng)目無溯源性描述。本研究結(jié)果顯示，具有溯源性的檢測系統(tǒng)的正確度明顯好于未溯源的檢測系統(tǒng)。由此可見，量值溯源是保證檢測系統(tǒng)正確度的重要前提，也是保證患者樣本檢測結(jié)果準(zhǔn)確性的重要條件[9-10]。

綜上所述，檢測系統(tǒng)是否具有量值溯源是臨床實(shí)驗(yàn)室選擇檢驗(yàn)產(chǎn)品和服務(wù)的重要依據(jù)，臨床實(shí)驗(yàn)室需了解檢測系統(tǒng)的測量不確定度是否能夠滿足實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的預(yù)期要求。據(jù)統(tǒng)計(jì)，醫(yī)生診斷結(jié)論80%的信息來自于臨床檢驗(yàn)結(jié)果，如果檢驗(yàn)結(jié)果的偏差降低10%，假陰性率將降低10%～50%[11]。通過量值溯源可大幅提高檢驗(yàn)結(jié)果的正確度，也勢必能大幅提高臨床診斷的可靠性。