液質(zhì)聯(lián)用快速檢測(cè)紅花中違禁添加物金黃粉的方法研究△

劉征輝，趙琳琳，趙云平，魏靜娜，薛天凱，郭永澤*

(1.天津市農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究所，天津 300381；2.天津海世達(dá)檢測(cè)技術(shù)有限公司，天津 300381；3.天津市現(xiàn)代中藥質(zhì)量檢驗(yàn)中心，天津 300381)

金黃粉是一種非生物合成著色劑，又名酸性橙Ⅱ、酸性金黃Ⅱ、金橙Ⅱ或酸性艷橙GR，化學(xué)名為2-萘酚偶氮對(duì)苯磺酸鈉，分子式：C16H11N2NaO4S，相對(duì)分子質(zhì)量：350.33，易溶于乙醇、乙腈等，是重要的精細(xì)化工產(chǎn)品之一。金黃粉主要用于蠶絲、毛線和羊毛的染色，羊毛、蠶絲和錦綸織物的直接印花，皮革和紙張的著色等；此外，它又是一種指示劑，醫(yī)學(xué)上常用于組織切片的染色[1]。結(jié)構(gòu)式如下：

金黃粉屬非食用色素，具有較強(qiáng)的毒性和致癌性，國(guó)內(nèi)外有關(guān)規(guī)定均嚴(yán)禁將金黃粉用于食品著色。金黃粉比通常的食用色素更不易變色褪色，而且色澤鮮艷、滲透性好、價(jià)格低廉、具有一定的堅(jiān)牢度。在國(guó)家強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)中，對(duì)金黃粉等違禁色素的檢驗(yàn)術(shù)語(yǔ)為“不得檢出”[2]。

紅花為菊科植物紅花CarthamustinctoriusL.的筒狀花冠，是一種名貴中藥材，具良好的活血通經(jīng)，散瘀止痛的功效。由于近年貨源較缺，價(jià)格上漲，不法分子常將藥廠提取過(guò)的紅花重新染色出售以次充好而作假。經(jīng)鑒定其染色為一種化工染料酸性橙Ⅱ(又名金黃粉)，本品具有可疑致癌作用，禁止在食品中使用，目前金黃粉的檢測(cè)在國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)及行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中仍是空白只有很少的幾篇文獻(xiàn)[3-9]，一般也是液相方法，沒(méi)有質(zhì)譜相關(guān)的方法研究，我們經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)摸索，建立了液質(zhì)聯(lián)用法快速檢測(cè)紅花中金黃粉的方法，該方法靈敏高、簡(jiǎn)便易行，取得了滿意的效果，適用于紅花中金黃粉的測(cè)定。

1 儀器與試藥

美國(guó)Waters Acquity UPLC/Waters Quattro Premier XE三重四級(jí)桿液質(zhì)聯(lián)用儀，配備電噴霧離子源(ESI)以及Masslynx 4.1數(shù)據(jù)采集軟件。

金黃粉orangeⅡ sodium salt(Dr.Ehrenstorfer GmbH公司，批號(hào)：50513)；乙腈(色譜純，美國(guó)fisher公司)，乙酸銨(色譜純，天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所，2016年6月19日)，超純水(milli Q超純水系統(tǒng)，過(guò)0.22 μm濾膜)。

2 方法與結(jié)果

2.1 試液的制備

2.1.1 對(duì)照品溶液的制備：精密稱取金黃粉對(duì)照品適量，加乙腈制成每1 mL含金黃粉對(duì)照品0.16 μg的溶液，備用；

2.1.2 供試品溶液的制備：取已粉碎并混勻的紅花樣品約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入0.01 mol·L-1乙酸銨溶液-乙腈(70∶30)25 mL，密塞，稱定重量，超聲提取30分鐘，放冷，再稱定重量，并補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，備用；

2.2 色譜條件

采用C18液相色譜柱：Waters BEH C18(2.1 mm×50 mm，1.7 μm)；以0.01 mol·L-1乙酸銨溶液-乙腈(70∶30)為流動(dòng)相；流速0.2 mL·min-1；柱溫為30 ℃；進(jìn)樣量10 μL。

2.3 質(zhì)譜條件

采用電噴霧離子源，負(fù)離子電離模式，毛細(xì)管電離電壓2.5 kv，取樣錐孔電壓15 v，離子源溫度110 ℃，脫溶劑溫度300 ℃，脫溶劑氮?dú)饬魉?50 L·hr-1，錐孔反吹氮?dú)?0 L·hr-1，掃描模式為多反應(yīng)監(jiān)測(cè)MRM，采集時(shí)間0～5 min，掃描時(shí)間0.3 s，間隔時(shí)間0.02 s，選擇離子m/z 327Da作為目標(biāo)離子，碰撞電壓30 v，定性離子為m/z 93Da、171Da和247Da，定量離子為m/z 156Da，通過(guò)定量離子可以準(zhǔn)確的鎖定樣品中金黃粉的含量。

圖1 金黃粉標(biāo)準(zhǔn)品總離子流圖

圖2 金黃粉定性離子提取圖

圖3 金黃粉定量離子提取圖

圖4 紅花樣品總離子流圖

圖5 紅花樣品定性離子提取圖

圖6 紅花樣品定量離子提取圖

2.4 樣品中金黃粉的定量測(cè)定

儀器方法同上，對(duì)照品溶液和供試品溶液分別進(jìn)樣10μL，在對(duì)照品質(zhì)譜圖和樣品質(zhì)譜色譜圖提取定量離子為m/z 156Da的色譜圖進(jìn)行積分，測(cè)定金黃粉質(zhì)譜色譜峰的峰面積。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品中金黃粉的積分峰面積和濃度的數(shù)據(jù)，計(jì)算樣品中金黃粉的含量。檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 市售A廠家紅花中金黃粉含量測(cè)定結(jié)果 mg·kg-1

2.5對(duì)上述確定的測(cè)定方法進(jìn)行有效性評(píng)價(jià)，其中包括專屬性、線性、精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、測(cè)定范圍。方法學(xué)研究表明，以0.01 mol·L-1乙酸銨溶液-乙腈(體積比70∶30)作為提取溶劑超聲處理樣品，采用液質(zhì)聯(lián)用法快速檢測(cè)樣品中的金黃粉的含量，檢出限為0.8 ng，定量限2.4 ng；線性范圍為2.4～240 ng(線性方程y=8.620 5x+2.346 8，r=0.999 6)；平均回收率達(dá)到96.28%(RSD=1.8，n=6)；測(cè)定紅花中金黃粉含量的測(cè)量偏差為0.26%～1.32%。

3 結(jié)果與討論

3.1實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，優(yōu)選0.01 mol·L-1乙酸銨溶液-乙腈(體積比70∶30)作為提取溶劑，采用超聲提取方法，超聲處理30 min。對(duì)目標(biāo)成分提取效果好，且方法簡(jiǎn)單易操作，回收率、重復(fù)性和提取效率都達(dá)到要求。

3.2本方法與現(xiàn)有的檢測(cè)技術(shù)[10-13]相比所具有的積極效果在于：本方法首次采用液質(zhì)聯(lián)用法快速測(cè)定紅花中金黃粉的含量，5 min內(nèi)即可完成檢測(cè)，待測(cè)峰與樣品中基質(zhì)達(dá)到很好的分離。其優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)便易行，方法操作性強(qiáng)，回收率高，重現(xiàn)性好。

3.3本方法所建立的快速檢測(cè)方法，首次采用二級(jí)質(zhì)譜，是從質(zhì)譜層面上對(duì)金黃粉的含量進(jìn)行準(zhǔn)確定性定量方法。在碰撞電壓30 v下，金黃粉的特征碎片離子峰組為m/z 93Da、171Da和247Da，同時(shí)提取離子峰m/z 156Da作為定量離子。

3.4目前以紅花為主藥入藥的中成藥有很多，本方法所述的快速檢測(cè)方法，其中的金黃粉的檢測(cè)方法可檢測(cè)含有金黃粉的紅花藥材及含有紅花的中成藥。