庫爾勒香梨離體葉片再生體系的建立

鐘 穎，馮建榮，樊新民 ，任歡喜，張秀抗，許竹葉

(石河子大學(xué)農(nóng)學(xué)院/特色果蔬栽培生理與種質(zhì)資源利用兵團(tuán)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，新疆石河子 832003)

0 引 言

【研究意義】庫爾勒香梨是新疆梨系統(tǒng)中最具代表性的優(yōu)良品種，地域性極強(qiáng)，有1 400年栽培歷史，享譽(yù)國內(nèi)外市場[1]。香梨風(fēng)味甜美，肉質(zhì)細(xì)膩，酸甜可口，已成為重要的出口創(chuàng)匯農(nóng)產(chǎn)品之一[2]。經(jīng)過長期栽培實(shí)踐，已育有一些優(yōu)良品系，但香梨樹普遍存在坐果率低、產(chǎn)量不穩(wěn)定、品質(zhì)下降等問題。常規(guī)育種預(yù)見性差、周期長、效率較低[3],利用遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)改良香梨品質(zhì)及產(chǎn)量相關(guān)特性，為分子水平改良培育香梨品種提供了很好的育種策略。但香梨轉(zhuǎn)基因育種進(jìn)展緩慢，其主要原因是至今仍未建立有效的遺傳轉(zhuǎn)化體系，因此，庫爾勒香梨葉片再生體系的建立，是進(jìn)行其遺傳轉(zhuǎn)化的前期基礎(chǔ)?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】梨離體葉片培養(yǎng)起步較晚，始于1988年。Laimer等[4]用西洋梨康弗倫斯(Conference)試管苗葉片做試驗(yàn)，在6-BA和IBA的共同作用下，部分愈傷組織能夠形成球狀結(jié)構(gòu)，但僅有少量的球狀結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)化成了不定梢。Abu-Qaoud[5]、Chevreau[6]、Predieri[7]等相繼以幾種梨試管苗的葉片為材料并成功誘導(dǎo)出不定梢，但再生率不高。Lelay等[8]于1991年在改變氮源比例的條件下，康弗倫斯不定芽再生率高達(dá) 96.7%。目前已經(jīng)有康弗倫斯、小香(Seckel)、考密斯(Comice)、帕西(Passe Crassane)等[9]歐洲梨品種取得了成功。在東方梨中，砂梨的冀蜜、豐水、二十世紀(jì)(Nijisseiki)、Kosui、Shinchu[10]和白梨的水晶梨[11]、謝花甜梨[12]及金花梨[13]等品種有了不定梢再生的報(bào)道。近幾年國內(nèi)外對(duì)庫爾勒香梨組織培養(yǎng)研究較少，目前有關(guān)庫爾勒香梨組織培養(yǎng)主要集中在離體快繁技術(shù)方面。王建新等[14]以庫爾勒香梨的莖尖作為外植體，比較了三種基本培養(yǎng)基(MS 培養(yǎng)基、改良 MS 培養(yǎng)基、1/2MS 培養(yǎng)基)對(duì)增殖的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)以改良MS培養(yǎng)基的增殖率最高，達(dá)到 66.7%。劉曉婷[15]以庫爾勒香梨葉片為外植體，是目前葉片誘導(dǎo)再生不定芽效率最高的，最佳的植物生長調(diào)節(jié)劑組合為1.0 mg/L TDZ 和0.5 mg/L NAA，葉片不定芽誘導(dǎo)率達(dá)到了77.78%。李致慧[16]指出庫爾勒香梨生根培養(yǎng)基(1/2 MS)中，暗培養(yǎng)5 d，NAA 濃度為 0.3 mg/L時(shí)生根率最高，可達(dá) 52.4%，且根粗壯長勢好，平均生根數(shù)是2.48?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】劉曉婷[15]沿用此生根配方，生根率達(dá)到 53%。研究建立庫爾勒香梨葉片誘導(dǎo)再生的穩(wěn)定高效再生體系?！緮M解決的關(guān)鍵問題】以庫爾勒香梨離體培養(yǎng)的繼代30 d左右的無菌苗葉片為材料，1/2 MS為基本培養(yǎng)基，用 TDZ與 IBA或 NAA分別組合設(shè)計(jì)配方，研究不同生長調(diào)節(jié)劑質(zhì)量濃度組合對(duì)不定芽誘導(dǎo)過程中愈傷組織形成率和不定芽形成率的影響，為完善庫爾勒香梨再生體系奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材 料

所用品種為庫爾勒香梨，由新疆農(nóng)科院輪臺(tái)國家果樹資源圃提供。3月底至4月初于資源圃采集一年生休眠枝條，將休眠枝條置于室內(nèi)進(jìn)行浸泡催芽，用于初代外植體的培養(yǎng)，參照實(shí)驗(yàn)室的消毒方法獲得無菌苗[17]，以繼代30 d左右的無菌苗葉片作為材料。

1.2 方 法

1.2.1 葉片誘導(dǎo)愈傷組織再生不定芽

庫爾勒香梨葉片誘導(dǎo)不定芽選用 1/2 MS 培養(yǎng)基，1.0 mg/L的 TDZ 分別與 IBA (0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9 mg/L)、NAA(0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9 mg/L)進(jìn)行組合。共計(jì)14個(gè)配方，每個(gè)配方接種30 個(gè)外植體，重復(fù)3次。據(jù)文獻(xiàn)[18]，使用 AgNO3有利于葉片再生不定芽，試驗(yàn)選取最優(yōu)生芽配方再附加不同質(zhì)量濃度的AgNO3(0、0.5、1 mg/L)繼續(xù)優(yōu)化，每個(gè)處理接種30個(gè)葉片，3次重復(fù)。

接種外植體均取離體培養(yǎng)的庫爾勒香梨無菌苗中上部完整幼嫩葉片，除去葉柄，垂直于葉片中脈橫切3～4刀，每片葉以遠(yuǎn)軸面接觸培養(yǎng)基，先置于暗培養(yǎng)21 d后轉(zhuǎn)移到光培養(yǎng)，每天進(jìn)行觀察記錄，第30 d繼代愈傷組織，在繼代前統(tǒng)計(jì)愈傷組織，30 d后進(jìn)行不定芽繼代，繼代前統(tǒng)計(jì)不定芽形成率，愈傷組織約0.5 cm2記為有效愈傷組織，小于則忽略不計(jì)；形成的不定芽芽尖冒出大于0.5 cm記為有效不定芽，小于則忽略不計(jì)。

試驗(yàn)光照強(qiáng)度均為 2 000 lx，溫度為(25±2)℃，每個(gè)培養(yǎng)基中均添加 30 g/L蔗糖，6.5 g/L瓊脂粉，pH 調(diào)至5.8。

1.2.2 誘導(dǎo)生根

選用1/2 MS培養(yǎng)基誘導(dǎo)香梨生根 ，為了保證用于誘導(dǎo)生根試驗(yàn)的不定苗狀態(tài)相對(duì)一致，以繼代4周的無菌苗為試材，選取的再生苗平均株高約2 cm，莖粗約0.2 cm ，分別接種到附加到 IBA(0.5 mg/L)和NAA(0.3、0.6 、0.7、0.9 、1.1 、1.4 mg/L)的6 組生根配方，每個(gè)處理接種30株無菌苗，3 次重復(fù)。暗培養(yǎng)7 d，每天進(jìn)行觀察記錄，培養(yǎng)35 d后統(tǒng)計(jì)生根率及生根數(shù)和生根長度,生根長度約大于1 cm記為生根，小于1 cm忽略不計(jì)。

培養(yǎng)條件同上。

1.3 數(shù)據(jù)處理

結(jié)果采用SPSS數(shù)據(jù)分析軟件處理數(shù)據(jù)，進(jìn)行方差分析。

愈傷組織形成率% =形成愈傷組織葉片數(shù)/接種葉片數(shù) ×100。

不定芽形成率%=再生芽總數(shù)/接種葉片數(shù)×100。

不定根再生率%=生根無菌苗數(shù)/接種無菌苗數(shù)×100。

平均生根數(shù)=總的生根條數(shù)/生根苗的數(shù)量。

平均生根長度=總的生根長度/總的生根條數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 1.0 mg/L TDZ與IBA或NAA組合對(duì)庫爾勒香梨誘導(dǎo)葉片愈傷組織的影響

接種后4～5 d 可以看到有愈傷組織開始出現(xiàn)，10 d時(shí)，葉片邊緣開始卷曲，葉片切傷處、葉柄端處開始長出少量淺黃色或淺白色愈傷組織(圖1A)，20 d時(shí)，各配方處理的葉片產(chǎn)生的愈傷組織膨大增多，顏色呈黃白色。在暗培養(yǎng)21 d后，轉(zhuǎn)至光培養(yǎng)，光培養(yǎng)5 d后愈傷組織開始由黃色向綠色轉(zhuǎn)變，少量的愈傷組織上有綠色的芽點(diǎn)(圖1B)。

研究表明，當(dāng)TDZ濃度為1.0 mg/L時(shí)，愈傷組織誘導(dǎo)率隨IBA和NAA 濃度的增加呈先上升后下降的趨勢。IBA濃度為0.5、0.6、0.7和0.8 mg/L愈傷組織誘導(dǎo)率較高，分別為100%、100%、97.78%、97.78%，這些配方之間生長效果差異不顯著，但顯著高于其他處理。IBA為0.9 mg/L組織誘導(dǎo)率最低，為87.78%，顯著低于其他處理。 含NAA的配方組合的愈傷組織誘導(dǎo)率都很高，當(dāng)NAA為0.4～0.8 mg/L愈傷組織誘導(dǎo)率均較高，為97.78%或100%，這些配方之間生長效果差異不顯著，但顯著高于其他處理。TDZ與含NAA的配方愈傷組織比TDZ與含IBA的配方愈傷組織的數(shù)量多、體積大、顏色更鮮綠。表1，圖1

表1 TDZ 1.0 mg/L與不同濃度IBA或NAA組合下庫爾勒香梨葉片再生變化
Table 1 Effects of TDZ 1.0 mg/L with different concentration of IBA or NAA on regeneration of Korla Fragrant Pear

處理Treatment 植物生長調(diào)節(jié)劑質(zhì)量濃度Plant growth regulators(mg/L)IBANAA愈傷組織形態(tài)Callus shape愈傷組織形成率Frequency of callus formation (?SE) (%)不定芽形成率Frequency of shooting (?SE) (%)10.3淡黃色緊密體積小90±2.72de27.78±1.92g20.4淡黃色緊密體積小93.33±2.72cd41.11±1.92e30.5淡黃色緊密體積小100±0.00a74.44±1.92a40.6淡黃色緊密體積小100±0.00a71.10±5.09ab50.7淡黃色緊密體積小97.78±1.57ab71.11±1.92ab60.8淡黃色緊密體積小97.78±1.57ab66.67±5.09b70.9淡黃色緊密體積小87.78±1.57e61.11±1.92c80.3黃綠色緊密體積大95.55±1.57bc41.11±1.92e90.4黃綠色緊密體積大97.78±1.57ab47.78±1.92d100.5黃綠色緊密體積大97.78±1.57ab52.22±1.92d110.6黃綠色緊密體積大100±0.00a71.11±5.09ab120.7黃綠色緊密體積大100±0.00a36.66±3.33ef130.8黃綠色緊密體積大97.78±1.57ab32.22±1.92fg140.9黃綠色緊密體積大90±2.72de51.11±1.92d

注：表中數(shù)值后的字母表示鄧肯氏新復(fù)極差法在P=0.05時(shí)檢測的顯著水平，下同

Note：Different letters behind numerical value in this Table shows significance by Duncan’s atP=0.05. The same as below

2.2 1.0 mg/L TDZ與IBA或NAA組合對(duì)庫爾勒香梨愈傷組織誘導(dǎo)不定芽的影響

轉(zhuǎn)入光下培養(yǎng)5 d,出現(xiàn)有綠色芽點(diǎn)，形狀已明顯不同于愈傷組織，愈傷組織繼續(xù)分化，逐漸形成不定芽；30 d之后，不定芽大量形成，隨后不定芽速度減緩。研究表明，當(dāng)TDZ 濃度為1.0 mg/L時(shí)，不定芽形成率隨IBA 和NAA 濃度的增加均呈先上升后下降的趨勢。當(dāng) TDZ 為1.0 mg/L時(shí)，IBA 濃度為0.3 mg/L愈傷組織也會(huì)產(chǎn)生少量的不定芽，但不定芽再分化芽很少(圖1F)，只有27.27%，顯著低于其他處理；當(dāng)IBA 為 0.5 mg/L時(shí)不定芽形成率較高(74.44%)且生長狀況良好, 再生芽多為叢生芽(圖1C)，與 IBA 為 0.6、0.7 mg/L時(shí)不定芽形成率差異不顯著(圖1D、E)；IBA 為0.8 mg/L時(shí)不定芽形成率達(dá)66.67%，與最好的配方差異顯著。NAA為0.6 mg/L時(shí)，不定芽形成率較高且生長狀況良好(圖1G)，不定芽形成率達(dá)到最高，為71.11%，顯著高于含NAA配方的其他處理。

綜合不定芽形成率和再生芽的生長狀態(tài)，確定庫爾勒香梨葉片誘導(dǎo)再生不定芽的最優(yōu)配方為1/2MS + TDZ 1.0 mg/L+ IBA 0.5 mg/L與1/2MS + TDZ 1.0 mg/L+ NAA 0.6 mg/L。表1，圖1

2.3 不同質(zhì)量濃度的AgNO3對(duì)再生不定芽形成率的影響

研究表明，附加AgNO3對(duì)不定芽再生的效果不一，含IBA的配方附加0.5 mg/L AgNO3葉片再生不定芽率有明顯提高(圖1H)，為84.92%，顯著高于未添加AgNO3的再生芽率；附加1.0 mg/L AgNO3時(shí)，不定芽形成率顯著低于未添加AgNO3的再生芽率，對(duì)不定芽的形成有抑制作用。但對(duì)含NAA的配方附加0.5和1.0 mg/L AgNO3沒有促進(jìn)不定芽的再生，其再生率反而低于未添加AgNO3的再生率(圖1I)。表2，圖1

A．10 d的再生愈傷組織;B.25 d的再生愈傷組織;C.接種在TDZ 1.0 mg/L +IBA 0.5 mg/L培養(yǎng)基上的不定芽;D. 接種在TDZ 1.0 mg/L+IBA 0.6 mg/L培養(yǎng)基上的不定芽;E. 接種在TDZ 1.0 mg/L+IBA 0.7 mg/L培養(yǎng)基上的不定芽;F. 接種在TDZ 1.0 mg/L+IBA 0.3 mg/L培養(yǎng)基上的不定芽;G. 接種在TDZ 1.0 mg/L+ NAA 0.6 mg/L培養(yǎng)基上的不定芽;H. 接種在TDZ 1.0 mg/L +IBA 0.5 mg/L+ AgNO30.5 mg/L培養(yǎng)基上的不定芽;I. 接種在TDZ 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+ AgNO30.5 mg/L培養(yǎng)基上的不定芽;J.剛接種在生根培養(yǎng)基的無菌苗 K. 35 d 無菌苗在生根培養(yǎng)基的生長情況;L. 接種在IBA 0.5 mg/L+ NAA 0.3 mg/L不定根再生;M. 接種在IBA 0.5 mg/L + NAA 0.6 mg/L不定根再生;N. 接種在IBA 0.5 mg/L + NAA 0.9 mg/L不定根再生;O. 接種在IBA 0.5 mg/L+ NAA 0.7 mg/L不定根再生;P. 接種在IBA 0.5 mg/L+ NAA 1.1 mg/L不定根再生

A.10 days’ regeneration of the tissue ; B. 25 days’ regeneration of the tissue; C. Adventitious bud inoculated in TDZ 1.0 mg/L+IBA 0.5 mg/L medium; D. Adventitious bud inoculated in regeneration of the tissue in TDZ 1.0 mg/L +IBA 0.6 mg/L medium; E. Adventitious bud inoculated in TDZ 1.0 mg/L+IBA 0.7 mg/L medium ; F. Adventitious bud inoculated in TDZ 1.0 mg/L+IBA 0.3 mg/L medium ; G. Adventitious bud inoculated in TDZ 1.0 mg/L+NAA 0.6 mg/L medium ; H. Adventitious bud inoculated in TDZ 1.0 mg/L+ IBA 0.5 mg/L+ AgNO30.5 mg/L medium ; I. Adventitious bud inoculated in TDZ 1.0 mg/L+ NAA 0.5 mg/L+ AgNO30.5 mg/L medium; J. A seedless vaccine that was first inoculated in a growing medium; K. The growth condition of the aseptic seedlings in the rooting medium for 35 days; L. Regeneration of adventitious roots inoculated in IBA 0.5 mg/L+ NAA 0.3 mg/L medium; M. Regeneration of adventitious roots inoculated in IBA 0.5 mg/L+ NAA 0.6 mg/L medium; N. Regeneration of adventitious roots inoculated in IBA 0.5 mg/L+ NAA 0.9 mg/L medium O. Regeneration of adventitious roots inoculated in IBA 0.5 mg/L+ NAA 0.7 mg/L medium; P. Regeneration of adventitious roots inoculated in IBA 0.5 mg/L+ NAA 1.1 mg/L medium

圖1 A-P庫爾勒香梨葉片誘導(dǎo)再生愈傷組織、再生不定芽、生根情況
Fig.1 A-P are the regeneration of the tissue of the Korla pear, the regeneration of the bud and the root condition

表2 不同濃度 AgNO3和最優(yōu)配方組合下庫爾勒香梨葉片再生不定芽變化

Table 2 The influence of different concentrations of AgNO3and the optimal formula on the regeneration of the leaf regeneration of the Korla pear

處理Treatment濃度 Concentration(mg/L)TDZIBANAAAgNO3不定芽形成率Frequency of adventitious bud formation(?SE) (%)110.5075.55±1.92b 210.50.584.92±1.92a 310.5165.55±1.92c410.6072.22±1.92b 510.60.541.11±1.92e610.6156.67±3.33d

2.4 0.5 mg/L IBA 和不同質(zhì)量濃度的NAA 對(duì)庫爾勒香梨再生無菌苗生根的影響

研究表明，當(dāng) IBA 濃度為0.5 mg/L時(shí)，生根率、平均生根數(shù)量和平均根長度均隨著NAA 濃度的升高呈先升高后降低的趨勢。當(dāng)NAA 濃度為 0.3 mg/L時(shí)，生根率顯著低于其他處理，為7.5%(圖1L)；隨著NAA 濃度增加，生根率也顯著提高(圖1O)，當(dāng)NAA達(dá)到0.9 mg/L時(shí)，生根指標(biāo)均達(dá)到峰值，再生苗的生根率為100%，顯著高于其他處理；平均生根數(shù)量5.66根，平均生根長度2.8 cm，且根系較其他處理更粗壯(圖1N)；當(dāng)NAA濃度繼續(xù)增加時(shí)，平均生根數(shù)量及根長又顯著下降(圖1P)。圖1，表3

表3 0.5 mg/L IBA和不同NAA濃度下庫爾勒香梨無菌苗生根變化
Table 3 The effect of 0.5 mg/L IBA and different NAA concentration on rooting of Korla pear seedlings

處理Treatment植物生長調(diào)節(jié)劑質(zhì)量濃度Plant growth regulators( mg/L)生根率Rotting rate(?SE)(%)平均生根數(shù)(株)No.of roots (?SE) 平均根長度(株)Length No.of roots(?SE) (cm)IBANAA10.50.37.5±0.02f3.1±1.24ab1.2±0.24b20.50.630±0.03e3.8±1.39ab1.34±0.38b30.50.788.9±0.02b5.06±1.98ab1.41±0.47b40.50.9100±0.00a5.66±1.46a2.8±0.66a50.51.166.7±0.03c2.53±1.82b2.45±0.96a 60.51.450±0.03d2.44±2.21b1.0±0.85b

3 討 論

劉曉婷[15]在庫爾勒香梨葉片誘導(dǎo)不定芽再生中分別比較NN69、MS、1/2MS和1/4 MS四種基本培養(yǎng)基，NN69 + 6-BA 2.5 mg/L+IBA 0.5 mg/L+山梨醇20 g/L+瓊脂 7 g/L，葉片再生率可高達(dá) 66.55%，顯著優(yōu)于其他基本培養(yǎng)基，提出NN69基本培養(yǎng)基是影響庫爾勒香梨葉片再生的最關(guān)鍵因子。在其他的梨品種上，如蘋果梨[19]和滿園香梨[20]也有研究提出NN69基本培養(yǎng)基對(duì)葉片生芽最好。試驗(yàn)采用1/2 MS 基本培養(yǎng)基，附加1.0 mg/L TDZ + 0.5 mg/L IBA + 0.5 mg/L AgNO3，葉片誘導(dǎo)愈傷組織再分化形成不定芽，其不定芽形成率可以達(dá)到84.92%。表明1/2 MS基本培養(yǎng)基也適合誘導(dǎo)庫爾勒香梨葉片再生。

試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)AgNO3濃度為 0.5 mg/L與TDZ和IBA組合，有利于庫爾勒香梨葉片愈傷組織誘導(dǎo)不定芽，秦璐等[21]在庫爾勒香梨葉片誘導(dǎo)不定芽再生中也有相似結(jié)果。另外試驗(yàn)中在AgNO3與TDZ和NAA組合時(shí)，沒有促進(jìn)庫爾勒香梨葉片愈傷組織誘導(dǎo)不定芽。但前人在金花和蒼溪兩個(gè)梨品種的葉片誘導(dǎo)不定芽中[22]，發(fā)現(xiàn)在培養(yǎng)基NN69+NAA0.2 mg/L+BA3 mg/L附加AgNO3在0～4 mg/L濃度范圍內(nèi)都對(duì)金花不定芽再生有明顯的促進(jìn)作用；蒼溪在附加AgNO30～8 mg/L濃度范圍時(shí)都表現(xiàn)出了對(duì)不定芽再生的促進(jìn)作用。說明在金花和蒼溪兩個(gè)梨品種的葉片誘導(dǎo)不定芽中含NAA的配方附加AgNO3對(duì)葉片誘導(dǎo)再生不定芽有促進(jìn)作用。與試驗(yàn)研究結(jié)果有差異或許是外植體基因型不同造成。目前IBA、NAA對(duì)植物促進(jìn)葉片不定芽再生的機(jī)制也未明確的研究結(jié)論，所以其與AgNO3如何互作在不定芽誘導(dǎo)中發(fā)揮作用還需要更進(jìn)一步的研究。

4 結(jié) 論

當(dāng)TDZ 濃度為1.0 mg/L時(shí)，愈傷組織形成率和不定芽率隨 IBA 的質(zhì)量濃度升高先增加后下降，在0.5 mg/L IBA 時(shí)愈傷組織形成率和不定芽形成率均為最高值，愈傷組織形成率均為100%，不定芽形成率為74.44%；同樣TDZ 濃度時(shí)，愈傷組織形成率和不定芽率隨 NAA 的質(zhì)量濃度也呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，在0.6 mg/L NAA時(shí)愈傷組織率達(dá)到100%，不定芽形成率達(dá)到71.11%。在兩個(gè)優(yōu)選配方中添加0.5 mg/L AgNO3時(shí)，TDZ為1.0 mg/L，IBA 為0.6 mg/L時(shí)，不定芽形成率達(dá)到84.92%；而TDZ 和NAA組合的配方添加AgNO3不定芽形成率并沒有提高。在暗培養(yǎng)7 d，IBA 為0.5 mg/L時(shí)，生根率隨著 NAA 濃度的升高呈先升高后下降的趨勢，在濃度為0.9時(shí)達(dá)到峰值，為100%，平均生根條數(shù)為5.66，平均根長度為 2.8 cm。

庫爾勒香梨葉片誘導(dǎo)不定芽再生的最佳培養(yǎng)基為1/2 MS+TDZ 1.0 mg/L+IBA 0.5 mg/L+AgNO30.5 mg/L，愈傷組織誘導(dǎo)率100%，不定芽形成率84.92%。最適宜香梨再生苗生根的培養(yǎng)配方是：1/2 MS + 0.5 mg/L IBA + 0.9 mg/L NAA，結(jié)合前期暗培養(yǎng)7 d，生根率可達(dá)100%。建立并優(yōu)化了庫爾勒香梨的再生體系，為梨的遺傳轉(zhuǎn)化研究奠定基礎(chǔ)。