免疫組化聯(lián)合沉渣包埋切片檢測在胸水診斷中的應(yīng)用價值

古彩紅，潘勇權(quán)，陳思琦，彭敏文

(惠州市第三人民醫(yī)院病理科，廣東 惠州 516002)

胸水在臨床中較為常見，其產(chǎn)生機(jī)制較為復(fù)雜，快速、準(zhǔn)確對其良惡性進(jìn)行判斷，可為疾病治療提供重要參考。在胸水的細(xì)胞病理學(xué)診斷中，對細(xì)胞性質(zhì)與來源予以明確[1]，是臨床研究重點(diǎn)。本研究為進(jìn)一步探尋胸水診斷的有效方法，對免疫組化聯(lián)合沉渣包埋切片檢測在胸水診斷中的應(yīng)用價值予以分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2015年5月至2017年3月惠州市第三人民醫(yī)院收治的可疑惡性胸水標(biāo)本41例，男17例，女24例；年齡27～78歲，平均年齡(59.32±3.67)歲；體質(zhì)量43～71 kg，平均體質(zhì)量(54.25±3.16)kg；5例為右側(cè)胸水，6例為左側(cè)胸水，30例為雙側(cè)胸水；20例胸水原因待查，21例有明確器官占位；13例為血性胸水；28例為淡黃色胸水。

1.2 檢測方法

所有標(biāo)本進(jìn)行液基細(xì)胞學(xué)檢測，然后行沉渣包埋切片聯(lián)合免疫組化檢測，最終結(jié)果均經(jīng)病理組織學(xué)及影像學(xué)明確診斷。

1)液基細(xì)胞學(xué)檢測。取胸水50 mL置于4 ℃冰箱內(nèi)，沉降30 min后，將上清液去除，以2000 r·min-1速度離心10 min后，將沉淀物置入液基保存瓶中，室溫下放置20 min。沉淀物梯度離心后放入TIB-1800型全自動液基薄層細(xì)胞制片機(jī)內(nèi)，自動制成細(xì)胞薄片，采用二甲苯透明、濕封，以光鏡予以觀察。

2)沉渣包埋切片。胸水標(biāo)本室溫下放置30 min，分離上清液，余下標(biāo)本以3000 r·min-1速度離心10 min后分離上清液，加入95%乙醇10 mL，再以2000 r·min-1速度離心10 min，濾紙包封沉渣，置入10%中性福爾馬林固定，予以常規(guī)制片，制備為4 μm厚切片。

3)免疫組化染色。胸水經(jīng)沉渣包埋切片后，以EnVision法進(jìn)行免疫組化染色，選擇福州邁新生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的CK7、CEA、Napsin-A、Villin、TTF-1、CK20、CR、MC、P120、PR、ER、Cal125等抗體及相關(guān)試劑。切片進(jìn)行常規(guī)脫蠟、水化后，抗原修復(fù)，滴加一抗后，于室溫下孵育60 min，并予以沖洗，再滴加二抗，孵育15 min后，再次沖洗，蘇木素復(fù)染，鹽酸乙醇分化，切片脫水、封片。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

使用SPSS20.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計數(shù)資料以百分率表示，比較采用卡方檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

沉渣包埋切片聯(lián)合免疫組化檢測結(jié)果顯示，41例胸水檢出38例癌細(xì)胞陽性，3例可疑陽性，陽性率為92.68%；液基細(xì)胞學(xué)檢測結(jié)果顯示，41例胸水檢出31例癌細(xì)胞陽性，10例可疑陽性，陽性率為75.61%。二種檢查方法癌細(xì)胞陽性率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=4.479，P<0.05)。

沉渣包埋切片聯(lián)合免疫組化檢出的38例癌細(xì)胞標(biāo)本中，病理診斷肺腺癌27例、胸膜惡性間皮瘤3例、胃腸道腺癌6例、卵巢漿液性乳頭狀癌1例、乳腺癌1例，見表1。

表1 胸水沉渣包埋切片免疫組化染色與病理診斷結(jié)果比較

3 討論

惡性胸水具有較高發(fā)生率，較多惡性腫瘤均伴有胸水癥狀，目前臨床用于胸水診斷的主要手段為脫落細(xì)胞學(xué)檢查，包括沉渣包埋切片、液基細(xì)胞學(xué)檢測及直接離心涂片等。直接離心涂片存在結(jié)構(gòu)不清、細(xì)胞重疊等問題，對診斷結(jié)果有較大影響；液基細(xì)胞學(xué)雖然細(xì)胞分布均勻、核染色質(zhì)較為清晰，但診斷準(zhǔn)確性仍難以達(dá)到要求。有研究[2]指出，胸水沉渣包埋石蠟切片技術(shù)對胸水檢測的陽性率高，且標(biāo)本易保存，能進(jìn)行連續(xù)切片，利于免疫組化染色，在腫瘤細(xì)胞類型判斷中具有重要作用。另有報道[3]表明，胸水沉渣包埋切片細(xì)胞形態(tài)與組織學(xué)形態(tài)相似，能最大程度保持腫瘤組織學(xué)排列結(jié)構(gòu)，可提高鑒別診斷準(zhǔn)確性。本研究中，41例胸水標(biāo)本經(jīng)沉渣包埋切片及免疫組化檢測，結(jié)果顯示38例為惡性腫瘤細(xì)胞，陽性率達(dá)到92.68%，與液基細(xì)胞學(xué)檢測結(jié)果比較，檢出率顯著較高(P<0.05)，提示胸水沉渣包埋切片聯(lián)合免疫組化檢測能有效提高細(xì)胞學(xué)診斷準(zhǔn)確率，具有較高臨床價值。

有學(xué)者[4-5]認(rèn)為，胸水沉渣包埋石蠟切片與免疫組化染色結(jié)合，并通過細(xì)胞形態(tài)特征及影像學(xué)資料，能對腫瘤細(xì)胞組織學(xué)類型以及組織來源予以明確，為疾病臨床診治提供重要參考。本研究38例癌細(xì)胞陽性胸水標(biāo)本中，有27例為肺來源腺癌，構(gòu)成比為71.05%，可見胸水沉渣包埋切片同CK20、CK7、CEA、Napsin-A、Villin、TTF-1等免疫組化標(biāo)記聯(lián)合檢測，在肺腺癌診斷鑒別中具有確切價值。有研究[6]指出，Napsin-A、TTF-1在原發(fā)性肺腺癌中的表達(dá)，特異度及敏感度較高；Villin作為一種在腸上皮分布的絨毛蛋白，在腸腺癌診斷鑒別中有重要作用；CEA在腺癌，特別是肺腺癌、消化道腺癌中表達(dá)較高。CK20(+)、CK7(-)、CEA(+)、Villin(+)、TTF-1(-)提示胃腸道腺癌，本研究中，胸水中胃腸道腺癌共6例，構(gòu)成比為15.79%，僅低于肺腺癌。有研究[7-8]指出，肺腺癌同胸膜間皮瘤具有相似細(xì)胞學(xué)形態(tài)，在胸水細(xì)胞學(xué)診斷中，兩者鑒別具有較大難度，而通過沉渣包埋切片聯(lián)合標(biāo)記TTF-1、CEA、CR、MC等可予以明確診斷。TTF-1(-)、CEA(-)、CR(+)、MC(+)可提示間皮來源，本研究通過沉渣包埋切片與免疫組化檢測發(fā)現(xiàn)有3例患者為惡性間皮瘤，且標(biāo)記CK20(-)、CK7(+)、Cal125(+)、CEA(-)、TTF-1(-)發(fā)現(xiàn)1例卵巢癌來源，通過標(biāo)記P120(+)、PR(+)、ER(+)、CK7(+)、TTF-1(-)、CEA(-)發(fā)現(xiàn)1例乳腺癌來源，提示多種抗體聯(lián)合應(yīng)用性免疫組化標(biāo)記，可對部分抗體表達(dá)意義不明確造成的誤差予以克服。

綜上所述，胸水沉渣包埋切片聯(lián)合免疫組化檢測，可有效提高胸水細(xì)胞學(xué)診斷準(zhǔn)確度，同時可對腫瘤細(xì)胞組織來源進(jìn)行判斷，具有較高臨床應(yīng)用價值。