潔凈區(qū)消毒劑的選擇和效力確認(rèn)

周建華 謝琦 王琪

摘 要 目的：探討化學(xué)消毒劑的搭配和使用方法，以提高潔凈區(qū)消毒效果。方法：通過(guò)表面消毒實(shí)驗(yàn)確認(rèn)75%乙醇、異丙醇、0.1%新潔爾滅、1% 84消毒液、0.4%酸酚和5%殺孢子劑對(duì)各類微生物在玻璃、不銹鋼和彩鋼板上的消毒效力。結(jié)果：0.4%酸酚和5%殺孢子劑在三種表面材質(zhì)上對(duì)各類微生物的殺滅效果最佳，0.1%新潔爾滅和1% 84消毒液次之，75%乙醇和異丙醇對(duì)芽胞桿菌和霉菌的殺滅效果較差，但腐蝕性最小。結(jié)論：在日常清潔中，可以選擇消毒效力最強(qiáng)的0.4%酸酚和5%殺孢子劑交替使用，A級(jí)區(qū)域內(nèi)可以選擇75%乙醇和異丙醇交替使用。

關(guān)鍵詞 消毒劑 潔凈區(qū) 消毒效力

中圖分類號(hào)：TQ460.82 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1006-1533（2018）11-0103-04

Selection of disinfectants for clean area and their effectiveness confirmation

ZHOU Jianhua*， XIE Qi， WANG Qi

（SPH No.1 Biochemical & Pharmaceutical Co.， Ltd.， Shanghai 200240， China）

ABSTRACT Objective： To study the compatibility and usage of the chemical disinfectants to enhance the effect of disinfection of clean area. Methods： Disinfection efficacy of six disinfectants including ethanol， isopropanol， benzalkonium bromide solution， 84 disinfectant， phenylphenol and sporicide at different concentrations against the tested microorganisms was verified by surface disinfection experiment. Results： Phenylphenol at 0.4% and sporicide at 5% possessed the best effectiveness of disinfection on the surface of all three materials， 0.1% benzalkonium bromide solution and 1% 84 disinfectant were the second， while 75% ethanol and isopropanol did not show good effectiveness of disinfection against bacillus and fungus tested but less corrosivity than the others. Conclusion： Phenylphenol at 0.4% and sporicide at 5% should be alternatively used in daily disinfection while 75% ethanol and isopropanol can be alternatively used in level A clean area.

KEy WORDS disinfectant； clean area； disinfection effectiveness

在無(wú)菌藥品生產(chǎn)過(guò)程中，為了降低微生物污染的風(fēng)險(xiǎn)，最切實(shí)的工作就是針對(duì)潔凈區(qū)的清潔和消毒。在《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（2010年修訂）》中，強(qiáng)調(diào)了潔凈區(qū)清潔和消毒的重要性，并明確指出化學(xué)消毒的不可替代性，更規(guī)定了所使用的消毒劑種類必須多于一種[1]。

傳統(tǒng)的潔凈區(qū)消毒劑選擇一般均采用常見的消毒劑進(jìn)行搭配使用[2-3]，例如84消毒液、新潔爾滅、洗必泰等，而有些消毒劑被證明無(wú)法很好地殺滅能夠形成芽胞的細(xì)菌[4]。隨著科技的發(fā)展，化學(xué)消毒劑的相關(guān)技術(shù)也在不斷進(jìn)步[5]，因此，從降低風(fēng)險(xiǎn)的角度出發(fā)，必須要保證所選用的消毒劑能夠?qū)Ω黝惣?xì)菌都起到較好的殺滅效果。

由于潔凈區(qū)環(huán)境、條件、設(shè)備材質(zhì)的不同，為了更好地降低質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)，保證消毒效果，不但需要積極嘗試使用新型的消毒劑，并且要對(duì)新老消毒劑的消毒效果進(jìn)行科學(xué)的評(píng)價(jià)[6]，依據(jù)評(píng)價(jià)的結(jié)果作出最佳選擇。

消毒劑的消毒效力確認(rèn)是用來(lái)評(píng)價(jià)消毒劑消毒效果的主要方式，有多種實(shí)驗(yàn)方法，包括采用稀釋實(shí)驗(yàn)法，標(biāo)準(zhǔn)懸浮實(shí)驗(yàn)法，表面消毒實(shí)驗(yàn)法[7]等，各方法均能適用于對(duì)消毒劑效力的確認(rèn)，本研究將以表面消毒實(shí)驗(yàn)法進(jìn)行消毒劑效力的確認(rèn)。

1 材料與方法

1.1 設(shè)備

ESCO生物安全柜（藝斯高（上海）貿(mào)易有限公司）；MIR-254恒溫培養(yǎng)箱（松下冷鏈（大連）有限公司）；XG1.D脈動(dòng)真空滅菌器（山東新華醫(yī)療器械股份有限公司）；0.22 mm無(wú)菌過(guò)濾器（頗爾過(guò)濾器（北京）有限公司）。

1.2 培養(yǎng)基和試驗(yàn)菌株

胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基（上海中科昆蟲生物技術(shù)開發(fā)有限公司）；沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基、氯化鈉-蛋白胨（廣東環(huán)凱微生物科技有限公司）；硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基、胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基（美國(guó)默克公司）；D/E肉湯（美國(guó)BD公司）。

所有試驗(yàn)菌株均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。將金黃色葡萄球菌（CMCC（B）26003）、銅綠假單胞菌（CMCC（B）10104）、枯草芽胞桿菌（CMCC（B）63501）接種至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基于30～35 ℃培養(yǎng)18～24 h；將白色假絲酵母（CMCC（F）98001）接種至沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基于20～25 ℃培養(yǎng)24～48 h；將黑曲霉（CMCC（F）98003）接種至沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基于20～25 ℃培養(yǎng)7 d，然后用無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液（含0.05%吐溫80，pH 7.0）3～5 ml將孢子洗脫并制成菌懸液；上述菌種均用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液稀釋至濃度為107～108 cfu/ml的菌液。

1.3 消毒劑和中和劑

本實(shí)驗(yàn)所使用的消毒劑和中和劑[8]見表1。

1.4 中和劑驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

中和劑驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)選用金黃色葡萄球菌作為試驗(yàn)菌，實(shí)驗(yàn)方法見表2。

1.5 消毒劑效力實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)按表3分為3組進(jìn)行，其中實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行3份平行試驗(yàn)。

按消毒劑效力實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行操作，其中細(xì)菌使用胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基，真菌使用沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，細(xì)菌于30～35 ℃下培養(yǎng)3 d，真菌于20～25 ℃下培養(yǎng)5 d，觀察并計(jì)數(shù)。

消毒劑的表面消毒效力E=lg（陽(yáng)性對(duì)照組菌落計(jì)數(shù)）-lg（實(shí)驗(yàn)組菌落計(jì)數(shù)）。當(dāng)E>3時(shí)，即代表該消毒劑在所測(cè)試物體表面上可以殺滅99.9%以上的試驗(yàn)微生物。

1.6 表面材料的處理

表面材料為玻璃、不銹鋼和彩鋼板，均為1 cm×3 cm的長(zhǎng)方形薄片。使用0.2 mol/L氫氧化鈉對(duì)材料進(jìn)行浸泡12 h以上，浸泡后清洗并于121 ℃滅菌30 min。

2 結(jié)果

2.1 中和劑驗(yàn)證

以金黃色葡萄球菌為試驗(yàn)菌，根據(jù)表1對(duì)中和劑的中和效果進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果表明，編號(hào)1、6、7、8均無(wú)菌生長(zhǎng)；編號(hào)3、4、5均有菌生長(zhǎng)，且菌落數(shù)相差在10%以內(nèi)；編號(hào)3、4、5所生長(zhǎng)的菌落數(shù)都多于編號(hào)2菌落數(shù)103以上（表4），表明所選擇的中和劑能夠起到預(yù)期的中和作用。

2.2 消毒劑效力

在3種表面材質(zhì)上的實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表5。結(jié)果表明，75%乙醇和異丙醇作為一種常用消毒劑，對(duì)枯草芽胞桿菌、黑曲霉的消毒效果都不理想，對(duì)其他微生物的消毒效果也略微弱于其他消毒劑，但這兩種醇類消毒劑不具有腐蝕性，不易對(duì)不銹鋼和彩鋼板等金屬材質(zhì)造成損傷，比較適用于對(duì)精密設(shè)備和儀器進(jìn)行消毒。

5%殺孢子劑的消毒效果最好，其次為0.4%酸酚，他們對(duì)各類微生物在3種不同表面材質(zhì)上都能起到很好的殺滅作用。

為了降低潔凈區(qū)內(nèi)各類微生物污染的風(fēng)險(xiǎn)，同時(shí)考慮所應(yīng)用的材質(zhì)，根據(jù)消毒效力確認(rèn)的結(jié)果，日常清潔消毒可以使用0.4%酸酚和5%殺孢子劑交替使用，在A級(jí)區(qū)內(nèi)可以使用75%乙醇和異丙醇交替使用進(jìn)行消毒。

3 討論

由于長(zhǎng)時(shí)間使用同一種消毒劑會(huì)使微生物產(chǎn)生耐藥性，造成消毒效果下降[9]，因此，企業(yè)所使用的化學(xué)消毒劑不應(yīng)一成不變。隨著國(guó)內(nèi)外化學(xué)消毒劑技術(shù)的不斷進(jìn)步，應(yīng)當(dāng)關(guān)注相關(guān)領(lǐng)域的發(fā)展，以便不斷提高潔凈區(qū)環(huán)境控制的管理水平。

對(duì)于消毒劑的優(yōu)化選擇有時(shí)不僅僅局限于其消毒效力，還應(yīng)該從消毒劑本身的質(zhì)量控制角度出發(fā)[10]，在日常環(huán)境監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)和分析的基礎(chǔ)上，選擇更適合當(dāng)前環(huán)境的消毒劑，同時(shí)做好相應(yīng)的確認(rèn)和驗(yàn)證，保證消毒劑的使用效果能夠達(dá)到預(yù)期，并且在應(yīng)用后對(duì)使用情況進(jìn)行監(jiān)測(cè)和回顧分析，有效降低潔凈區(qū)微生物污染風(fēng)險(xiǎn)。

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