清胰湯與善寧聯(lián)用對(duì)重癥急性胰腺炎大鼠的治療作用*

錢 濤 李昌陽(yáng)

江蘇省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院 江蘇 南京 210028

本文旨在探討清胰湯與善寧聯(lián)用對(duì)重癥急性胰腺炎的作用及機(jī)制，為中醫(yī)藥的推廣提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料：牛黃膽酸鈉購(gòu)自Sigma公司，清胰湯由柴胡、白芍、黃連、延胡索、生大黃各15g，黃芩、木香、芒硝各10g組成，由江蘇省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院中藥房煎煮濃縮至每ml相當(dāng)于1g生藥。組織裂解液購(gòu)自碧云天，COX-2兔抗大鼠多克隆抗體、β-act in小鼠抗大鼠多克隆抗體、HRP標(biāo)記的羊抗小鼠二抗、HRP標(biāo)記的羊抗兔二抗、IL-6 ELISA試劑盒均購(gòu)自南京拓科達(dá)生物科技有限公司，ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒購(gòu)自Phar macia公司。

1.2 動(dòng)物分組及處理：普通級(jí)Wist ar大鼠，雌雄各半，50只（南京青龍山繁殖場(chǎng)提供），體重250±50g，隨機(jī)分為5組：假手術(shù)組（SO組）；重癥急性胰腺炎組（SAP組）；清胰湯組（QY組）；善寧組（SN組）；清胰湯聯(lián)合善寧組（QY＋SN組）。SO組開(kāi)腹后輕挑十二指腸，然后關(guān)腹。SAP組、QY組、SN組和QY＋SN組均制作SAP模型。在造模成功后，QY組立即胃注清胰湯（10ml/kg），SN組立即皮下注射善寧（16μg/kg），QY+SN組立即等量胃注清胰湯和皮下注射善寧，各組6h和12h后分別再次給藥，SO組和SAP組予以等量生理鹽水處理。術(shù)后24h心臟取血處死大鼠，收集血樣，液氮保存胰腺標(biāo)本。

1.3 動(dòng)物模型建立：采用文獻(xiàn)方法[1]建立SAP模型。

1.4 檢測(cè)指標(biāo)和方法：血清淀粉酶（AMY）用10ml注射器刺入心臟采血4～8ml,不加抗凝劑,血凝后4℃下3000r/min離心10min,取血清不少于0.5ml，采用全自動(dòng)生化分析儀器測(cè)定。胰腺組織COX-2蛋白質(zhì)表達(dá)水平的檢測(cè)：采用west ern bl ot法測(cè)定。用組織細(xì)胞裂解液按說(shuō)明書(shū)要求在玻璃勻漿器中研磨胰腺組織，提取組織總蛋白，按5∶1的比例加入6×l oading buf f er，煮沸5～10min，電泳分離蛋白、轉(zhuǎn)膜、封閉，依次加一抗（COX-2兔抗大鼠多克隆抗體，β-act in小鼠抗大鼠多克隆抗體，工作濃度分別為1∶200、1∶400），二抗（HRP標(biāo)記的羊抗兔二抗，工作濃度l∶2000,HRP標(biāo)記的羊抗小鼠二抗，工作濃度1∶5000），ECL發(fā)光法檢測(cè)，顯影于柯達(dá)膠片，用COX-2與β-act in的灰度密度比值表示結(jié)果。血清IL-6表達(dá)檢測(cè)：按上述方法取血清液，按照ELISA試劑盒進(jìn)行操作。胰腺病理學(xué)表現(xiàn)：中性甲醛固定，石蠟包埋切片，HE染色，高倍鏡下觀察組織結(jié)構(gòu)變化，并參照Amy法進(jìn)行評(píng)分。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，所有數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，多組間比較采用單因素方差分析（one-way ANOVA），兩兩比較方差齊時(shí)采用 LSD（Last Signif icant Dif f er ence）法檢驗(yàn)，方差不齊采用Dunnett T3方法。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清AMY水平：各組別間比較，血清AMY水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義：與SO組的血清AMY水平相比，其余各組血清AMY水平均升高（P＜0.01）；QY組和SN組單給藥治療后血清AMY水平較SAP組降低（P＜0.01）；QY＋SN組血清AMY水平又較單給藥組降低（P＜0.01）。見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠血清 AMY水平（，U/L）

表1 各組大鼠血清 AMY水平（，U/L）

注：與SO組比較，a P＜0.01；與SAP組比較，bP＜0.01；與QY組和SN組比較，c P＜0.01。

?

2.2 COX-2和IL-6的水平：與SO組相比，其余各組胰腺COX-2蛋白質(zhì)的表達(dá)和血清IL-6水平均升高（P＜0.01）；與SAP組相比，QY組和SN組胰腺COX-2蛋白質(zhì)的表達(dá)和血清IL-6水平均降低（P＜0.01或P＜0.05）；與單給藥組相比，QY＋SN組胰腺COX-2蛋白質(zhì)的表達(dá)和血清IL-6水平進(jìn)一步降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01或P＜0.05）。見(jiàn)表2、表3。

表2 COX-2蛋白半定量值（cox-2/β-act in比值）（)

表2 COX-2蛋白半定量值（cox-2/β-act in比值）（)

注：與SO組比較，a P＜0.01；與SAP組比較，b P＜0.01；與QY組和SN組比較，c P＜0.01。

?

表3 IL-6檢測(cè)值（，ng/L）

表3 IL-6檢測(cè)值（，ng/L）

注：與SO組比較，a P＜0.01；與SAP組比較，b P＜0.01；與QY組和SN組比較，c P＜0.01。

?

2.3 病理?yè)p傷程度：分述如下。

2.3.1 肉眼觀察：術(shù)后24h剖腹觀察，SO組大鼠胰腺肉眼觀光澤度好，無(wú)水腫，腹腔內(nèi)少量清亮腹水。SAP組胰腺水腫、出血明顯，胰腺及網(wǎng)膜組織大量皂化斑，血性腹水形成，胃腸擴(kuò)張，明顯充血。QY組和SN組，胰腺損害較SAP組減輕,QY＋SN組病損程度進(jìn)一步減輕。

2.3.2 電鏡下觀察：術(shù)后24h剖腹觀察，SO組大鼠的胰腺組織結(jié)構(gòu)清晰，細(xì)胞形態(tài)正常，間質(zhì)無(wú)明顯水腫，無(wú)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，無(wú)出血壞死。SAP組大鼠的胰腺可見(jiàn)間質(zhì)明顯充血水腫，間質(zhì)增寬，有滲出物，腺泡細(xì)胞結(jié)構(gòu)模糊；間質(zhì)及腺泡大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及出血，可見(jiàn)微血栓形成；大片組織壞死。QY組和SN組癥狀有所減輕，QY＋SN組進(jìn)一步減輕。

2.3.3 損傷評(píng)分：SAP組大鼠的胰腺組織病理?yè)p害評(píng)分顯著高于SO組(P＜0.01)，QY組和SN組胰腺病理?yè)p害評(píng)分減輕，QY＋SN組進(jìn)一步減輕(P＜0.01)。見(jiàn)表4。

表4 大鼠胰腺病理?yè)p害評(píng)分（，分)

表4 大鼠胰腺病理?yè)p害評(píng)分（，分)

注：與SO組比較，a P＜0.01；與SAP組比較，b P＜0.01；與QY組和SN組比較，c P＜0.01。

?

3 討論

清胰湯化裁于大承氣湯，方中大黃、芒硝攻里通下，瀉三焦之熱；柴胡、白芍、木香調(diào)氣疏肝，緩急止痛；黃芩、黃連清肝胃之熱，延胡索活血行氣。全方疏肝理氣，清熱利濕，通里攻下，活血化瘀解毒。善寧是一種人工合成的8肽生長(zhǎng)抑素類似物，具有顯著抑制腸肽釋放及胃腸、胰內(nèi)外分泌的功能。具有刺激胰腺細(xì)胞修復(fù)的作用，目前臨床上已常規(guī)應(yīng)用于急性胰腺炎的治療。

本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：SAP大鼠血清淀粉酶水平、COX-2和IL-6的表達(dá)明顯高于SO組，我們應(yīng)用清胰湯和善寧治療后，血清淀粉酶水平、COX-2和IL-6的表達(dá)均降低，清胰湯聯(lián)合善寧治療后發(fā)現(xiàn)各水平進(jìn)一步降低。在病理?yè)p傷評(píng)分方面，變化趨勢(shì)與上述變化趨勢(shì)一致，清胰湯和善寧單給藥治療，病理學(xué)評(píng)分均降低，兩者聯(lián)合治療后病理?yè)p傷和評(píng)分進(jìn)一步減輕。所以本研究提示，清胰湯和善寧均能有效地減輕SAP大鼠胰腺的損傷，但兩者聯(lián)合治療的效果明顯優(yōu)于單藥使用，其治療機(jī)制可能與抑制炎癥因子釋放有關(guān)，從而減輕胰腺組織的損傷。這為中西醫(yī)結(jié)合治療胰腺炎提供了理論依據(jù)。