PTEN基因多態(tài)性與抑郁癥風(fēng)險的相關(guān)性研究

鄭吉鋒 段金鳳 馮彩琴

作者單位：1浙江省紹興市第七人民醫(yī)院心身三科（鄭吉鋒）、精神四科（馮彩琴）（紹興 312000）；2浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院精神衛(wèi)生科（杭州 310003）

抑郁癥患者的臨床特征主要包括持續(xù)緩慢的思維、抑郁情緒以及認(rèn)知障礙，對日常生活活動的興趣下降[1]。抑郁癥的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，與多種因素有關(guān)，如年齡、性別、婚姻狀況、種族、教育、環(huán)境和遺傳因素等，其中遺傳因素是目前研究者們關(guān)注的熱點之一。PTEN基因（gene of phosphate and tension homology deleted on chrom-some ten，PTEN）是一種腫瘤抑制磷酸酶，具有蛋白磷酸酶和脂質(zhì)磷酸酶活性[2-4]。本研究根據(jù)HapMap數(shù)據(jù)庫中的漢族人群的基因組數(shù)據(jù)，選擇PTEN基因中的三個常見多態(tài)性位點，分別是rs2735343 G＞C位點、rs112025902 A＞T位點以及rs701848 T＞C位點，分析這三個位點基因多態(tài)性與抑郁癥患病風(fēng)險之間的相關(guān)性，報道如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選擇2013年5月—2016年8月我院收治的抑郁癥患者240例為研究組，年齡18～65歲，平均（51.54±8.75）歲；平均發(fā)病年齡（35.86±8.95）歲，平均病程（9.25±4.85）年；有抑郁癥家族史31例，占12.92%。招募同期健康人240名為對照組，年齡22～68歲，平均（52.20±9.14）歲；有抑郁癥家族史 7例，占2.92%。兩組年齡、性別、受教育程度等一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），兩組抑郁癥家族史比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=16.461，P=0.000），見表1。本研究獲得我院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，所有參與研究的受試者均簽署知情同意書。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn) 抑郁癥納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合抑郁癥診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]；（2）漢密爾頓抑郁量表（HAMD）[6]≥16 分者；（3）年齡≥18 歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）有嚴(yán)重的心血管疾病者；（2）酒精和藥物成癮者；（3）有腦器質(zhì)性疾病者；（4）有藥物濫用史者；（5）懷孕與哺乳期婦女。

2 方法

表1 研究組與對照組基線特征比較[n（%）]

2.1 PTEN基因中rs2735343位點、rs112025902位點以及rs701848位點基因多態(tài)性檢測 采用EDTA抗凝管采集受所有試者空腹肘靜脈血5mL左右，使用Qiagen血液DNA提取試劑盒（貨號51104）提取血液基因組 DNA（gDNA），并使用 Nanodrop2000（Thermo Scientifi，美國）檢測 DNA濃度，-20℃保存。參考文獻(xiàn)設(shè)計PTEN基因的rs2735343位點、rs112025902位點以及rs701848位點PCR擴(kuò)增引物，擴(kuò)增PTEN基因rs2735343位點引物序列為上游：5'-CTCTTCCTGTTCTCCATCGTG-3'，下游：5'-TT CTCCAGGATTTCGTCTGC-3'。擴(kuò)增 PTEN基因rs112025902位點的引物序列為上游：5'-CCGTTCGG AGATTATTCGT-3'，下游：5'-GGTCACGTCAAGTCG ATCCAT-3'。擴(kuò)增PTEN基因rs701848位點的引物序列為上游：5'-GTAGAAATTGTCCTACATGTGC-3'，下 游 ：5'-AGGTCAGACCACAGCTAGTGAA-3'。PCR反應(yīng)體系為：初始變性94℃，2min；PCR共35個循環(huán)，分別為 94℃變性 30s，60℃退火 45s，72℃延伸30s，然后72℃，10min。PCR反應(yīng)完成后將PCR產(chǎn)物送上海桑尼生物科技有限公司測序，并分析各位點單核苷酸多態(tài)性。

2.2 抑郁癥狀評估 所有患者的抑郁癥狀采用漢密爾頓抑郁量表[6]（Hamilton depression scale，HAMD）進(jìn)行抑郁癥狀評估。該量表包含7類因子結(jié)構(gòu)，分別為：（1）焦慮/軀體化：由精神性焦慮、軀體性焦慮、胃腸道癥狀、疑病和自知力等5項組成；（2）體質(zhì)量：即體質(zhì)量減輕一項；（3）認(rèn)識障礙：由自罪感、自殺、激越、人格解體和現(xiàn)實解體、偏執(zhí)癥狀和強迫癥狀等6項組成；（4）日夜變化：僅日夜變化一項；（5）阻滯：由抑郁情緒、工作和興趣、阻滯和性癥狀等4項組成；（6）睡眠障礙：由入睡困難、睡眠不深和早醒等3項組成；（7）絕望感：由能力減退感、絕望感和自卑感等3項組成。本研究中比較各單核苷酸多態(tài)性（SNP）位點研究對象的HAMD總分、核心癥狀因子評分、睡眠因子評分、焦慮因子評分、焦慮/軀體化因子評分、與抑郁有關(guān)因子評分等6項。

2.3 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS20.0統(tǒng)計軟件包，計數(shù)資料以[n（%）]表示，組間比較采用χ2檢驗；計量資料以（±s） 表示，組間比較采用t檢驗，計算比值比（OR）以及95%置信區(qū)間（CI）；使用擬合χ2檢驗判定基因型及等位基因頻率是否符合Hardy-Weinberg平衡，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié) 果

3.1 PTEN基因多態(tài)性比較 PTEN基因的rs2735343位點、rs112025902位點以及rs701848位點各基因型和等位基因頻率的分布符合Hardy-Weinberg平衡（P＞0.05）。研究組與對照組 rs2735343位點、rs112025902位點以及rs701848位點各基因型和等位基因頻率之間的差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。rs2735343位點的GC+CC基因型與抑郁風(fēng)險增加相關(guān)（P=0.000，OR=2.710，95%CI=1.731～4.253），該位點C等位基因與抑郁風(fēng)險增加有關(guān)（P=0.006，OR=1.437，95%CI=1.097～1.884）。rs112025902 位點 AT+TT基因型與抑郁風(fēng)險增加相關(guān)（P=0.000，OR=2.918，95%CI=1.885～4.528），該位點T等位基因與抑郁風(fēng)險增加有關(guān)（P=0.000，OR=2.862，95%CI=2.183～3.754）。rs701848位點TC+CC基因型與抑郁風(fēng)險增加相關(guān)（P=0.000，OR=4.498，95%CI=2.866～7.079），該位點C等位基因與抑郁風(fēng)險增加有關(guān)（P=0.000，OR=3.862，95%CI=2.928～5.096），見表 2。測序結(jié)果見圖1。

圖 1 PTEN基因 rs2735343位點、rs112025902位點以及rs701848位點測序結(jié)果圖

3.2 PTEN基因多態(tài)性與抑郁癥患者抑郁癥狀的相關(guān)性 抑郁癥患者中rs2735343位點C等位基因攜帶者（GG+CC）的HAMD總分和與抑郁有關(guān)的因子評分顯著低于GG基因型攜帶者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=11.837、5.191；P=0.000、0.000）。rs112025902 位點T等位基因攜帶者（AT+TT）的HAMD總分與焦慮因子評分顯著高于AA基因型患者（t=7.362、5.640；P=0.000、0.000）。rs701848 位點 C 等位基因攜帶者（TC+CC）的HAMD總分與焦慮因子評分顯著高于TT基因型患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（t=8.010、6.051；P=0.000、0.000），見表 3。

4 討論

近年來隨著生活節(jié)奏的加快以及生活壓力的加大，抑郁癥的發(fā)病率逐漸上升[7]。抑郁癥是一種常見的慢性復(fù)發(fā)性腦部疾病，其臨床癥狀主要是持久性的輕度和重度抑郁，嚴(yán)重影響患者健康和生活質(zhì)量[8]。目前，對于抑郁癥的研究已經(jīng)深入至分子遺傳學(xué)水平，其目的是尋找有效的分子靶標(biāo)，從分子遺傳學(xué)的角度剖析抑郁癥的發(fā)病機(jī)制，為其治療和預(yù)防提供依據(jù)[9-10]。

本研究顯示，抑郁癥患者與正常人PTEN基因的rs2735343位點、rs112025902位點以及rs701848位點各基因型和等位基因頻率之間的差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，PTEN基因的rs2735343位點的GC+CC基因型與抑郁風(fēng)險增加相關(guān)，該位點C等位基因與抑郁風(fēng)險增加有關(guān)（P＜0.05）；rs112025902位點AT+TT基因型與抑郁風(fēng)險增加相關(guān)，該位點T等位基因與抑郁風(fēng)險增加有關(guān)（P＜0.05）；rs701848位點TC+CC基因型與抑郁風(fēng)險增加相關(guān)，該位點C等位基因與抑郁風(fēng)險增加有關(guān)；與Liu等[11]研究結(jié)果一致。另外，抑郁癥患者中rs2735343位點C等位基因攜帶者（GG+CC）的HAMD總分和與抑郁評分相關(guān)的因素的評分顯著低于GG基因型攜帶者，rs112025902位點T等位基因攜帶者（AT+TT）的HAMD總分與焦慮因子評分顯著高于AA基因型患者，rs701848位點C等位基因攜帶者（TC+CC）的HAMD評分與焦慮因子評分顯著高于TT基因型患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。從分子病理學(xué)角度分析認(rèn)為，可能是由于PTEN負(fù)調(diào)節(jié)的蛋白激酶B（AKT）信號通路的過度激活導(dǎo)致細(xì)胞轉(zhuǎn)化，但是這種途徑在精神疾病中被抑制，導(dǎo)致海馬干細(xì)胞中樞神經(jīng)元的功能下降，從而導(dǎo)致精神疾病的發(fā)生[12-14]。PTEN蛋白具有磷脂酶和蛋白磷酸酶活性，磷脂酰肌醇二磷酸（PIP2）在磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）的磷酸化中產(chǎn)生磷脂酰肌醇三磷酸（PIP3），導(dǎo)致AKT的激活[15]，PTEN發(fā)揮其磷脂酶活性，導(dǎo)致PIP3的脫磷酸化，從而產(chǎn)生對AKT信號通路的抑制作用[16]。有研究表明[17]，在卒中后抑郁期間，AKT磷酸化的神經(jīng)元低于正常水平，細(xì)胞凋亡的調(diào)控使杏仁核神經(jīng)細(xì)胞凋亡現(xiàn)象非常明顯，PTEN可以抑制激活信號向AKT的傳遞，導(dǎo)致神經(jīng)元凋亡。有學(xué)者進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，在海馬神經(jīng)元的培養(yǎng)過程中，PTEN蛋白過表達(dá)的神經(jīng)元AKT水平逐漸降低，而沒有PTEN蛋白表達(dá)的神經(jīng)元AKT的水平顯著升高[18]。有研究者發(fā)現(xiàn)，PTEN過度表達(dá)的神經(jīng)元與PTEN低表達(dá)的神經(jīng)元相比，其谷氨酸誘導(dǎo)的神經(jīng)元死亡數(shù)更多，表明PTEN可以通過AKT依賴性信號通路調(diào)節(jié)神經(jīng)元的存活和死亡[19]。PTEN基因的常見突變位點位于C末端編碼區(qū)，在外顯子7和8上，這些區(qū)域主要負(fù)責(zé)調(diào)節(jié)PTEN的穩(wěn)定性和磷酸酶的生物活性[20]。PTEN基因中的常見SNP可能通過影響遺傳剪接參與蛋白質(zhì)表達(dá)，從而進(jìn)一步影響細(xì)胞周期的調(diào)控，筆者認(rèn)為PTEN基因中相關(guān)位點基因多態(tài)性影響這一過程，導(dǎo)致蛋白質(zhì)表達(dá)的變化，從而導(dǎo)致各種疾病的發(fā)生。

表2 PTEN基因rs2735343位點、rs112025902位點以及rs701848位點多態(tài)性比較[例（%）]

表3 PTEN基因多態(tài)性與抑郁癥患者抑郁癥狀的相關(guān)性（分，±s）

表3 PTEN基因多態(tài)性與抑郁癥患者抑郁癥狀的相關(guān)性（分，±s）

注：HAMD：漢密爾頓抑郁量表

SNP位點基因型rs2735343 G＞C基因型GG GC+CC t值P值rs112025902 A＞T基因型AA AT+TT t值P值rs701848 T＞C基因型TT TC+CC t值P值HAMD總分 核心癥狀因子評分 睡眠因子評分 焦慮因子評分 焦慮/軀體化因子評分 與抑郁有關(guān)的因子評分26.01±4.01 21.54±4.26 11.837 0.000 7.91±2.65 7.98±3.05 0.268 0.789 4.42±1.20 4.39±1.29 0.264 0.792 4.35±1.87 4.38±2.01 0.169 0.866 4.05±1.21 3.89±1.35 1.367 0.172 5.51±1.94 4.68±1.54 5.191 0.000 25.41±4.98 28.54±4.31 7.362 0.000 7.88±3.65 7.95±4.12 0.197 0.844 4.12±1.35 4.19±2.05 0.442 0.659 3.61±2.03 4.65±2.01 5.640 0.000 3.75±1.22 3.81±2.15 0.376 0.707 4.59±2.06 4.72±2.13 0.680 0.497 4.65±2.12 4.76±1.89 0.600 0.549 26.25±4.32 29.42±4.35 8.010 0.000 8.24±3.25 8.09±3.36 0.497 0.619 4.31±1.68 4.39±1.59 0.536 0.592 3.48±2.24 4.64±1.95 6.051 0.000 4.19±1.25 3.99±1.31 1.711 0.088

綜上所述，PTEN基因的rs2735343位點、rs112025902位點以及rs701848位點多態(tài)性可能與抑郁癥以及抑郁癥狀的風(fēng)險相關(guān)。