花生殼提取物對蛋雞抗氧化功能及產蛋性能的影響

楊 慧, 吳俊穗, 俞秀紅, 徐 磊, 林君瑾(.福建農業(yè)職業(yè)技術學院科研處，福建 福州 50007；.福州市畜牧站，福建 福州 50007；. 福建省高新技術創(chuàng)業(yè)服務中心，福建 福州 5000)

蛋雞后期產蛋率的下降與其高峰期高產后體內自由基的增多引起的快速衰老有關，而在飼料中增加抗氧化劑能減少或清除自由基，減輕自由基氧化應激對動物體的有害作用[1].初期在畜禽生產上通過添加人工合成的抗氧化劑來減少或清除活性氧自由基和有毒代謝物質,可提高畜禽的生產性能[2].但隨著有關研究的深入，人們發(fā)現(xiàn)一些人工合成的抗氧化劑具有明顯的毒性，如高水平的丁基羥基茴香醚(BHT)、二丁基羥基甲苯(BHA)和叔丁基對苯二酚(TBHQ)會使肝腫大[3]；尤其是BHT會增高肝微粒體酶系的活性，因而有的國家(如美國)早已禁止使用BHT了.

近年來從自然界尋求天然抗氧化劑的研究己引起各國研究者的高度重視，大量天然抗氧化劑產品深受關注[4].研究表明，花生殼富含多酚類物質木樨草素[5]，木樨草素抗氧化活性強，對抑菌、延緩機體衰老具有很好的效果[6].且動物對從花生殼中提取的木犀草素的生物利用度明顯高于純木犀草素[7].然而，目前尚未見有關花生殼提取物對蛋雞機體抗氧化功能和產蛋性能影響的研究報道.本試驗在蛋雞產蛋后期的飼糧中添加不同劑量的花生殼提取物，探討其對蛋雞后期產蛋性能和抗氧化功能的影響，并研究延緩蛋雞后期產蛋率下降的最適添加量，旨在為高產蛋雞天然抗氧化劑的篩選和應用提供參考.

1 材料與方法

1.1 材料

選取粵油256花生(ArachishypogaeaLinn)為試材，花生殼提取物由本課題組和福建中農牧生物藥業(yè)有限公司采用超高壓技術自主提取[8]，提取物主要成分為多酚、纖維素、半纖維素和木質素.在乙醇體積分數(shù)70%、液固比28、超高壓壓力320 MPa、提取時間7.2 min的提取條件下，粗提物中的多酚得率為4.27%.粗提物經(jīng)大孔吸附樹脂分離純化后，花生殼提取物中的多酚含量達16.1%，多酚主要成分為木樨草素、間苯三酚、圣草酚、槲皮素和兒茶酚,其中，木樨草素的含量為10%.

選取4 096只體重、產蛋率相近的49周齡京粉蛋雞為試材.

1.2 試驗設計及飼糧組成

將4 096只蛋雞隨機分為4組，即對照組和T400、T700、T1000組，每組1 024只.為了便于投料和撿蛋，4組蛋雞隨機分配到32個籠區(qū)，每組8個籠區(qū)，每個籠區(qū)包含4層，每層8籠，每籠4只蛋雞.產蛋率和蛋重記錄以籠為單位，即每組256個重復.預試期2周， 第1周(蛋雞49周齡)為新籠適應期，第2周測定蛋雞試驗前的抗氧化功能和產蛋性能.試驗期20周，試驗期對照組蛋雞繼續(xù)飼喂基礎飼糧；T400、T700和T1000組則飼喂不同的試驗飼糧，即在基礎飼糧中分別添加400、700和1 000 g·t-1花生殼提取物，添加方法為：花生殼提取物先與1 000 g基礎飼糧混合均勻后，再與9 000 g基礎飼糧混合均勻.

基礎飼糧參照1994年美國全國科學研究委員會(NRC)[9]和NY/T 33—2004[10]的標準，并結合北京華都峪口京粉蛋雞飼養(yǎng)管理手冊(未在公開刊物上發(fā)表)配制.基礎飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1.

表1 基礎飼糧組成及營養(yǎng)水平(風干基礎)Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (air-dry basis)

1)預混料為每千克飼糧提供8 000 IU VA、4 200 IU VD3、15 IU VE、1. 0 mg VK3、0.004 mg VB12、0.95 mg硫胺素、2.50 mg核黃素、10.8 mg煙酸、8 mg吡哆醇、2 mg生物素、1.8 mg葉酸、50 mg Mn、50 mg Fe、5.6 mg Cu、50 mg Zn、 1.0 mg I、 0.15 mg Se.2)營養(yǎng)水平為計算值.

1.3 飼養(yǎng)管理

蛋雞采用半開放式雞舍4層2列立體籠養(yǎng)，通風方式采用自然通風結合縱向負壓通風，光照采用自然光照加人工補光，每天光照時間保證16 h.采用粉料飼養(yǎng)，雞自由飲水和采食，每天晚上21：00空槽，每天撿蛋2次(9：00和15：00)，統(tǒng)計蛋數(shù)和蛋重.每周消毒雞舍1次，每天清糞1次.按常規(guī)方法進行防疫和免疫.飼養(yǎng)管理方法參考北京華都峪口京粉蛋雞飼養(yǎng)管理手冊，各組蛋雞飼養(yǎng)管理條件保持完全相同.

1.4 指標的測定

1.4.1 樣品的采集與制備 分別于試驗前1周，試驗期的第5、10、15和20周(即蛋雞50、55、60、65和70周齡)，以籠為單位記錄一周的周投料量、產蛋數(shù)和蛋重，并統(tǒng)計產蛋率、蛋重、產蛋量、采食量和料蛋比.每組每周的產蛋記錄有256個重復.

分別于試驗前1周，試驗期的第5、10、15和20周結束后，于次日早晨空腹采血.每組隨機選取體重相近的12只蛋雞，進行空腹無菌翅靜脈采血，每只雞采血5 mL.血液于4 ℃傾斜靜置30 min后，于4 ℃、3 000 r·min-1(離心半徑12 cm)離心10 min得血清.將血清分裝到1 mL離心管中，置20 ℃冰箱中保存?zhèn)溆?，用于血清抗氧化指標的測定.

1.4.2 生產性能的測定 產蛋率/%=[每周每籠產蛋數(shù)/(4×7)×100]；蛋重/g=每周每籠蛋重(g)/每周每籠蛋數(shù)；周產蛋量/g=每周每籠蛋重(g)/4；周采食量/g=每周每籠采食量(g)/4；料蛋比=采食量(g)/產蛋量(g).

1.4.3 血清抗氧化指標的測定 丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量采用硫代巴比妥酸(TBA)法測定,超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)活性采用黃嘌呤氧化酶法測定，谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase, GSH-Px)活性采用還原型谷胱甘肽—二硫代二硝基苯甲酸法測定[11].上述指標的測定均采用南京建成生物工程研究所提供的試劑盒，按試劑盒說明書進行操作.

1.5 數(shù)據(jù)處理

采用SAS統(tǒng)計軟件的線性模型GLM對每周的數(shù)據(jù)分別進行方差分析，模型只包含處理效應(花生殼提取物添加水平)，試驗全期各周數(shù)據(jù)進行合并分析.對產蛋率和蛋重的全期數(shù)據(jù)合并分析，采用SAS統(tǒng)計軟件的線性混合模型MIXED[12]，模型包含處理效應、周次效應、處理與周次互作效應、雞籠隨機效應.對血清抗氧化指標的全期數(shù)據(jù)合并分析，采用SAS統(tǒng)計軟件的線性模型GLM，模型包含處理效應、周次效應、處理與周次互作效應.不同處理的結果采用Tukey法進行多重比較，結果以平均值±標準差表示，P<0.05為差異顯著.

2 結果與分析

2.1 花生殼提取物對蛋雞生產性能的影響

2.1.1 對蛋雞產蛋率的影響 由表2可見，試驗前各組蛋雞的產蛋率很相似，4個組的產蛋率相差不到1%.試驗第5周，各組的產蛋率出現(xiàn)差異，但不顯著;第10和15周，T700和T1000組的產蛋率顯著高于對照組;第20周，3個試驗組的產蛋率都顯著高于對照組.試驗全期數(shù)據(jù)合并分析的結果顯示，T400組的產蛋率(73.8%)顯著高于對照組(72.5%)，T700和T1000組的產蛋率(75.0%和75.4%)顯著高于T400組，而T700組的產蛋率與T1000組沒有差異.可見，4個組的產蛋率都隨著蛋雞周齡的增長而下降，但對照組的下降速度最快，其次是T400組，T700產蛋率的下降速度與T1000組相似.

表2 不同處理不同周次蛋雞的產蛋率1)Table 2 Laying rate in different times and different treatments %

1)同列數(shù)據(jù)后附不同字母者表示差異顯著(P<0.05)，附相同字母者表示差異不顯著(P>0.05).

2.1.2 對蛋重的影響 由表3可見：與產蛋率不同，蛋重隨著蛋雞周齡的增長略微增加；同一周次，4個組的蛋重沒有差異，蛋重最大差別不到0.5 g.

表3 不同處理不同周次的蛋重Table 3 Egg weight in different times and different treatments g

2.1.3 對蛋雞產蛋量的影響 由于在飼糧中添加花生殼提取物影響蛋雞產蛋率但不影響蛋重，不同處理產蛋量的差別與產蛋率一致.由表4可見，4個組的產蛋量都隨著蛋雞周齡的增長而下降，但對照組的下降速度最快，其次是T400組，T700組產蛋量的下降速度與T1000組沒有明顯差別.試驗第20周，對照組周產蛋量為312.3 g，T400組為322.4 g，T700組為332.0 g， T1000組為334.8 g.

表4 不同處理不同周次的周產蛋量1)Table 4 Egg mass (per week per bird) in different times and different treatments g

1)同列數(shù)據(jù)后附不同字母者表示差異顯著(P<0.05)，附相同字母者表示差異不顯著(P>0.05).

2.1.4 對蛋雞料蛋比的影響 由表5可見,料蛋比隨著蛋雞周齡的增長而增加，即飼糧利用率隨著周齡的增長而下降.試驗前，料蛋比約為2.31，試驗第20周，料蛋比上升到2.42左右；在同一周次，4個組的料蛋比非常接近，說明在飼糧中添加花生殼提取物不影響料蛋比.

表5 不同處理不同周次的料蛋比1)Table 5 Feed conversion rate (FI/egg mass) in different times and different treatments

1)同列數(shù)據(jù)后附不同字母者表示差異顯著(P<0.05)，附相同字母者表示差異不顯著(P>0.05).

2.1.5 對蛋雞采食量的影響 由表6可見，盡管料蛋比隨著蛋雞周齡的增長而增加，采食量卻隨著周齡的增長而減少， 這是由于產蛋量隨著周齡的增長而減少的緣故.與產蛋量的情況相似，4個組的采食量隨著蛋雞周齡的增長而下降的速度不一樣，對照組的下降速度最快，其他依次為T400、T700和T1000組.采食量從試驗前到試驗第20周，對照組周采食量降低35.9 g，T400組下降28.3 g，T700組下降26.5 g， T1000組下降14.0 g.

表6 不同處理不同周次蛋雞的周采食量1)Table 6 Feed intake (per week per bird) in different times and different treatments g

1)同列數(shù)據(jù)后附不同字母者表示差異顯著(P<0.05)，附相同字母者表示差異不顯著(P>0.05).

2.2 花生殼提取物對蛋雞血清抗氧化功能的影響

2.2.1 對MDA含量的影響 由表7可見，4個組蛋雞的MDA含量在試驗前很一致，MDA含量相差最大的為0.3 nmol·mL-1.但在試驗的第5周及其后，T700和T1000組的MDA含量顯著低于對照組和T400組，而T700組與T1000組沒有差異;T400組低于對照組，但只在第15和20周差異顯著.試驗全期數(shù)據(jù)合并分析顯示，T400組的MDA含量(11.5 nmol·mL-1)顯著低于對照組(12.3 nmol·mL-1)，T700和T1000組的MDA含量(10.7和10.5 nmol·mL-1)顯著低于T400組，而T700組的MDA含量與T1000組沒有差異.可見，4個組的MDA含量都隨著蛋雞周齡的增長而增加，但各組增加的速度明顯不一樣，對照組最快，其次是T400組，T700和T1000組增加的速度最慢.

2.2.2 對SOD活性的影響 由表8可見，4個組蛋雞的SOD活性在試驗前都很相似(345.5～353.3 U·mL-1).但在試驗第5周及其后，試驗組的SOD活性顯著高于對照組，T700和T1000組顯著高于T400組，而T700組與T1000組沒有差異.試驗全期，對照組、T400組、T700組和T1000組的SOD活性分別為231.4、269.9、294.0和305.2 U·mL-1.可見，4個組的SOD活性都隨著蛋雞周齡的增長而減小，但試驗組SOD活性減小的速度明顯低于對照組，T700和T1000組SOD活性減小的速度低于T400組，而T700組與T1000組的差異很小.4個組SOD活性減小的速度差別最明顯是在試驗期的前5周.

1)同列數(shù)據(jù)后附不同字母者表示差異顯著(P<0.05)，附相同字母者表示差異不顯著(P>0.05).

表8 不同處理不同周次蛋雞的SOD活性1)Table 8 Total SOD activity in different times and different treatments U·mL-1

1)同列數(shù)據(jù)后附不同字母者表示差異顯著(P<0.05)，附相同字母者表示差異不顯著(P>0.05).

2.2.3 對GSH-Px活性的影響 由表9可見，4個組蛋雞的GSH-Px活性在試驗前差別不大，為31.0～32.5 U·mL-1.但在試驗第5周，T700和T1000組的GSH-Px活性顯著高于對照組和T400組，T400組高于對照組但差異不顯著，而T700組與T1000組的差異很小.試驗第5周后，3個試驗組的GSH-Px活性都顯著高于對照組，T700和T1000組顯著高于T400組，而T700組與T1000組的差異很小.試驗全期，對照組、T400組、T700組和T1000組的GSH-Px活性分別為23.2、25.6、28.0和28.7 U·mL-1. 4個組的GSH-Px活性都隨著蛋雞周齡的增長而減小，但3個試驗組GSH-Px活性減小的速度明顯低于對照組，T700和T1000組GSH-Px活性減小的速度低于T400組，而T700組與T1000組的差異很小.4個組GSH-Px活性減小的速度差別最明顯是在試驗期的前5周，試驗第5周以后，4個組GSH-Px活性減小的速度差異較小.

表9 不同處理不同周次蛋雞的GSH-Px活性1)Table 9 GSH-Px activity in different times and different treatments U·mL-1

1)同列數(shù)據(jù)后附不同字母者表示差異顯著(P<0.05)，附相同字母者表示差異不顯著(P>0.05).

3 討論

本試驗結果表明，花生殼提取物有減緩蛋雞產蛋后期產蛋率下降的趨勢，但對蛋重的影響不大，減緩蛋雞產蛋后期產蛋率下降的適宜添加量為700～1 000 g·t-1.花生殼提取物提高蛋雞產蛋率可能是通過增強蛋雞體內抗氧化酶系統(tǒng)的活性而改善卵巢功能.

3.1 蛋雞周齡對機體抗氧化功能和產蛋性能的影響

卵巢的健康程度是決定蛋雞產蛋周期的關鍵因素.蛋雞后期卵巢機能的衰退可能與產蛋高峰后蛋雞體內自由基大量堆積，卵巢、肝臟和血清氧化損傷的加重有關[13].姜禮文等[14]研究表明：隨著周齡增大，蛋雞卵巢機能衰退,機體氧化損傷加劇，表現(xiàn)為肝臟和卵巢中的SOD、GSH-Px活性均顯著降低，MDA含量顯著升高.本試驗結果顯示：對照組蛋雞血清的MDA含量從50周齡的8.7 nmol·mL-1升高到70周齡的12.3 nmol·mL-1，SOD活性從50周齡的346.6 U·mL-1降低到70周齡的231.4 U·mL-1，GSH-Px活性從50周齡的33.3 U·mL-1降低到70周齡的23.3 U·mL-1；相應地，產蛋率從50周齡的79.9%降低到70周齡的68.0%，3個試驗組也表現(xiàn)出相似的變化趨勢，但速度不同， 同時，產蛋量和采食量也出現(xiàn)與產蛋率相似的變化.

3.2 花生殼提取物對蛋雞機體抗氧化功能和產蛋性能的影響

蛋雞經(jīng)過一段時間的高產，體內蓄積大量的自由基，自由基誘導的氧化反應損傷會使蛋雞生殖功能下降.丁夢影等[15]研究表明：用花生殼提取液灌胃干預小鼠8周后，小鼠血清、肝組織和腦組織中的SOD活性升高，MDA含量明顯降低.大量的研究亦表明[16-17],木犀草素是花生殼提取物中主要的抗氧化物質.Xin et al[18]研究表明，木犀草素能改善小鼠腎氧化狀態(tài)，降低細胞凋亡的因素，進而影響凋亡相關蛋白的表達.木犀草素可提高血清抗氧化功能，降低高脂血癥大鼠脂質過氧化損傷，還可以增強生物體內抗氧化酶系統(tǒng)的活性而達到抗氧化作用[19]. Rooban et al[20]用亞硒鹽酸體外誘導大鼠晶狀體病變，觀察到亞硒鹽酸顯著降低了大鼠體內SOD和過氧化氫酶的活性， 但木犀草素給藥后，恢復了SOD和過氧化氫酶的活性.Ashokkumar et al[21]研究也表明，患結腸癌的小鼠結腸組織中的SOD、GSH-Px、谷胱甘肽還原酶和過氧化氫酶活性降低，而使用木犀草素后，其活性顯著上升.

本試驗結果顯示，與對照組相比，在蛋雞后期的飼糧中添加富含多酚類物質木樨草素的花生殼提取物能顯著提高產蛋雞后期血清中的SOD、GSH-Px活性，顯著降低產蛋雞后期的MDA含量，改善蛋雞后期的產蛋率.本試驗結果還顯示：蛋雞抗氧化功能和產蛋率隨著花生殼提取物添加量的增加而提高；但當添加量達到700 g·t-1后，增加花生殼提取物對進一步提高蛋雞抗氧化功能和產蛋率的作用有限.花生殼提取物的適宜添加量為700～1 000 g·t-1.

4 結論

產蛋后期蛋雞的抗氧化功能下降，產蛋性能下降.在產蛋后期的飼糧中添加花生殼提取物可增強蛋雞抗氧化功能，減緩產蛋率的下降，提高蛋雞的生產性能，花生殼提取物的適宜添加量為700～1 000 g·t-1.