上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化標(biāo)記物在大腸癌中的表達(dá)及意義*

申志華，吳建龍，劉海麗，段慶華

（承德市中心醫(yī)院病理科，河北承德 067000）

目前，大腸癌已是歐洲排名第2位的致死性腫瘤，占腫瘤致死性疾病的10%左右。導(dǎo)致大腸癌發(fā)生的原因眾多，如基因突變引起的家族性腺瘤性息肉病(familial adenomatous PolyPosis，F(xiàn)AP)、DNA錯(cuò)配修復(fù)基因(MMR)突變引起的遺傳性非息肉性結(jié)腸癌(hereditary non-polyposis colon cancer，HNPCC)、Crohn's病、潰瘍性結(jié)腸炎等，均與大腸癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[1]。上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)是指在生理或病理情況下發(fā)生的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)變，同時(shí)伴隨細(xì)胞形態(tài)與相關(guān)基因表達(dá)的改變。近來研究發(fā)現(xiàn)，EMT在惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要作用，并與腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移有著非常密切的關(guān)系[2]。為此，本研究采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)了EMT標(biāo)志物，上皮細(xì)胞鈣粘蛋白（E-cadherin）、β-連環(huán)蛋白（β-catenin）、波形蛋白(Vimentin)在大腸癌組織中的表達(dá)情況，進(jìn)一步探討EMT與大腸癌進(jìn)展的關(guān)系及大腸癌的發(fā)生機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料 收集承德市中心醫(yī)院病理科2016年1月-2017年12月存檔的大腸癌組織標(biāo)本131例，患者年齡32～71歲，平均（56±7.32）歲，男性72例、女性59例，低分化癌50例、高-中分化癌81例。所有患者術(shù)前均未接受化療及放療。從病理資料庫(kù)獲得患者年齡、性別、組織學(xué)類型、臨床分期、淋巴結(jié)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等臨床參數(shù)，組織學(xué)類型、臨床分期參照WHO的分級(jí)系統(tǒng)。以同期切除，距離大腸癌組織邊緣超過5cm的大腸黏膜作為癌旁組織。

1.2 方法 采用免疫組織化學(xué)染色SP法，鼠抗人E-adherin、β-catenin、Vimentin單克隆抗體（工作濃度均為1：300）及免疫組化試劑盒均購(gòu)于福州邁新生物技術(shù)有限公司。實(shí)驗(yàn)設(shè)立陽性和陰性對(duì)照，以試劑公司提供的陽性切片作為陽性對(duì)照，以PBS代替一抗為作為陰性對(duì)照。DAB顯色，蘇木素復(fù)染。

1.3 結(jié)果判定 由兩名病理醫(yī)師按半定量評(píng)分方法獨(dú)立評(píng)分，每例切片隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野（10×40），按染色強(qiáng)度及陽性細(xì)胞數(shù)綜合計(jì)分。染色強(qiáng)度：無色計(jì)為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；陽性細(xì)胞數(shù)：小于總數(shù)的5%計(jì)為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，大于75%為4分。染色強(qiáng)度得分與陽性細(xì)胞數(shù)得分相乘判定最終結(jié)果：0～1分計(jì)為-、2～3分計(jì)為+/-、4～6分計(jì)為+、大于6分計(jì)為++，以總分≤3分為陰性組，總分＞3分為陽性組。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析 采用SPSS l9.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，組間率的比較采用卡方檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 EMT標(biāo)志物在大腸癌和癌旁組織中的表達(dá) 大腸癌組織E-cadherin、β-catenin的陽性表達(dá)率明顯低于癌旁組織，Vimentin的陽性表達(dá)率明顯高于癌旁組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1，圖1：

表1 免疫組化染色EMT標(biāo)志物在大腸癌及癌旁組織中的表達(dá)

圖1 EMT標(biāo)志物在大腸癌和癌旁組織中的表達(dá)（①②E-cadherin、③④β-catenin、⑤⑥Vimentin，①③⑤為癌旁組織、②④⑥為癌組織）

2.2 EMT標(biāo)志物在不同分化程度大腸癌中的表達(dá) 低分化大腸癌組織E-cadherin、β-catenin的陽性表達(dá)率明顯低于高-中分化，Vimentin的陽性表達(dá)率明顯高于高-中分化，不同分化程度大腸癌比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2，圖2：

表2 免疫組化染色EMT標(biāo)志物在不同分化程度大腸癌中的表達(dá)

圖2 EMT標(biāo)志物在不同分化程度大腸癌中的表達(dá)（①②E-cadherin、③④β-catenin、⑤⑥Vimentin，①③⑤為高-中分化癌、②④⑥為低分化癌）

3 討論

EMT的主要特征是上皮細(xì)胞表型的缺失及間質(zhì)特性的獲得[3]，其發(fā)生的標(biāo)志之一是E-cadherin的低表達(dá)，E-cadherin低表達(dá)可降低細(xì)胞間的黏附性并能增強(qiáng)細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)及遷移能力[4]。本研究顯示，大腸癌組織E-cadherin的陽性表達(dá)率明顯低于癌旁組織（87.79% vs 99.24%），提示大腸癌的發(fā)生與EMT標(biāo)志物中E-cadherin的低表達(dá)有密切關(guān)系。β-catenin是由一條多肽鏈組成的蛋白，作為一種多功能蛋白質(zhì)，β-catenin可與E-cadherin結(jié)合形成復(fù)合體，促進(jìn)細(xì)胞間粘附性的穩(wěn)定[5]。因此，E-cadherin/β-catenin復(fù)合物是構(gòu)建和維持細(xì)胞間聯(lián)系的關(guān)鍵，其缺失將導(dǎo)致細(xì)胞間粘附力下降，從而促進(jìn)癌細(xì)胞侵襲能力的提升[6]。有研究發(fā)現(xiàn)，E-cadherin和β-catenin的表達(dá)呈伴隨狀態(tài)，隨著E-cadherin表達(dá)的降低，β-catenin的表達(dá)也會(huì)相應(yīng)減少，在此過程中，隨著E-cadherin和β-catenin表達(dá)的變化促進(jìn)了EMT的發(fā)生發(fā)展[7]；另有報(bào)道提示，大腸癌的組織學(xué)分級(jí)、分化程度及臨床分期與E-cadherin和β-catenin的低表達(dá)密切相關(guān)，二者低表達(dá)可使腫瘤細(xì)胞間的粘附性降低，從而使腫瘤細(xì)胞容易發(fā)生浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移[8]。本研究亦證實(shí)了上述研究結(jié)果，E-cadherin和β-catenin在大腸癌組織中的陽性表達(dá)率均明顯低于癌旁組織，并且，低分化大腸癌明顯低于高-中分化大腸癌，提示大腸癌的發(fā)生、發(fā)展和分化程度與E-cadherin和β-catenin的表達(dá)變化有關(guān)。

癌細(xì)胞表達(dá)間葉分化標(biāo)記物Vimentin是發(fā)生EMT更為直接的證據(jù)。Vimentin是細(xì)胞骨架蛋白之一，主要表達(dá)于中胚層來源的細(xì)胞，是一種EMT相關(guān)間葉標(biāo)志物，具有高度的選擇性。Kidd等[9]究發(fā)現(xiàn)，Vimentinde可能與腫瘤的生物學(xué)行為有關(guān)，包括腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移及預(yù)后等。本研究亦證實(shí)，Vimentinde與大腸癌的發(fā)生和分化程度有關(guān)，大腸癌組織Vimentin的表達(dá)明顯高于癌旁組織，低分化大腸癌Vimentinde的表達(dá)明顯高于高-中分化癌。

綜上所述，與癌旁組織比較，大腸癌組織EMT標(biāo)志物E-cadherin、β-catenin和Vimentin的表達(dá)出現(xiàn)了明顯異常變化，并且不同分化程度大腸癌組織E-cadherin、β-catenin和Vimentin的表達(dá)亦明顯不同。因此提示，EMT標(biāo)志物可能成為預(yù)測(cè)大腸癌發(fā)生發(fā)展的潛在新靶點(diǎn)。