中藥黃芪中8種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留氣相色譜分析及其檢測(cè)結(jié)果研究

白春杰

（內(nèi)蒙古通遼市食品藥品檢驗(yàn)所，內(nèi)蒙古　通遼　028000）

黃芪又可以稱為綿芪，屬于一種多年生草本植物，黃芪的主根較肥厚，莖直立，上部多分枝，高約50～100 cm[1]。黃芪的藥用價(jià)值沿用至今大概有兩千多年的歷史了，黃芪具有增強(qiáng)免疫、保肝利尿以及抗衰老等功能。黃芪是屬于抗菌類的藥物，但是由于藥用價(jià)值較大，導(dǎo)致長(zhǎng)期大量的采取導(dǎo)致野生黃芪數(shù)量急劇減少?，F(xiàn)如今的中藥黃芪大都是人為養(yǎng)殖的，在黃芪的生長(zhǎng)過程中，藥農(nóng)為了使其產(chǎn)量提高，大多數(shù)會(huì)采用農(nóng)藥進(jìn)行殺蟲，所以中藥中的農(nóng)藥殘留問題日益嚴(yán)重。因殘留問題關(guān)系到中藥的安全用藥問題，在一定程度上阻礙了重要市場(chǎng)的發(fā)展[2]。在對(duì)黃芪的殺蟲過程中，大多數(shù)人會(huì)采用有機(jī)氯農(nóng)藥，雖然殺蟲效果顯著，但是有機(jī)氯農(nóng)藥有嚴(yán)重的神經(jīng)毒性和臟器毒性，會(huì)對(duì)用藥者的身體造成損害，嚴(yán)重者會(huì)誘發(fā)癌癥危機(jī)生命。黃芪作為傳統(tǒng)的一種中藥材有扶正補(bǔ)氣的功效，還可以增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能，應(yīng)用較廣泛，所以中藥黃芪的安全性問題應(yīng)該得到重視[3]。在本次的研究中，針對(duì)我省的中藥黃芪中8種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留氣象色譜分析并研究其檢測(cè)結(jié)果，研究報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1臨床資料

1.1.1實(shí)驗(yàn)材料從我區(qū)醫(yī)療機(jī)構(gòu)及經(jīng)營(yíng)機(jī)構(gòu)采購(gòu)8份黃芪樣品，分別標(biāo)記1～8號(hào)。有機(jī)氯農(nóng)藥對(duì)照品溶液有六氯甲苯[α-BHC國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)GBW（E）060081 08001、β-BHC國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)GBW（E）060082 08001、δ-BHC國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)GBW（E）060084 08001、七氯GBW（E）081455]，標(biāo)示均為50μg/ml，艾氏劑GBW（E）081457 、DDT異構(gòu)體[pp′-DDE國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)GBW（E）060104 07002、pp′-DDD國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) GBW（E）060105 08001、pp′-DDT國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)GBW（E）060102 08001]，標(biāo)示均為50μg/ml，正己烷（天津市試劑一廠生產(chǎn)）、無(wú)水硫酸鈉（天津市耀華化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)）、濃硫酸（天津市試劑一廠生產(chǎn)）、二氯甲烷、丙酮（天津天力化學(xué)試劑有限公司）、石油醚（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）均為分析純。

1.1.2實(shí)驗(yàn)用儀器與設(shè)備本實(shí)驗(yàn)所用的儀器為日本Inertsil公司生產(chǎn)的氣相色譜儀，63Ni ECD型電子捕獲檢測(cè)器。KQ5200DE超聲儀（昆山市超聲儀器有限公司）。彈性石英毛細(xì)管柱（30m×0.32mm×0.25μm）。HC-3018R高速離心機(jī)（安徽中科中佳科儀公司生產(chǎn)），旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器RE-52，電子天平：92SM-202A。

1.2方法

1.2.1進(jìn)樣方法在檢測(cè)器溫度達(dá)到300℃、進(jìn)樣口的溫度達(dá)到230℃的時(shí)候采用不分流進(jìn)樣法進(jìn)樣，初始程序升溫溫度為100℃，每分鐘升溫10℃直至升高至220℃，然后再每分鐘升溫8℃直至升至250℃，并保持250℃10 min[4]。高純氮?dú)獾妮d氣速度為0.001 5 L/min，氮?dú)獠捎煤懔髂Ｊ竭M(jìn)樣。毛細(xì)管柱尾吹流量流速為0.058 5L/min，進(jìn)樣量為1μl。

1.2.2標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備精密量取上述對(duì)照品溶液各1 ml，分置50 ml量瓶中，用石油醚（60～90℃）稀釋至刻度，搖勻，并以此作為儲(chǔ)備液，精密量取儲(chǔ)備液2.5 ml置10 ml量瓶中，并繼續(xù)用石油醚（60～90℃）稀釋至刻度，制成0.25 mg/L的混合液，然后量取適量的混合液稀釋為5、10、20、50、100μg/L的梯度溶液。

1.2.3待測(cè)溶液的制備待測(cè)溶液制備方法參考《中國(guó)藥典》中的制備方法，首先取適量的中藥黃芪置入60℃烘箱干燥4～5 h，然后使用中藥粉碎機(jī)將黃芪粉碎，過3號(hào)篩。準(zhǔn)確稱取2 g黃芪粉末于100 ml具塞錐形瓶中加水20 ml浸泡過夜，在黃芪浸泡液中精密加入40 ml丙酮，稱重后使用超聲儀超聲30 min，取出冷卻后稱重，使用丙酮補(bǔ)充損失重量，再加氯化鈉6 g，精密加入30 ml二氯甲烷，再次稱重后超聲20min，冷卻，此次使用二氯甲烷補(bǔ)充損失重量，迅速將有機(jī)相轉(zhuǎn)入100 ml具塞錐形瓶中，然后加入無(wú)水硫酸鈉，靜置4～5 h，準(zhǔn)確量取30 ml溶液濃縮，加入丙酮濃縮3次再溶解，緩慢加入1ml硫酸后轉(zhuǎn)移至離心管離心10min（3000r/min），然后取上清液2 ml置具刻度的濃縮瓶中，連接旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，40℃將溶液濃縮至適量，精密稀釋至1 ml待測(cè)[5]。

1.3觀察指標(biāo)記錄標(biāo)準(zhǔn)品及待測(cè)液的濃度并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。

記錄有機(jī)氯農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間以及最低檢測(cè)限。最低檢測(cè)限為最低檢測(cè)濃度與最低檢測(cè)量的比值。

觀察氣相色譜圖并計(jì)算黃芪中8種農(nóng)藥的回收率并進(jìn)行對(duì)比。

使用外標(biāo)法定量測(cè)定，并計(jì)算回收率和精密度。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法數(shù)據(jù)采集使用SPSS 18.0進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料以百分?jǐn)?shù)和例數(shù)表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料采用“x±s”表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制分別吸取一定量標(biāo)準(zhǔn)貯備液置5 ml量瓶中,用石油醚稀釋至刻度,搖勻，使混合農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品溶液中各標(biāo)準(zhǔn)品濃度為：α-BHC：8×10-2 μg/ml，β-BHC：11.96 μg/ml，δ-BHC：0.952 μg/ml，七氯：1.40 μg/ml，艾氏劑：2.27μg/ml，pp′-DDE：0.980μg/ml，pp′-DDD：2.42μg/ml，pp′-DDT：0.270μg/ml。分別吸取一定體積的上述混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液于5.0 ml容量瓶中,用石油醚進(jìn)行一系列稀釋,取1.0μl進(jìn)樣,得到標(biāo)準(zhǔn)曲線，其中r最大的是β-BHC，見表1。

2.2有機(jī)氯農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間及最低檢測(cè)限在本次的研究中，保留時(shí)間最長(zhǎng)的農(nóng)藥為pp′-DDT，農(nóng)藥α-BHC的檢測(cè)濃度最低，見表2。

2.38種有機(jī)氯農(nóng)藥氣相色譜圖使用配備了電子捕獲器的氣相色譜儀繪制8種有機(jī)氯農(nóng)藥的氣相色譜圖，出峰時(shí)間最早的是α-BHC，最晚的是pp′-DDT，見圖1。

圖1　8種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品氣出峰順序相色譜圖Figure 1　Sequential chromatography of the peak gas output of 8 pesticides注：1.α-BHC,2.β-BHC,3.δ-BHC,4.七氯,5.艾氏劑,6.pp′-DDE,7.pp′-DDD,8.pp′-DDT

表1　8種有機(jī)氯農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍Table 1　The standard curve and linear range of 8 kinds of organochlorine pesticides

表2　8種有機(jī)氯農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間及最低檢測(cè)限Table 2　Retention time and minimum detection limit for 8 kinds of organochlorine pesticides standard

2.4精密度和回收率測(cè)定稱取黃芪并加入標(biāo)準(zhǔn)品溶液，用所添加的標(biāo)準(zhǔn)溶液為標(biāo)準(zhǔn)，使用外標(biāo)法定量，計(jì)算黃芪的回收率和精密度，其中β-BHC的回收率最低，δ-BHC的精密度最大，見表3。

表3　8種回收率和精密度Table 3　8 kinds of recovery and precision

3　討論

黃芪是一種多年生草本植物，黃芪的藥用價(jià)值從被發(fā)現(xiàn)至今已有2千多年的歷史了，黃芪具有增強(qiáng)機(jī)體免疫能力的功能，黃芪還可以保肝利尿，具有抗衰老和抗應(yīng)激的作用。黃芪的藥用價(jià)值主要體現(xiàn)在它的抗菌能力上，由于黃芪的藥用價(jià)值較大，現(xiàn)如今野生的黃芪數(shù)量急劇減少，市場(chǎng)上的黃芪大多是人工養(yǎng)殖的[6]。黃芪耐寒耐旱，但是怕熱怕澇，適合種植在土層深厚以及富含腐殖質(zhì)的土壤。藥農(nóng)為了使中藥的產(chǎn)量提高都會(huì)使用農(nóng)藥來殺蟲，有機(jī)氯農(nóng)藥是一種普遍使用的廣譜殺蟲劑，屬于一種神經(jīng)毒物，有嚴(yán)重的神經(jīng)毒性和臟器毒性，會(huì)對(duì)用藥者的身體造成損害，嚴(yán)重者會(huì)誘發(fā)癌癥危機(jī)生命[7]。以BHC和DDT為代表的有機(jī)氯農(nóng)藥在我國(guó)使用較廣，雖然其毒性較大，大多數(shù)已經(jīng)被禁用了，但是由于有機(jī)氯農(nóng)藥的半衰期較長(zhǎng)，迄今為止在我國(guó)中藥中檢出率仍舊非常高。在本次的研究中，主要使用氣象色譜分析的方法進(jìn)行檢測(cè)，本實(shí)驗(yàn)主要使用均質(zhì)器進(jìn)行黃芪的提取與分離，均質(zhì)器是一種國(guó)外常用的提取樣品的儀器，本法通過均質(zhì)器直接提取中藥黃芪中的農(nóng)藥殘留，在離心以后取出上清液然后再加上石油醚再次提取并分離，反復(fù)3次左右，該方法與傳統(tǒng)的方法對(duì)比提高了提取的效率，而且減少了實(shí)驗(yàn)過程的損失，操作步驟也大大的簡(jiǎn)化了，因?yàn)樵邳S芪中有大量的脂溶性成分，所以在提取過程中要去除這些脂溶性成分，以免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的測(cè)定。在本次的研究中，保留時(shí)間最長(zhǎng)的農(nóng)藥為pp′-DDT，農(nóng)藥α-BHC的檢測(cè)濃度最低。

有機(jī)氯農(nóng)藥指的是用于防治植物病以及嚴(yán)重病蟲害的組成成分中含有氯元素的有機(jī)化合物，主要分為兩大類，分別為DDT以及BHC類，有機(jī)氯農(nóng)藥在使用以后因其半衰期較長(zhǎng)，所以在使用以后消失緩慢，有機(jī)氯農(nóng)藥脂溶性較強(qiáng)，氯苯的結(jié)構(gòu)較為穩(wěn)定，在進(jìn)入植物體內(nèi)以后不易被植物體的酶降解，致使在生物體內(nèi)殘留時(shí)間較長(zhǎng)，所以在中藥上面的殘留將對(duì)人體造成極大的危害，在人使用了含有有機(jī)氯農(nóng)藥的中藥后，不但無(wú)法起到治療疾病的作用反而會(huì)對(duì)人體造成極大的損害[8]。有機(jī)氯農(nóng)藥主要是刺激人的神經(jīng)中樞，慢性中毒者會(huì)表現(xiàn)出食欲不振以及惡心嘔吐等不良反應(yīng)，有時(shí)還會(huì)出現(xiàn)小腦失調(diào)以及造血器官障礙等狀況，中度中毒患者會(huì)出現(xiàn)四肢酸痛、抽搐以及紫紺等臨床癥狀，重度中毒患者會(huì)出現(xiàn)休克等表現(xiàn)，若出現(xiàn)中毒情況應(yīng)立即采取催吐等措施，情況嚴(yán)重者應(yīng)該及時(shí)就醫(yī)，避免產(chǎn)生不可挽回的后果[9]。

現(xiàn)如今，對(duì)有機(jī)氯農(nóng)藥的檢測(cè)大多采用氣相色譜法進(jìn)行檢測(cè)，樣品中的DDT以及BHC經(jīng)過提取凈化后使用氣相色譜法進(jìn)行測(cè)定，電子捕獲檢測(cè)器對(duì)負(fù)電荷較強(qiáng)的化合物有比較高的靈敏度，所以可以通過氣相色譜法進(jìn)行檢測(cè)。使用氣相色譜法進(jìn)行檢測(cè)有機(jī)氯農(nóng)藥殘留主要是采用電解質(zhì)的作用，根據(jù)生物化學(xué)中的鹽析原理，使得農(nóng)藥可以從水相進(jìn)入到有機(jī)相，在本次的實(shí)驗(yàn)中，主要是使用丙酮作為提取劑，在丙酮的萃取液中加入一些固體氯化鈉可以對(duì)農(nóng)藥進(jìn)行分離，然后加入二氯甲烷進(jìn)行再分離。使用這一方法進(jìn)行提取以及分離的優(yōu)點(diǎn)，是不需要對(duì)樣品進(jìn)行多次提取和分離，較方便。在樣品提取液中的水，經(jīng)過無(wú)水硫酸鈉干燥以后并不會(huì)影響測(cè)定的最終結(jié)果。因?yàn)槲覈?guó)明確禁止使用有機(jī)氯農(nóng)藥，所以對(duì)中藥中的有機(jī)氯農(nóng)藥檢測(cè)顯得尤為重要，為我國(guó)的中藥安全用藥問題提供了保障。本研究中建立了對(duì)黃芪中的有機(jī)氯農(nóng)藥殘留的毛細(xì)管氣象色譜分析測(cè)定的方法，對(duì)其他的中藥中的農(nóng)藥殘留有較大的參考價(jià)值。

在本次的實(shí)驗(yàn)中，通過氣象色譜分析結(jié)果可以看出，采集的樣品中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量較低，均符合我國(guó)《中國(guó)藥典》的要求，大部分的農(nóng)藥殘留量在我國(guó)藥典的限量以內(nèi)，幾種農(nóng)藥的殘留問題不同，與中藥的種植條件以及氣候條件等外部因素的影響有關(guān)，導(dǎo)致農(nóng)藥的殘留量不同[10]。在本實(shí)驗(yàn)中，農(nóng)藥的凈化多采用磺化法進(jìn)行，使用磺化法可以簡(jiǎn)化操作過程，去掉了分液漏斗的操作過程，保障了實(shí)驗(yàn)的安全性和準(zhǔn)確性，在實(shí)驗(yàn)過程中只需要加入濃硫酸磺化一次，即可達(dá)到凈化的目的。將農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品稀釋成不同的濃度進(jìn)行測(cè)定，保留時(shí)間最長(zhǎng)的農(nóng)藥為pp′-DDT，農(nóng)藥α-BHC的檢測(cè)濃度最低，從pp′-DDT的保留時(shí)間較長(zhǎng)可以看出pp′-DDT的半衰期較長(zhǎng)且不易被酶解。中藥農(nóng)藥殘留問題關(guān)系到安全用藥的問題，在現(xiàn)如今的社會(huì)中，安全用藥問題受到了越來越大的關(guān)注，自從1983年開始，我國(guó)已經(jīng)明確的禁止使用有機(jī)氯農(nóng)藥[11]，但是藥材的種植時(shí)間較長(zhǎng)，尤其是黃芪，屬于一種多年生根類藥材，非常容易受到有機(jī)氯農(nóng)藥的污染，黃芪屬于一種傳統(tǒng)的中藥材，有扶正補(bǔ)氣的功效，還可以增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能，所以市場(chǎng)需求較大，安全性問題受到了極大地關(guān)注。

綜上所述，在對(duì)中藥黃芪中8種有機(jī)氯農(nóng)藥的檢測(cè)中，使用氣相色譜分析法進(jìn)行檢測(cè)，在檢測(cè)過程中不需要對(duì)黃芪溶液反復(fù)分離純化，精簡(jiǎn)了實(shí)驗(yàn)步驟，對(duì)其他此類中藥的農(nóng)藥殘留問題有較大的參考價(jià)值，提高了我國(guó)中藥用藥的安全性，可以進(jìn)行進(jìn)一步的推廣。