飼料中添加微囊丁酸鈉對(duì)高密度養(yǎng)殖條件下團(tuán)頭魴生長(zhǎng)性能、非特異性免疫力及肝功能的影響

羅　玲　易德瑋　楊坤明　韓奇鵬　曲湘勇

(1.湖南正虹科技發(fā)展股份有限公司，岳陽 414418； 2.湖南省飼料工程技術(shù)研究中心，岳陽 414418；3.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，湖南畜禽安全生產(chǎn)協(xié)同創(chuàng)新中心，長(zhǎng)沙 410128)

丁酸鈉又稱正丁酸鈉鹽，目前主要作為替代抗生素類添加劑在飼料中應(yīng)用，其有效成分丁酸是一種短鏈揮發(fā)性脂肪酸，主要來自大腸中厭氧桿菌對(duì)糖類和蛋白質(zhì)的酵解，是結(jié)腸能量的主要來源[1-2]。大量研究證實(shí)，丁酸鈉可以刺激單胃動(dòng)物腸道黏膜的生長(zhǎng)和細(xì)胞增殖，抑制單胃動(dòng)物消化道病原微生物和寄生蟲增殖，緩解或預(yù)防多種原因造成的腹瀉以及促進(jìn)瘦素和胰高血糖素樣肽2(GLP-2)的分泌等[3]，其在促進(jìn)仔豬、肉仔雞、幼魚生長(zhǎng)、消化和抗氧化方面都有明顯效果[4-11]。在預(yù)混料、制粒條件下，經(jīng)包被的微囊丁酸鈉比粉劑的丁酸鈉穩(wěn)定性好、損失率小，而且在胃中的溶解度也有所降低，從而可以使丁酸鈉在腸道逐漸釋放來發(fā)揮其生理作用，且經(jīng)豬、雞的動(dòng)物試驗(yàn)驗(yàn)證包被的微囊丁酸鈉飼養(yǎng)效果較粉劑的丁酸鈉更好[12-14]。團(tuán)頭魴是我國(guó)淡水養(yǎng)殖的優(yōu)良品種，其肉質(zhì)鮮美、抗病強(qiáng)，隨著現(xiàn)代漁業(yè)集約化養(yǎng)殖的發(fā)展，團(tuán)頭魴的養(yǎng)殖密度增大，水中有機(jī)質(zhì)、氨氮含量及微生物數(shù)量等增加，水中溶氧濃度降低，均給團(tuán)頭魴帶來了較大的應(yīng)激。目前，關(guān)于微囊丁酸鈉對(duì)團(tuán)頭魴成魚階段生長(zhǎng)性能、非特異性免疫力和肝功能的影響尚未見報(bào)道。因此，本研究以團(tuán)頭魴成魚為研究對(duì)象，通過在飼料中添加不同劑量的微囊丁酸鈉，研究其對(duì)團(tuán)頭魴生長(zhǎng)、非特異性免疫力和肝功能的影響，以期為丁酸鈉在團(tuán)頭魴高密度養(yǎng)殖中的綜合利用提供參考依據(jù)。

1　材料與方法

1.1　試驗(yàn)材料

微囊丁酸鈉：由杭州康德權(quán)飼料有限公司提供，含30%丁酸鈉。

1.2　試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)在岳陽某試驗(yàn)場(chǎng)的水泥池(規(guī)格：2.0 m×1.5 m×1.5 m)中進(jìn)行。經(jīng)2周暫養(yǎng)后，選擇健康、規(guī)格相近[初始體重為(200.78±0.46) g]的團(tuán)頭魴1 500尾，隨機(jī)分為5個(gè)組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)50尾。對(duì)照組(Ⅰ組)飼喂基礎(chǔ)飼料(基礎(chǔ)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1)，試驗(yàn)組(Ⅱ～Ⅴ組)分別飼喂在基礎(chǔ)飼料基礎(chǔ)上添加200、400、600、1 000 mg/kg微囊丁酸鈉的試驗(yàn)飼料，試驗(yàn)期為60 d。所有飼料原料經(jīng)粉碎過40目篩，采用國(guó)產(chǎn)環(huán)模式制粒機(jī)加工成直徑為1.5 mm、長(zhǎng)為2.0 mm的顆粒飼料。

養(yǎng)殖用水為地下井水，經(jīng)過過濾、沉淀后流回蓄水池，再經(jīng)過增氧、控溫后由水泵送至魚池，每天08:00、12:00、18:00定時(shí)投喂飼料，日投餌量為魚體重的3.0%～3.5%，按水產(chǎn)養(yǎng)殖的常規(guī)程序定期換水和調(diào)水。試驗(yàn)期間水溫為24～31 ℃，溶氧濃度>5.0 mg/L，pH為7.0～7.5，氨氮濃度<0.5 mg/L，亞硝酸鹽濃度<0.05 mg/L。

1.3　取樣及檢測(cè)指標(biāo)

試驗(yàn)期間每日記錄團(tuán)頭魴的投喂量和死亡數(shù)，養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，禁食24 h后進(jìn)行計(jì)數(shù)和稱重，并計(jì)算成活率(SR)、增重率(WGR)、飼料系數(shù)(FCR)和肥滿度(CF)。每組隨機(jī)抽取5尾，尾靜脈采血，3 500 r/min離心15 min取上層血清，于4 ℃冰箱保存待測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)、總超氧化物歧化酶(T-SOD)和溶菌酶(LSZ)活性；用濾紙將魚體表面的水分吸干，用解剖刀從魚體表面不同部位刮取黏液，稱重后加入5倍體積的pH 7.4、0.02 mol/mL的磷酸鹽緩沖液，用勻漿器勻漿，4 ℃、10 000 r/min離心20 min，取上清液，用液氮速凍后轉(zhuǎn)至-40 ℃冰箱保存，待測(cè)T-SOD和LSZ活性；取新鮮肝胰臟，經(jīng)稱重后加入10倍體積的pH 7.4、0.02 mol/mL的磷酸鹽緩沖液，用勻漿機(jī)勻漿，4 ℃、10 000 r/min離心20 min，取上清液，用液氮速凍后轉(zhuǎn)至-40 ℃超低溫冰箱保存，待測(cè)GPT、GOT和T-SOD活性。

表1　基礎(chǔ)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1)每千克預(yù)混料含有 Contained the following per kg of premix：VA 9 00 000 IU，VB1320 mg，VB21 090 mg，VB65 000 mg，VB12116 mg，生物素 biotin 50 mg，葉酸 folic acid 165 mg，D-泛酸D-pantothenic acid 1 000 mg，肌醇 inositol 15 000 mg，煙酸 nicotinic acid 2 500 mg，抗氧化劑 antioxidant 200 mg。

2)礦物質(zhì)預(yù)混料為每千克飼料提供The mineral premix provided the following per kg of the diet：Cu (as copper methionine) 2 mg，F(xiàn)e (as ferrous methionine) 106.5 mg，Mn (as manganese methionine) 5 mg，Zn (as zinc methionine) 15 mg，I (as potassium iodide) 1 mg，Se (as sodium selenite) 0.25 mg，Co (as cobalt chloride) 100 mg。

3)實(shí)測(cè)值 Measured values。

1.4　測(cè)定方法

生長(zhǎng)性能指標(biāo)的計(jì)算公式如下：

成活率(%)=100×(初始尾數(shù)-
終末尾數(shù))/初始尾數(shù)；
增重率(%)=100×(終末體重-
初始體重)/初始體重；
飼料系數(shù)=投飼量/(終末體重-初始體重)；
肥滿度(g/cm3)=體重/體長(zhǎng)3。

血清、肝胰臟和黏液中T-SOD活性以及肝胰臟中GPT和GOT活性采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒，使用酶標(biāo)儀(Multiskan GO)、離心機(jī)、恒溫水浴箱、快速混勻器等儀器測(cè)定。

血清中GPT和GOT活性采用全自動(dòng)生化分析儀(邁瑞B(yǎng)S-200)及配套試劑測(cè)定。

血清和黏液中LSZ活性按Hultmark等[15]的方法用UV-1600型紫外可見分光光度計(jì)(北京瑞利)測(cè)定，具體方法：用0.1 mol/L的磷酸鉀緩沖液將溶壁微球菌配成懸液體[初始吸光度值(A0)≈0.3]，取懸液于試管內(nèi)水浴30 min后取出，水浴10 min終止反應(yīng)，測(cè)定終末吸光度值(A)。

LSZ活性=(A0-A)/A。

1.5　數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SAS 9.2統(tǒng)計(jì)軟件中的ANOVA過程進(jìn)行單因素方差分析，組間差異顯著性采用Duncan氏法進(jìn)行多重比較，P<0.05為差異顯著。試驗(yàn)數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2　結(jié)　果

2.1　飼料中添加微囊丁酸鈉對(duì)團(tuán)頭魴生長(zhǎng)性能的影響

由表2可知，與對(duì)照組相比，飼料中添加200、400、600和1 000 mg/kg的微囊丁酸鈉對(duì)團(tuán)頭魴的肥滿度和成活率無顯著影響(P>0.05)，但成活率隨著微囊丁酸鈉添加量的增加而升高；飼料中添加1 000 mg/kg的微囊丁酸鈉顯著增加了團(tuán)頭魴的終末體重(P<0.05)；飼料中添加600、1 000 mg/kg的微囊丁酸鈉顯著提高了團(tuán)頭魴的增重率(P<0.05)；飼料中添加1 000 mg/kg的微囊丁酸鈉顯著降低了團(tuán)頭魴的飼料系數(shù)(P<0.05)，且隨著微囊丁酸鈉添加量的增加，團(tuán)頭魴飼料系數(shù)呈先增大后減少的趨勢(shì)。

表2　飼料中添加微囊丁酸鈉對(duì)團(tuán)頭魴生長(zhǎng)性能的影響

同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)無字母或相同字母表示差異不顯著(P>0.05)，不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。下表同。

In the same row, values with no letter or the same letter superscripts mean no significant difference (P>0.05), while with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05). The same as below.

2.2　飼料中添加微囊丁酸鈉對(duì)團(tuán)頭魴非特異性免疫指標(biāo)的影響

由表3可知，與對(duì)照組相比，飼料中添加600、1 000 mg/kg的微囊丁酸鈉顯著提高了血清、黏液、肝胰臟中T-SOD活性和血清中LSZ活性(P<0.05)；飼料中添加400 mg/kg的微囊丁酸鈉顯著提高了肝胰臟中T-SOD活性和血清中LSZ活性(P<0.05)；飼料中添加1 000 mg/kg微囊丁酸鈉顯著提高了黏液中LSZ活性(P<0.05)。

2.3　飼料中添加微囊丁酸鈉對(duì)團(tuán)頭魴肝功能的影響

由表4可知，與對(duì)照組相比，飼料中添加600、1 000 mg/kg的微囊丁酸鈉顯著提高了肝胰臟中GPT和GOT活性(P<0.05)。

表3　飼料中添加微囊丁酸鈉對(duì)團(tuán)頭魴非特異性免疫指標(biāo)的影響

表4　飼料中添加微囊丁酸鈉對(duì)團(tuán)頭魴肝功能的影響

3　討　論

3.1　飼料中添加微囊丁酸鈉對(duì)團(tuán)頭魴生長(zhǎng)性能的影響

丁酸鈉對(duì)不同動(dòng)物的促生長(zhǎng)效果不盡相同，且最適添加量也存在很大差異。有研究報(bào)道丁酸鈉可促進(jìn)魚類的生長(zhǎng)，其在草魚幼魚飼料中的適宜添加量為0.1%～0.2%[9，16]，在鯽魚幼魚階段[初始體重(6.02±0.16) g]飼料中的適宜添加量為0.25%[6]，在大菱鲆幼魚階段[初始體重(13.00±0.01) g]飼料中的適宜添加量為0.15%[5]，在匙吻鱘[初始體重(48.87±3.13) g]飼料中的適宜添加量為0.1%[7]，在美洲鰻鱺幼魚飼料中的適宜添加量為1.0%[10]。也有研究發(fā)現(xiàn)在鱸魚飼料中添加0.2%的丁酸鈉對(duì)其增重率和特定生長(zhǎng)率并沒有顯著影響，但會(huì)顯著影響免疫相關(guān)基因的表達(dá)，增強(qiáng)鱸魚的免疫機(jī)能[17]。賀姣[18]研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加500 mg/kg微囊丁酸鈉可降低肉雞的死亡率并改善其福利狀況。本研究發(fā)現(xiàn)，在團(tuán)頭魴成魚階段，飼料中添加600、1 000 mg/kg的微囊丁酸鈉顯著增加了增重率，飼料中添加1 000 mg/kg微囊丁酸鈉顯著降低了飼料系數(shù)，與Liu等[16]在草魚幼魚上的研究結(jié)果相似，而且團(tuán)頭魴的成活率隨著丁酸鈉添加量的增加而升高，與賀姣[18]在肉雞上的研究結(jié)果相似，說明飼料中添加適量的丁酸鈉對(duì)促進(jìn)團(tuán)頭魴的消化吸收水平和健康水平均有積極作用。

3.2　飼料中添加微囊丁酸鈉對(duì)團(tuán)頭魴非特異性免疫力的影響

已有研究發(fā)現(xiàn)，丁酸鈉有利于促進(jìn)仔豬[19]、雞[20]免疫器官發(fā)育，提高機(jī)體黏膜免疫功能；改善鯉魚腸道黏膜形態(tài)，提高非特異免疫力[21]；提高凡納濱對(duì)蝦血清非特異性免疫酶酚氧化酶(PO)、酸性磷酸酶(ACP)和堿性磷酸酶(AKP)活性[22]；提高圍生期奶牛免疫力和抗氧能力[23]。魚類屬較低等的變溫脊椎動(dòng)物，其特異性免疫應(yīng)答能力相對(duì)低下，非特異性免疫在其免疫防御中具有重要意義[24]，LSZ和超氧化物歧化酶(SOD)活性是衡量機(jī)體免疫能力的主要指標(biāo)。LSZ又稱胞壁質(zhì)酶或N-乙酰胞壁質(zhì)聚糖水解酶，是一種能水解致病菌中黏多糖的堿性酶[25]。SOD是超氧陰離子自由基(O2-·)的清除劑，是機(jī)體防御過氧化損害系統(tǒng)中的關(guān)鍵酶之一[26]。本研究發(fā)現(xiàn)飼料中添加600、1 000 mg/kg的微囊丁酸鈉有利于提高團(tuán)頭魴血清、黏液、肝胰臟中T-SOD活性和血清中LSZ活性，添加400 mg/kg的微囊丁酸鈉提高了肝胰臟中T-SOD活性和血清中LSZ活性，添加1 000 mg/kg的微囊丁酸鈉提高了黏液中LSZ活性，與上述報(bào)道相吻合。這說明在團(tuán)頭魴成魚飼料中添加適量的丁酸鈉有利于提高其非特異性免疫力，可能是因?yàn)槎∷徕c通過調(diào)節(jié)腸黏膜穩(wěn)態(tài)來增強(qiáng)自身免疫反應(yīng)水平的，從而提高團(tuán)頭魴的非特異性免疫力。

3.3　飼料中添加微囊丁酸鈉對(duì)團(tuán)頭魴肝功能的影響

GPT和GOT是反映肝功能是否正常的重要指標(biāo)[27]，也是反映機(jī)體氨基酸代謝情況的重要酶，主要存在肝細(xì)胞中，在機(jī)體蛋白質(zhì)代謝中起著重要作用[28]。正常情況下血清中轉(zhuǎn)氨酶活性低而且相對(duì)穩(wěn)定[29]，當(dāng)肝細(xì)胞受到外來物質(zhì)的損傷時(shí)，細(xì)胞膜的通透性加大，大量GPT和GOT滲入血液，使血液中GPT和GOT活性升高且顯著高于正常水平[30]。楊良輝等[31]研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加丁酸鈉對(duì)尼羅羅非魚無不良作用。魏朝青等[5]研究結(jié)果顯示高植物蛋白質(zhì)飼料中添加0.15%的丁酸鈉能夠提高大菱鲆幼魚肝臟的抗氧化功能。本研究結(jié)果顯示，飼料中添加200、400、600、1 000 mg/kg的微囊丁酸鈉對(duì)團(tuán)頭魴血清中GPT和GOT活性均無顯著影響，添加600、1 000 mg/kg的微囊丁酸鈉顯著提高了肝臟中GPT和GOT活性，說明添加600、1 000 mg/kg微囊丁酸鈉有利于增強(qiáng)肝臟的解毒功能，加快尿素的生成，從而減少氨基酸代謝產(chǎn)物對(duì)機(jī)體的毒害，其具體分子機(jī)理還有待進(jìn)一步驗(yàn)證。

4　結(jié)　論

① 飼料中添加600、1 000 mg/kg的微囊丁酸鈉顯著提高了團(tuán)頭魴的增重率，飼料添加1 000 mg/kg的微囊丁酸鈉顯著提高了飼料利用率。

② 飼料中添加600、1 000 mg/kg的微囊丁酸鈉顯著提高了團(tuán)頭魴血清、黏液、肝胰臟中T-SOD活性和血清中LSZ活性，飼料中添加400 mg/kg微囊丁酸鈉顯著提高了團(tuán)頭魴肝胰臟中T-SOD活性和血清中LSZ活性，添加1 000 mg/kg的微囊丁酸鈉顯著提高了團(tuán)頭魴黏液中LSZ活性。

③ 飼料中添加600、1 000 mg/kg的微囊丁酸鈉顯著提高了團(tuán)頭魴肝胰臟中GTP和GOP活性。

④ 綜合考慮，飼料中添加適量的微囊丁酸鈉在一定程度有利于提高高密度養(yǎng)殖條件下團(tuán)頭魴對(duì)飼料的利用率及其非特異免疫力，并改善肝功能。