刺玫果不同提取方式對小鼠抗疲勞抗衰老的實驗研究

懷雪，孟永海，吳麗紅,馬智超，孟祥瑛，王艷艷

(黑龍江中醫(yī)藥大學，教育部北藥基礎與應用研究重點實驗室，黑龍江省中藥及天然藥物藥效物質(zhì)基礎研究重點實驗室，黑龍江　哈爾濱　150040)

薔薇科植物刺玫果果實營養(yǎng)價值極高，內(nèi)含豐富的黃酮類、甾醇、三萜類、脂肪油、有機酸、香豆素類、皂苷、蛋白質(zhì)、糖類、揮發(fā)油[1-3]和17種氨基酸[4]，其中蘇氨酸、纈氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸及賴氨酸等7種為人體所必需而又不能自身合成的氨基酸；含有28種微量元素，有豐富的生物活性，其中比較明確的有鋅、鐵、硒等14種人體必須的微量元素[5]。號稱“生命之花”的天然刺玫果被視為天然濃縮的多種維生素[6],是飲料和保健品的重要原料。為此，我們對刺玫果抗疲勞抗衰老作用進行了研究，現(xiàn)將研究結果報告如下。

1　材料與方法

1.1　動物

ICR小鼠60只，雄性，體質(zhì)量(20±2)g；ICR 老齡鼠50只，雄性，均由黑龍江中醫(yī)藥大學藥物安全性評價中心提供。

1.2　藥物與試劑

刺玫果產(chǎn)自大興安嶺；肝/肌糖原試劑盒，丙二醛(MDA)試劑盒，總超氧化物歧化酶(T-SOD)試劑盒，蛋白定量(BCA)試劑盒，還原型谷胱甘肽(GSH)試劑盒(南京建成生物研究所)。

1.3　儀器

水浴鍋(HWS24)；低溫離心機(Eppendorf 5840R)；分析天平(型號：MS105，梅特勒-托利多儀器上海有限公司)；Thermo紫外分光光度計(美國)；Thermo酶標儀(美國)。

2　方法

2.1　刺玫果提取物的制備

水煎液的制備：用8倍體積蒸餾水煎煮刺玫果，文火煎煮1 h，反復煎煮3次，合并濾液，配成濃度為0.4 g/ml的水煎液，冷藏備用。

醇沉和上清液的制備：水煎煮同上，將濃縮后的水煎液用80%的乙醇醇沉24 h，過濾，分別收集濾渣和濾液，濾渣過濾凍干，濾液濃縮凍干。需要時配置成含生藥量為0.4 g/ml的溶液。

回流組分的制備：濃度為80%醇回流提取刺玫果，回流1 h，反復回流3次，合并濾液，濃縮，凍干，需要時配制成含生藥量為0.4 g/ml的溶液。

2.2　實驗分組與方法

2.2.1抗疲勞實驗[7]

每組10只，分為5組即對照組、水煎液組、醇沉組、上清組、回流組，給藥體積為20 mg/kg,給藥濃度均為含生藥量8 g/(kg· d)。對照組給等體積的生理鹽水，上午10時給藥，連續(xù)給藥10天，末次給藥30 min后，將小鼠放入50×40×40 cm大水箱中，水溫(30±2)℃，以小鼠沉入水中10 s內(nèi)頭不浮出水面視為力竭，記錄其開始游泳時間至力竭時間為力竭游泳時間。力竭后立即斷頭，在冰上迅速取肌肉組織和肝組織，取胸腺和脾用分析天平稱量，按照試劑盒說明書測其肌糖原和肝糖原含量。

2.2.2抗衰老實驗

每組10只，共分6組即青年組、老年組、老年水煎液組、老年醇沉組、老年上清組、老年回流組。給藥劑量同上,青年、老年組給等體積的生理鹽水，連續(xù)給藥30天，末次給藥后，分別眼球取血，低溫離心血清，測定SOD、MDA。冰上取肝組織，測定BCA、GSH。

2.3　統(tǒng)計學處理

3　結果

3.1　抗疲勞鼠體質(zhì)量變化、脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)比較

結果見圖1。給藥組的體質(zhì)量變化明顯低于對照組，水煎液、上清、回流組脾重和脾臟指數(shù)高于對照組，上清、回流組胸腺和胸腺指數(shù)高于對照組。

圖1　抗疲勞鼠體質(zhì)量變化、脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)比較

3.2　抗疲勞實驗鼠力竭游泳時間、肝糖原、肌糖原比較

表1　抗疲勞實驗鼠力竭游泳時間、肝糖原、肌糖原含量比較

注：與對照組比較，*P<0.05，**P<0.01

結果見表1。與對照組相比，水煎液組力竭游泳時間明顯長于對照組，且有顯著性差異(P<0.05)，回流組小鼠力竭游泳時間明顯長于對照組，且有極顯著差異(P<0.01)。與對照組相比，水煎液組肝糖原含量明顯高于對照組，有極顯著差異(P<0.01);上清組和回流組肝糖原含量明顯高于對照組，有顯著性差異(P<0.05)。與對照組相比，水煎液組肌糖原含量明顯高于對照組，有極顯著差異(P<0.01)，回流組肝糖原含量明顯高于對照組，有顯著性差異(P<0.05)。

3.3　抗衰老實驗小鼠血清SOD、MDA含量以及肝組織10%勻漿GSH含量比較

結果見表2。青年組MDA、SOD、及肝組織10%勻漿GSH含量與各組相比有顯著性差異(P<0.01,P<0.05)。老年水煎液組和老年回流組MDA含量與老年組相比有顯著性差異(P<0.05)。老年水煎液組和老年醇沉組SOD含量與老年組相比有極顯著性差異(P<0.01)。老年水煎液組和老年上清組GSH含量與老年組相比有極顯著性差異(P<0.01)。

表2　小鼠SOD、MDA、肝組織10%勻漿GSH含量比較

注：與老年組比較，*P<0.05，**P<0.01；與青年組比較，ΔP<0.05,ΔΔP<0.01

4　討論

本實驗研究刺玫果不同提取方式對實驗小鼠抗疲勞抗衰老的藥理作用。研究結果表明，刺玫果4種提取方式均有抗疲勞，延緩衰老的作用。數(shù)據(jù)顯示，在實驗期間，在投食相同飼料時，給藥組的體質(zhì)量變化沒有對照組體質(zhì)量變化明顯，刺玫果提取物能調(diào)節(jié)機體自身代謝，維持體質(zhì)量相對穩(wěn)定。上清組和回流組的臟器指數(shù)高于對照組，可見刺玫果對免疫功能的影響有待深入研究[8]?？蛊谠囼炛校哂斡緦嶒炞鳛槟土χ笜薣9]，肌糖原和肝糖原含量與耐力指標密切相關[10]。刺玫果提取物對小鼠力竭游泳時間，肝、肌糖原含量均有顯著的提高，顯示了刺玫果良好的抗疲勞作用?，F(xiàn)代研究表明，刺玫果具有一定的體外抗氧化活性[11]，近年來研究認為,抗衰老的一種機制為清除自由基延緩衰老[12]，自由基的代謝產(chǎn)物MDA和機體內(nèi)抗氧化物質(zhì)SOD是衰老的兩項生化指標[13-16]。本實驗顯示，抗衰老試驗中老年水煎液組與老年組相比，MDA含量明顯降低，SOD、GSH含量明顯升高，說明刺玫果水煎液有良好的抗衰老效果。而其他組分對其效果也有一定的趨勢，但不全有顯著性差異，可能是同等劑量下不同提取方式藥物有效成分含量不同，有待于進一步考證。

綜上所述，刺玫果提取物對抗疲勞和抗衰老有一定的功效，尤以水提物效果最為明顯。