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    紅磚茶的降血脂及抗氧化活性研究

    2018-07-11 06:41:10鄭鵬程劉盼盼王勝鵬曹丹鄭琳龔自明
    現(xiàn)代食品科技 2018年6期
    關(guān)鍵詞:紅磚提物高脂血癥

    鄭鵬程,劉盼盼,王勝鵬,曹丹,鄭琳,龔自明

    (湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹茶葉研究所,湖北省農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新中心果茶分中心,湖北省茶葉工程技術(shù)研究中心,湖北武漢 430064)

    高脂血癥是以血漿中總膽固醇(Total cholesterol,TC)、甘油三酯(Triglyceride,TG)、低密度脂蛋白膽固醇(Low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)升高,高密度脂蛋白膽固醇(High density lipoproteincholesterol,HDL-C)降低為主要特征的一種血脂代謝紊亂狀態(tài),是引發(fā)和加重動(dòng)脈粥樣硬化、冠心病、高血壓和心肌梗死等心腦血管疾病的主要危險(xiǎn)因素之一[1]。隨著物質(zhì)生活水平的提高,我國高脂血癥的發(fā)病率不斷上升,有統(tǒng)計(jì)表明,在我國15~69歲做過血脂檢查的人群中,高脂血癥者占30%以上[2],其已成為我國主要健康問題之一。目前,高脂血癥在臨床上主要通過他汀類藥物治療,但該類化合物存在較嚴(yán)重的毒副作用,可能會(huì)導(dǎo)致甚于病癥的有害程度[3]。因此,醫(yī)學(xué)界提倡通過科學(xué)飲食預(yù)防和控制高血脂[4],而尋找天然、副作用小、適應(yīng)性廣的輔助降脂物質(zhì),是未來預(yù)防高脂血癥的方向。

    茶葉作為一種健康飲品,含有多種天然活性成分,近年來,其輔助降血脂功效得到廣泛關(guān)注,研究表明,茶葉中茶多酚[5,6]、茶褐素[7]等活性物質(zhì)具有較好降血脂效果,對(duì)高脂血癥模型老鼠灌喂青磚茶[8]、茯磚茶[9]、普洱茶[10]、六堡茶[11]君山銀針茶[12],亦有效較好的降脂功效。紅(米)磚茶[13],由軋制紅碎片末茶、切碎紅毛茶、紅片茶等加工而成,中國特有,湖北特產(chǎn),在產(chǎn)銷區(qū),人們有飲用紅磚茶預(yù)防高血脂的習(xí)慣,但缺乏實(shí)驗(yàn)依據(jù)支撐。本研究參照《輔助降血脂功能評(píng)價(jià)方法》[14]中動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法,對(duì)紅磚茶水提物輔助降血脂功效進(jìn)行分析,并探究其抗氧化能力,為后續(xù)紅磚茶在預(yù)防高脂血癥中的應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 供試樣品及前處理

    樣品:紅磚茶(湖北趙李橋茶廠有限公司 2007年生產(chǎn))。前處理:將紅磚茶粉碎后,準(zhǔn)確稱取 2 kg粉碎樣,按1:8茶水比(g:mL)加入沸水(100 ℃),保溫浸提30 min,每隔10 min攪拌一次,紗布粗濾,得濾液與濾渣,濾渣繼續(xù)加入沸水(按1:7茶水比),保溫浸提20 min,中間攪拌一次,紗布粗濾,合并濾液,濾紙精濾,減壓濃縮至原體積的20%,于-20 ℃預(yù)凍后,冷凍干燥36 h,得茶粉426 g,得率為21.30%,密封包裝,-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.2 主要儀器與試劑

    旋轉(zhuǎn)濃縮儀,上海亞榮;冷凍干燥機(jī),江蘇新申寶;SpectraMax M2全能酶聯(lián)儀,美國 Molecular Devices/MD公司;離心機(jī),德國Eppendorf 5804R;解剖器械;TC、TG、LDL-C、HDL-C、MDA、SOD、GSH-Px試劑盒,北京中生生物工程高技術(shù)公司提供;膽固醇,天津博迪化工股份有限公司;膽酸鈉,上海如吉生技術(shù)有限公司;酪蛋白、磷酸氫鈣,天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司。

    1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

    健康成年雄性SD大鼠50只,體重為160~200 g,由湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供(動(dòng)物許可證號(hào):SCXK(鄂)2015-0018)。于華中科技大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心飼養(yǎng)(實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)施許可證號(hào):SYXK(鄂)2010-0057)。環(huán)境溫度20~26 ℃,相對(duì)濕度40~70%。大鼠粉狀飼料由武漢市萬千佳興生物科技有限公司提供,生產(chǎn)許可證號(hào):SCXK(鄂)2011-0011。

    1.4 劑量選擇與受試物給予方式

    紅磚茶人體推薦量,成人60 kg每日飲用10 g干茶,即 166.67 mg/(kg·d)。換算成凍干茶粉劑量=166.7×21.30%(得率)=35.50 mg/(kg·d)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中低、中、高劑量組分別按人體推薦量的2.5倍(88.75 mg/(kg·d))、5 倍(177.50 mg/(kg·d)大鼠與人的等效劑量)、10 倍(355.00 mg/(kg·d))。

    各劑量組受試物均當(dāng)天新鮮配制,方式如下:(1)10倍劑量組:稱取3550 mg茶粉加蒸餾水定容至100 mL;(2)5倍劑量組:取50 mL上述10倍劑量組受試物加蒸餾水定容至100 mL;(3)2.5倍劑量組:取50 mL上述 5倍劑量組受試物加蒸餾水定容至 100 mL。大鼠灌胃量10 mL/kg·bw,樣品空白對(duì)照組和模型對(duì)照組同時(shí)給予同體積的純水。

    1.5 實(shí)驗(yàn)方法

    采用混合型高脂血癥動(dòng)物模型法,大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)維持飼料5 d后,按體重隨機(jī)分成2組,10只大鼠給予維持飼料作為空白對(duì)照組,40只給予高脂飼料作為模型對(duì)照組。高脂飼料配方為:蔗糖20%、豬油15%、膽固醇1.20%、膽酸鈉0.20%、酪蛋白9.40%、磷酸氫鈣1.72%、維持飼料52.48%。模型對(duì)照組給予模型飼料2周后,空白對(duì)照組和模型對(duì)照組大鼠不禁食尾部采血,采血后立即分離血清,測(cè)定血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)水平。根據(jù)TC水平將模型對(duì)照組隨機(jī)分成4組,分別為模型對(duì)照組、樣品低、中、高劑量組。分組后,空白對(duì)照組繼續(xù)給予維持飼料,模型對(duì)照組及三個(gè)劑量組繼續(xù)給予模型飼料。試驗(yàn)期間,各組大鼠自由進(jìn)食和飲水,每周稱體重1次并結(jié)算進(jìn)食量。各組大鼠連續(xù)灌胃30 d后,實(shí)驗(yàn)結(jié)束后處死動(dòng)物:測(cè)定肝臟重量計(jì)算肝體比,測(cè)定血清生化指標(biāo)(總膽固醇 TC、甘油三酯TG、高密度脂蛋白膽固醇HDL-C、低密度脂蛋白膽固醇 LDL-C),取肝臟測(cè)定丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)。

    1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

    采用方差分析SNK檢驗(yàn)(方差齊時(shí))及DunnettT3檢驗(yàn)(方差不齊時(shí))分析(SPSS 19.0軟件)。

    1.7 判定規(guī)則[14]

    (1)各劑量組與模型對(duì)照組比較,任一劑量組血清總膽固醇或低密度脂蛋白膽固醇降低,且任一劑量組血清甘油三酯降低,差異均有顯著性,同時(shí)各劑量組血清高密度脂蛋白膽固醇不顯著低于模型對(duì)照組,可判定該受試樣品輔助降低血脂功能動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性。(2)各劑量組與模型對(duì)照組比較,任一劑量組血清總膽固醇或低密度脂蛋白膽固醇降低,差異均有顯著性,同時(shí)各劑量組血清甘油三酯不顯著高于模型對(duì)照組,各劑量組血清高密度脂蛋白膽固醇不顯著低于模型對(duì)照組,可判定該受試樣品輔助降低血清膽固醇功能動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性。(3)各劑量組與模型對(duì)照組比較,任一劑量組血清甘油三酯降低,差異均有顯著性,同時(shí)各劑量組血清總膽固醇及低密度脂蛋白膽固醇不顯著高于模型對(duì)照組,血清高密度脂蛋白膽固醇不顯著低于模型對(duì)照組,可判定該受試樣品輔助降低血清甘油三酯功能動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 高血脂模型建立

    圖1 造模2周時(shí)空白組與模型組大鼠血清生化指標(biāo)Fig.1 The Serum biochemical indexes of rats in control group and model groups at the end of two weeks

    圖2 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)空白組與模型組大鼠血清生化指標(biāo)Fig.2 The Serum biochemical indexes of rats in control groupl and model groups at the end of the experiment

    模型組采用高脂飼料喂養(yǎng)2周,與空白對(duì)照相比(如圖1所示),血清TG和TC極顯著升高(p<0.01),HDL-C顯著降低(p<0.05),模型組大鼠呈現(xiàn)高脂血癥;實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí),模型對(duì)照組(圖2所示)血清TC極顯著升高(p<0.01),血清TG和LDL-C顯著升高(p<0.05),HDL-C顯著降低(p<0.05),模型對(duì)照組大鼠持續(xù)呈現(xiàn)高脂血癥。因此,本實(shí)驗(yàn)高脂血癥大鼠模型成立。

    2.2 紅磚茶水提物對(duì)高脂血癥大鼠血清生化指標(biāo)影響

    紅磚茶水提物對(duì)高脂血癥大鼠血清生化指標(biāo)的影響如表1所示。

    實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí),與模型對(duì)照組相比,血清TG濃度,中、高劑量組呈極顯著下降(p<0.01),分別降低了35.47%、35.30%,說明這兩個(gè)劑量組具有較好降甘油三酯功效,低劑量組無顯著性差異;TC濃度,3個(gè)劑量與模型對(duì)照組均無顯著性差異;HDL-C濃度,中劑量組顯著升高(p<0.05),上升了 20.00%,低、高劑量組無顯著性差異;LDL-C濃度,高劑量組顯著降低(p<0.05),降低了 21.03%,低、中劑量組無顯著性差異。

    表1 紅磚茶水提物對(duì)高脂血癥大鼠血清生化指標(biāo)影響的影響(ˉX±SD,n=10,mmol/L)Table 1 Effects of Hongzhuan tea extracts on serum biochemical indexes of hyperlipidemia rats (ˉX±SD, n=10, mmol/L)

    2.3 紅磚茶水提物對(duì)高脂血癥大鼠肝勻漿抗氧化性影響

    紅磚茶水提物對(duì)高脂血癥大鼠肝勻漿抗氧化性的影響如表2所示,與空白對(duì)照組相比,模型對(duì)照組大鼠肝勻漿中超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)的水平顯著降低(p<0.05),丙二醛(MDA)濃度顯著升高(p<0.05)。

    與模型對(duì)照組相比,3個(gè)劑量組大鼠肝臟中丙二醛(MDA)水平均顯著下降(p<0.05);SOD水平,中、高劑量組顯著升高(p<0.05),低劑量組雖有一定程度升高,但差異不顯著;GSH-PX水平,中、高劑量組呈極顯著升高(p<0.01),分別提高了 65.01%、41.41%,低劑量組差異不顯著。

    2.4 紅磚茶水提物對(duì)高脂血癥大鼠體重的影響

    二次分組時(shí),各組大鼠體重均一,無顯著差異,紅磚茶水提物對(duì)大鼠的體重影響如表3所示,模型對(duì)照組與空白組各期大鼠體重雖無顯著性差異,但其凈增重極顯著高于空白組,表明本實(shí)驗(yàn)所采用的高脂飼料能在一定程度上增加了大鼠的體重。劑量組與模型對(duì)照組比較,總重方面,各組間均無顯著性差異;凈增重方面,中、高劑量組增重均顯著低于模型對(duì)照組,低劑量組增重亦低于模型對(duì)照組,但差異不顯著。表明中、高劑量組紅磚茶水提物能在一定程度上減輕高脂大鼠的體重。

    表2 紅磚茶水提物對(duì)高脂血癥大鼠肝勻漿抗氧化性影響(ˉX±SD,n=10,mmol/L)Table 2 Effects of Hongzhuan tea extracts on antioxidant activity of liver homogenate in hyperlipidemia rats (ˉX±SD, n=10, mmol/L)

    表3 紅磚茶水提物對(duì)高脂血癥大鼠體重影響(ˉX±SD,n=10,g)Table 3 Effects of Hongzhuan tea extracts on body weight of hyperlipidemia rats (ˉX±SD, n=10, g)

    3 討論

    人們對(duì)六大茶類中的黑茶的輔助降血脂效果[8~11]關(guān)注較多,有研究認(rèn)為黑茶獨(dú)特的渥堆發(fā)酵工程過程中產(chǎn)生的以茶褐素為主的一類多聚物是降脂功效的關(guān)鍵物質(zhì)[7]。本研究中所采用的紅磚茶,其屬于紅茶類,內(nèi)含物質(zhì)組成與黑茶有一定的差異,但實(shí)驗(yàn)表明其水提物亦具有較好的輔助降脂功效,至于其中哪些具體成分發(fā)揮關(guān)鍵降脂作用、以及其降脂機(jī)理,則仍需進(jìn)一步的研究。

    有研究表明,大鼠在高脂飲食狀態(tài)下,可以導(dǎo)致體內(nèi)嚴(yán)重的氧化與抗氧化的失衡,產(chǎn)生大量的自由基,引起脂質(zhì)過氧化,干擾機(jī)體正常的代謝活動(dòng)[15,16]。SOD和GSH-PX則是機(jī)體重要的抗氧化酶,對(duì)機(jī)體的氧化與抗氧化平衡具有至關(guān)重要的作用,其活性的高低可間接反映機(jī)體對(duì)氧自由基的清除能力[17],在本實(shí)驗(yàn)中,模型組大鼠與空白組相比較,SOD和GSH-PX活力顯著降低,表明高脂血癥大鼠機(jī)體肝組織正常的抗氧化能力受到抑制;3個(gè)紅磚茶劑量組與模型組相比較,中、高劑量組 SOD活力顯著提升,中、高劑量組GSH-PX活力極顯著提升,表明中、高劑量組紅磚茶水提物可提升高脂大鼠體內(nèi)抗氧化水平,低劑量組SOD和GSH-PX活力雖也有一定程度的升高,但差異不顯著,其是否與劑量相關(guān),則需要進(jìn)一步研究。MDA是脂質(zhì)過氧化物最終產(chǎn)物,其含量的高低可以間接反映機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)的過氧化程度[18]。本實(shí)驗(yàn)中,模型組大鼠與空白組相比較,MDA水平顯著提高,表明高脂大鼠體內(nèi)產(chǎn)生大量的脂質(zhì)過氧化反應(yīng),這與模型組抗氧化酶系水平顯著降低相對(duì)應(yīng);3個(gè)紅磚茶劑量組與模型組相比較,MDA水平均顯著降低,表明灌胃紅磚茶水提物能顯著降低高脂大鼠體內(nèi)脂質(zhì)過氧化水平,這可能與劑量組有效提升了機(jī)體內(nèi) SOD和GSH-PX水平相關(guān),從而一定程度上抑制了機(jī)體脂質(zhì)過氧化反應(yīng)發(fā)生。高脂、高熱量的食物是造成肥胖的主要原因之一[19]。本實(shí)驗(yàn)中,中、高劑量組大鼠增重顯著低于模型對(duì)照組,提示紅磚茶水提物在抑制高脂大鼠增重方面具有一定的潛力。

    4 結(jié)論

    本實(shí)驗(yàn)在高脂血癥動(dòng)物模型構(gòu)建成功的基礎(chǔ)上,3個(gè)紅磚茶水提物劑量組與模型對(duì)照組相比,血清 TG濃度,中、高劑量組極顯著降低;血清 TC濃度,3個(gè)劑量組均無顯著差異;血清中 HDL-C濃度,中劑量組顯著升高;血清中LDL-C濃度,高劑量組顯著降低。依據(jù)《輔助降血脂功能評(píng)價(jià)方法》中動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法判定規(guī)則,提示紅磚茶水提物輔助降低血脂功能動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性;輔助降低血清膽固醇功能動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性;輔助降低血清甘油三酯功能動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性。

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