巴戟天寡糖對(duì)大鼠子宮缺血再灌注損傷的抗氧化作用*

程亮星

(鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院《腫瘤基礎(chǔ)與臨床》編輯部，河南 鄭州 450052)

婦科腫瘤的手術(shù)、外傷，以及子宮移植均可能出現(xiàn)子宮缺血再灌注損傷，這一生物學(xué)現(xiàn)象可能會(huì)對(duì)子宮造成嚴(yán)重的不可逆性損傷[1]。如何減輕子宮缺血再灌注損傷、研發(fā)保護(hù)性藥物成為婦產(chǎn)科學(xué)的研究熱點(diǎn)。巴戟天寡糖(morinda officinalis oligose，MOO)提取自中藥巴戟天的肉質(zhì)根，具有抗氧化、抗炎和抗凋亡的作用[2]。本研究采用線栓法制備大鼠子宮缺血再灌注損傷模型，探討巴戟天寡糖對(duì)子宮缺血再灌注損傷的抗氧化作用。

1 材料與方法

1.1 動(dòng) 物

50只SPF級(jí)健康雌性Wistar大鼠，均為6月齡，體質(zhì)量(378±23)g，購(gòu)自河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，并飼養(yǎng)于該中心，動(dòng)物合格證號(hào)為SCXK(豫)2010-0002。

1.2 藥品、試劑與儀器

巴戟天寡糖由河南大學(xué)藥學(xué)院提取，具體方法參考文獻(xiàn)[2]。超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase，GSH-Px)、過氧化氫酶(catalase，CAT)和丙二醛(malondialdehyde，MDA)、過氧化脂質(zhì)(lipid peroxides，LPO)及考馬斯亮蘭試劑盒，均購(gòu)自南京建成生物工程研究所，批號(hào)分別為20150723，20150715，20150713，20150720，20150728，20150717；其他試劑均為國(guó)內(nèi)分析純。

1.3 動(dòng)物分組與給藥方法

將50只大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組，模型對(duì)照組，巴戟天寡糖低、中、高劑量組5組，每組10只。巴戟天寡糖低、中、高劑量組按體質(zhì)量依次給予質(zhì)量分?jǐn)?shù)70，140，280 g/L巴戟天寡糖液10 μL/g灌胃，假手術(shù)組和模型對(duì)照組按體質(zhì)量給予10 μL/g雙蒸水灌胃，1 d 1次，連用7 d。

1.4 大鼠子宮缺血再灌注損傷模型的建立

各組大鼠末次給藥后1 h采用線栓法制備大鼠子宮缺血再灌注損傷模型[2]：以質(zhì)量分?jǐn)?shù)10 g/L的戊巴比妥鈉(0.4 μL/g)腹腔注射麻醉，腹部正中切口，經(jīng)大隱靜脈注射50 u/kg肝素鈉后，鈍性分離腹主動(dòng)脈，在髂總動(dòng)脈分叉處上0.5 cm處結(jié)扎腹主動(dòng)脈(假手術(shù)組大鼠僅穿線，不結(jié)扎)，結(jié)扎30 min后，解除結(jié)扎線，復(fù)灌60 min，經(jīng)戊巴比妥鈉過量麻醉致死，取出子宮于-80 ℃冰箱中保存。

1.5 檢測(cè)指標(biāo)

每例子宮標(biāo)本稱取100 mg制成生理鹽水勻漿，4 ℃、4 000 r/min離心15 min，取上清液，檢測(cè)其SOD、GSH-Px、CAT、MDA、LPO水平。SOD用黃嘌呤氧化酶法，GSH-Px用5,5-雙硫代對(duì)硝基苯甲酸顯色法，CAT用鉬酸銨法，MDA和LPO用硫代戊巴比妥法，總蛋白量檢測(cè)用考馬斯亮蘭法。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié) 果

與假手術(shù)組對(duì)比，模型對(duì)照組SOD、GSH-Px、CAT水平降低，MDA、LPO水平升高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與模型對(duì)照組對(duì)比，巴戟天寡糖3個(gè)劑量組SOD、GSH-Px、CAT水平升高，MDA、LPO水平降低，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。巴戟天寡糖3個(gè)劑量組SOD、GSH-Px、CAT、MDA、LPO水平兩兩對(duì)比，差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

組 別SOD/(u·mg-1)GSH-Px/(u·mg-1)CAT/(u·mg-1)MDA/(nmol·mg-1)LPO/(nmol·mg-1)假手術(shù)組172.86±6.85 62.96±3.32 107.01±4.491.99±0.293.32±0.45模型對(duì)照組127.73±3.05**38.10±3.04**75.92±3.68**3.89±0.37**7.90±0.54** 巴戟天寡糖高劑量組156.02±7.17##53.79±2.27## △△97.40±3.45## △△2.46±0.23##△△4.47±0.36##△△ 巴戟天寡糖中劑量組145.38±3.63##△△48.92±2.80##89.11±2.57##2.855±0.16##5.04±0.39## 巴戟天寡糖低劑量組137.01±5.84##△△ **43.89±2.35##△△ **85.62±3.59##△△ **3.17±0.70##△△ **6.09±0.75##△△ **F98.449116.537106.95966.396112.752P<0.001<0.001<0.001<0.001<0.001

注：與假手術(shù)組對(duì)比，**P< 0.01；與模型對(duì)照組對(duì)比，##P< 0.01；與巴戟天寡糖高劑量組對(duì)比，△△P< 0.01；與巴戟天寡糖中劑量組對(duì)比，＊＊P< 0.01

3 討 論

子宮缺血再灌注損傷常見于婦科腫瘤切除術(shù)、子宮移植術(shù)和子宮受外傷后。有研究[3-4]證實(shí)，氧化損傷、鈣超載、細(xì)胞凋亡、免疫功能異常等均參與了其整個(gè)病理生理過程，任一環(huán)節(jié)被干預(yù)或阻止均有可能減輕子宮缺血再灌注損傷的程度。巴戟天寡糖已經(jīng)被證實(shí)能夠通過減輕過氧化損傷、清除自由基、減輕細(xì)胞凋亡，以及改善其能量代謝等來保護(hù)缺血再灌注損傷的腦、心臟、腎臟組織[5-6]。這提示巴戟天寡糖也可能對(duì)子宮缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用。SOD、GSH-Px、CAT均為抗氧化酶類，正常機(jī)體內(nèi)具有一定水平的SOD、GSH-Px、CAT，發(fā)揮著保護(hù)生物膜完整性的作用，對(duì)體內(nèi)過氧化具有對(duì)抗作用，在自由基過剩時(shí)能夠通過清除自由基來保護(hù)正常機(jī)體組織免受過氧化損傷的影響。SOD、GSH-Px、CAT水平高低可以一定程度上反映機(jī)體抗氧化能力[7-8]。MDA和LPO均是脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的產(chǎn)物，可用于機(jī)體脂質(zhì)過氧化程度的評(píng)估，其水平越高，證實(shí)機(jī)體脂質(zhì)過氧化程度越嚴(yán)重，在缺血再灌注過程中發(fā)現(xiàn)MDA和LPO水平升高則證實(shí)組織已經(jīng)受到了損傷[9]。

本研究結(jié)果顯示：與假手術(shù)組對(duì)比，模型對(duì)照組SOD、GSH-Px、CAT水平降低，而MDA、LPO水平升高(P<0.05)，證明造模成功。與模型對(duì)照組比較，巴戟天寡糖低、中、高劑量組SOD、GSH-Px、CAT水平升高，而MDA、LPO水平降低(P<0.05)，提示巴戟天寡糖具有較強(qiáng)的抗氧化能力。3個(gè)巴戟天寡糖組SOD、GSH-Px、CAT、MDA、LPO水平兩兩對(duì)比，差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；且隨著巴戟天寡糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)的增加，SOD、GSH-Px、CAT水平升高，而MDA、LPO水平降低，證實(shí)巴戟天寡糖的抗氧化作用隨其質(zhì)量分?jǐn)?shù)的增加而增強(qiáng)。

綜上所述，巴戟天寡糖對(duì)子宮缺血再灌注損傷具有抗氧化作用，可能通過抗氧化作用來減輕子宮組織的損傷，且作用具有一定的劑量依賴性。

4 參考文獻(xiàn)

[1] 楊娥，殷紅巖，陳都紅, 等. 丹參提取液對(duì)大鼠子宮缺血再灌注損傷的保護(hù)作用[J]. 中國(guó)中醫(yī)急癥,2016,25(8):1515-1517.

[2] 王志紅，程亮星，王武亮，等. 巴戟天寡糖抗大鼠子宮缺血再灌注損傷作用的觀察[J]. 鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版), 2017, 52(4):467-470.

[3] KISU I,UMENE K,ADACHI M,et al.Allowable warm ischemic time and morphological and biochemical changes in uterine ischemia/reperfusion injury in cynomolgus macaque: a basic study for uterus transplantation[J].Hum Reprod,2017,32(10):2026-2035.

[4] ATALAY YO,AKTAS S,SAHIN S, et al. Remifentanil protects uterus against ischemia-reperfusion injury in rats[J]. Acta Cir Bras,2015,30(11):756-761.

[5] 楊景柯, 馮國(guó)清,于爽，等. 巴戟天寡糖促進(jìn)雞胚絨毛尿囊膜血管生成研究[J]. 中國(guó)中藥雜志, 2010, 35(3):360-363.

[6] 郭愛民，曹建民，周海濤. 巴戟天配伍維生素C對(duì)大鼠運(yùn)動(dòng)性腎臟缺血再灌注的保護(hù)作用[J]. 天然產(chǎn)物研究與開發(fā), 2013，25(10): 1352-1356.

[7] ?ZKAN N, ERSOY ?F,?ZSOY Z, et al. Melatonin exhibits supportive effects on oxidants and anastomotic healing during intestinal ischemia/reperfusion injury[J].Ulus Travma Acil Cerrahi Derg,2018,24(1):1-8.

[8] WANG J, YAN B.A polysaccharide (PNPA) from Pleurotus nebrodensis ameliorates hepatic ischemic/reperfusion (I/R) injury in rats[J].Int J Biol Macromol,2017,105(Pt 1):447-451.

[9] BAO Z, CHEN W, PAN F, et al.Role of mitofusin 2 in the protective effect of breviscapine against hepatic ischemia/reperfusion injury in rats[J].Exp Ther Med,2018,15(4):3582-3588.

[10] DODO K, SHIMIZU T, SASAMORI J, et al.Indolylmaleimide Derivative IM-17 Shows Cardioprotective Effects in Ischemia-Reperfusion Injury[J].ACS Med Chem Lett,2018,9(3):182-187.