HPLC法測定心舒寧片中奇壬醇的含量

邵衛(wèi)緒

（山東省蓬萊市中醫(yī)院急診科，蓬萊265600）

HPLC法測定心舒寧片中奇壬醇的含量

邵衛(wèi)緒

（山東省蓬萊市中醫(yī)院急診科，蓬萊265600）

目的建立心舒寧片中奇壬醇的含量檢測方法。方法采用高效液相色譜法對心舒寧片中奇壬醇的含量進(jìn)行檢測，色譜柱為Kromasil C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相為乙腈-水溶液梯度洗脫，流速為1.0 mL·min-1，檢測波長為215 nm。結(jié)果奇壬醇在0.2008～4.0160 μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.9997），平均回收率97.36%，RSD=3.03%（n=6）。結(jié)論該法操作簡便，準(zhǔn)確可靠，可作為心舒寧片中奇壬醇的含量測定方法。

心舒寧片；奇壬醇；高效液相色譜法

心舒寧片是由毛冬青、銀杏葉、葛根、益母草、豨薟草等多種藥材制成的糖衣片，有活血化瘀的功效。臨床主要用于心脈淤阻所致的胸痹、心痛、冠心病、心絞痛等癥［1］。目前對于心舒寧片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究多集中在葛根［2］和銀杏葉［3］成分的含量測定，對豨薟草成分的測定卻鮮見報(bào)道。

豨薟草系菊科植物豨薟（Siegesbeckia 0rientalis L．）、腺梗豨薟（Siegesbeckia pubescens Makino）和毛梗豨薟（Siegesbeckia glabrescens Makino）3種植物的地上部分，具有祛風(fēng)濕、利關(guān)節(jié)、解毒之功效，用于風(fēng)濕痹痛、腰膝酸軟、四肢麻痹、半身不遂、高血壓、風(fēng)疹濕瘡等癥。奇壬醇是豨薟草中主要有效成分，具有多種藥理作用，豨薟草抗血栓有效部位中主要是以奇壬醇為主的二萜類成分，且其中奇壬醇的含量大于10%［4］。復(fù)方發(fā)揮療效依靠的是多藥物協(xié)同作用，目前僅以葛根和銀杏葉中化學(xué)成分含量評價心舒寧片的質(zhì)量不夠客觀，為了完善其質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，我們建立了高效液相色譜法測定心舒寧片中奇壬醇含量的方法，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器LC-20AT高效液相色譜儀，包括四元高壓梯度泵系統(tǒng)，紫外檢測器，柱溫控制系統(tǒng)，自動進(jìn)樣系統(tǒng)（日本島津公司）；電子分析天平（北京賽多利斯儀器有限公司）；DS電熱三用水浴鍋（北京醫(yī)療設(shè)備廠）。

1.2 試藥心舒寧片（廣州奇星藥業(yè)）；奇壬醇對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：111726-200802），甲醇、乙腈（美國Fisher公司，色譜純）；娃哈哈純凈水；其他為分析純，均購自北京高華偉業(yè)化學(xué)品有限責(zé)任公司。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件色譜柱：Kromasil C18柱（4.6 mm× 250 mm，5 μm）；流動相：乙腈-水溶液梯度洗脫，流速：1.0 mL/min，檢測波長：215 nm；柱溫：30℃。梯度洗脫條件見表1。

表1 奇壬醇梯度洗脫條件（%）

2.2 對照品溶液制備精密稱取奇壬醇對照品10.04 mg，加甲醇超聲溶解，定容至25 mL容量瓶，制成每1 mL含奇壬醇0.4016 mg的對照品溶液。

2.3 供試品溶液制備將本品除去糖衣，研細(xì)，精密稱量3 g，置圓底燒瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定重量，加熱回流提取5 h，放冷，稱重，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2.4 系統(tǒng)適應(yīng)性依上述色譜條件，分別精密吸取奇壬醇對照品溶液10 μL、供試品溶液20 μL，分別進(jìn)樣。在對照品溶液和供試品溶液色譜圖相應(yīng)位置上，有相同保留時間的色譜峰。結(jié)果見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.5 線性關(guān)系考察精密吸取奇壬醇對照品溶液（每1 mL含奇壬醇0.4016 mg）各0.5、2、4、6、8、10 μL注入液相色譜儀，測定色譜峰峰面積。以對照品進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)，色譜峰峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，奇壬醇回歸方程分別為：Y=798199X+ 15769，r=0.9997。表明奇壬醇進(jìn)樣量在0.2008-4.0160 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6 精密度考察取心舒寧片供試品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，每次20 μL，測定奇壬醇色譜峰峰面積，計(jì)算RSD為1.71%（n=6）。表明精密度良好。

2.7 重復(fù)性考察稱取6份心舒寧片，每份約3 g，按“2.3供試品溶液制備”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測定奇壬醇色譜峰峰面積，計(jì)算含量，奇壬醇的平均含量為0.1635%（RSD=2.91%）。結(jié)果表明重復(fù)性良好。

2.8 穩(wěn)定性考察取心舒寧片供試品溶液，分別于制備后0、2、4、6、8、10、12、24 h進(jìn)樣每次20 μL，測定奇壬醇色譜峰峰面積，計(jì)算RSD為2.38%。結(jié)果表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.9 回收率試驗(yàn)稱取已知含量的心舒寧片（奇壬醇的含量為0.1635%）各6份，每份約3 g，精密稱定，置圓底燒瓶中，分別精密加入奇壬醇對照品溶液（0.4016 mg/mL），按“2.3供試品溶液制備”項(xiàng)下方法制得供試品溶液，分別精密吸取20 μL，注入液相色譜儀，測定奇壬醇峰面積，計(jì)算奇壬醇含量和回收率。平均回收率為97.36%，RSD=3.03%。結(jié)果見表2。

表2 心舒寧片中奇壬醇回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.10 樣品含量測定分別稱取3批心舒寧片，按“2.3供試品溶液制備”項(xiàng)下方法制備供試品，按“2.1色譜條件”項(xiàng)下色譜條件測定，采用外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算奇壬醇的含量，結(jié)果見表3。

表3 3批心舒寧片中奇壬醇含量測定結(jié)果（n=3，%）

3 討論

3.1 檢測波長的選擇據(jù)2010年版《中國藥典》［5］及相關(guān)文獻(xiàn)［6］報(bào)道，奇壬醇最大吸收波長在215 nm處，故選用215 nm作為測定波長。

3.2 提取溶劑的考察本文分別采用了甲醇、70%甲醇、50%甲醇、乙醇進(jìn)行提取，結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同溶劑對奇壬醇的提取率僅有微小差異，其中甲醇的提取率最高，因此最終確定以甲醇為提取溶劑。

3.2 提取方法的考察心舒寧片供試品制備的方法主要有超聲提取和回流提取，本文對兩種方法進(jìn)行了考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)回流提取法提取的奇壬醇含量明顯高于超聲提取，回流提取效果更好，超聲提取可能無法將奇壬醇完全提取出來，故選用回流提取法。

3.3 流動相的選擇本文曾嘗試等度洗脫，但分析時間過長且奇壬醇與雜質(zhì)峰分離效果不好，故采用梯度洗脫，分析時間相對較短，且奇壬醇與雜質(zhì)峰分離度較好。本文比較了甲醇-水系統(tǒng)和乙腈-水系統(tǒng)，甲醇-水系統(tǒng)在進(jìn)行梯度洗脫時，基線漂移很嚴(yán)重，故選用乙腈-水作為流動相系統(tǒng)。

心舒寧片因具有良好的治療冠心病、心絞痛等疾病的療效而在臨床上廣泛應(yīng)用。本文通過HPLC法測定心舒寧片中奇壬醇含量，所建立的方法有良好的專屬性，操作簡便，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，有利于今后更合理、全面、科學(xué)地對心舒寧片進(jìn)行質(zhì)量評價和控制，有利于生產(chǎn)和生產(chǎn)質(zhì)量保證。

［1］林達(dá)，洪美華.薄層色譜法鑒別心舒寧片中的豨薟草［J］.現(xiàn)代食品與藥品雜志，2007，17（4）：41-42.

［2］梁潔怡，劉軍，馮毅凡，等.HPLC法測定心舒寧片中葛根素的含量［J］.廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，1997，13（4）：242-243.

［3］洪美華，賴珊，張映娜.薄層色譜法鑒別心舒寧片中銀杏葉的主要成分［J］.中國藥師，2007，10（2）：187-188.

［4］邵露.豨薟草炮制前后質(zhì)量控制方法研究［D］.北京：北京中醫(yī)藥大學(xué)，2014.

［5］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：26.

［6］程志紅，侴桂新，王崢濤.豨薟草的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］.中國中藥雜志，2005，30（4）：257-259.

Content Determination of Kirenol in Xinshuning Pill by HPLC

SHAOWeixu

(EmergencyDepartment，PenglaiHospitalof TraditionalChineseMedicine，ShandongProvince，Penglai265600，China)

Objective To establish a method for content determination of kirenol in Xinshuning pill by HPLC.Methods The experimental condition of the HPLC method was as follows：Kromasil C18 column(4.6 mm×250 mm，5 μm)，with gradient elution using acetonitrile and water(55∶45)；the detected wavelength was 215 nm，and the flow rate was 1.0 mL/min.Results Kirenol demonstrated good linear relationship in the range 0.2008～4.0160 μgomL-1(r=0.9997)，the average recovery rate was 97.36%with RSD of 3.03%.Conclusion The method is simple，reliable，accurate，reproducible and stable，and it could be used in the determination of kirenol in Xinshuning pill.

Xinshuning pill；kirenol；HPLC

10.3969/j.issn.1672-2779.2015.12.076

1672-2779（2015）-12-0150-02

：張文娟本文校對：張文娟

2015-05-15）