北京地區(qū)漢族人群胃癌發(fā)生與EBV A73基因外顯子區(qū)A157154C多態(tài)性的相關(guān)性研究*

靳慶娥，蘇建榮(首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京友誼醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京 100050)

胃癌(gastric carcinoma，GC)是起源于胃黏膜上皮的惡性腫瘤，在我國(guó)發(fā)病率很高。EBV作為一種特殊的環(huán)境致病因子與很多疾病發(fā)生相關(guān)，研究表明10% GC患者都與EBV感染密切相關(guān)，Bam H I A 區(qū)右向轉(zhuǎn)錄物家族(Bam H I A rightward transcripts，BARTs)是EBV感染時(shí)表達(dá)最為廣泛的家族之一，尤其在上皮源性腫瘤如鼻咽癌、胃癌中高表達(dá)[1]。A73基因是該家族的主要成員之一，已有研究表明EBV A73基因高頻重組的157154nt與鼻咽癌密切相關(guān)[2～4]。

目前還鮮見(jiàn)EBV A73基因157154nt與GC相關(guān)性的報(bào)道，本文以北京地區(qū)漢族人群為研究對(duì)象，探討EBV A73基因A157154 C位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism，SNP)與GC易感性的關(guān)系，為臨床實(shí)踐提供參考。

1材料與方法

1.1 研究對(duì)象 選取2011年7月～2014年6月臨床病理明確診斷為GC且EBV IgM抗體陽(yáng)性的29例患者作為實(shí)驗(yàn)組，男性20例，女性9例，平均年齡51.4±8.8歲，既往有實(shí)體瘤病史或轉(zhuǎn)移癌患者除外。取同期40例健康體檢者作為對(duì)照組，男性23例，女性17例，平均年齡45.4±12.2歲。所有研究對(duì)象均為漢族。所有入組人員均簽署知情同意書(shū)。

1.2 試劑和儀器 血漿基因組DNA提取試劑盒購(gòu)自QIAGEN公司，參照文獻(xiàn)[3]設(shè)計(jì)合成引物，引物由生工生物(上海)股份公司合成。恒溫水浴鍋，高速離心機(jī)和Bio-Rad梯度PCR擴(kuò)增儀。

1.3 方法 采集空腹EDTA抗凝靜脈血1 ml，應(yīng)用試劑盒提取基因組DNA，采用PCR聯(lián)合DNA測(cè)序方法檢測(cè)各標(biāo)本A157154 C位點(diǎn)的基因型。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用 SPSS16.0 統(tǒng)計(jì)軟件分析處理。基因型分布采用χ2遺傳平衡吻合度Hardy-Weinberg檢驗(yàn)。組間比較采用Pearsonχ2或獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。采用非條件Logistic回歸模型分析SNP與GC易感性，采用多因素Logistic回歸模型分析該SNP與風(fēng)險(xiǎn)因素(年齡、性別、吸煙、飲酒、臨床分期)相關(guān)性。采用比值比(odd ratio，OR)和95%置信區(qū)間(confidence interval，CI)表示相對(duì)危險(xiǎn)度。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗(yàn)結(jié)果 GC組和對(duì)照組基因型分布經(jīng)檢驗(yàn)均符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律，具有群體代表性(χ2=1.828，P=0.176；χ2=3.432，P=0.064)。

2.2 GC組和對(duì)照組157154 nt位點(diǎn)基因型和等位基因分布差異 與對(duì)照組相比，GC組基因型和等位基因分布頻率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.801，P=0.033；χ2=8.997，P=0.003)。

2.3 157154 nt SNP與GC遺傳易感性關(guān)系 見(jiàn)表1。攜帶C等位基因的個(gè)體罹患GC的風(fēng)險(xiǎn)是攜帶A等位基因個(gè)體的2.95倍(OR=2.95；95% CI=1.44～6.04)；CA+CC基因型個(gè)體罹患GC的風(fēng)險(xiǎn)是純合野生型AA的3.75倍(OR=3.75；95%CI=1.10～12.89)。

表1 GC組和對(duì)照組A73基因A157154C位點(diǎn)基因型和等位基因分布頻率及與GC的易感性[n(%)]

注：a在非條件Logistic回歸模型中，OR和P值均經(jīng)年齡校正。

2.4 GC患者157154 nt等位基因與性別的關(guān)系 GC組男性患者C等位基因分布頻率顯著高于女性患者(80.8% vs 50.0%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.392，P=0.020)。

2.5 157154 nt SNP與臨床參數(shù)的相關(guān)性 見(jiàn)表2。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示157154 nt多態(tài)性與年齡、性別、吸煙、飲酒和臨床分期均無(wú)相關(guān)性(χ2=0.077，P=0.781)。

表2 GC組和對(duì)照組A73基因A157154C位點(diǎn)基因型頻率的分層分析結(jié)果[n(%)]

3討論EBV是一種普遍存在的人類(lèi)皰疹病毒，最初在Burkitt淋巴瘤細(xì)胞系中被發(fā)現(xiàn)，據(jù)統(tǒng)計(jì)世界上90%的人口都曾感染過(guò)該病毒，但大多數(shù)為無(wú)癥狀隱性感染。在一些T，B淋巴細(xì)胞和上皮源性腫瘤中常發(fā)現(xiàn)EBV的DNA片段[5]，并且在EBV感染的細(xì)胞中均發(fā)現(xiàn)BARTs家族基因的表達(dá)，而A73是該家族的重要成員，該胞質(zhì)蛋白能與RACK1相互作用調(diào)控PKC信號(hào)通路和Src酪氨酸激酶，提示A73與腫瘤增殖調(diào)控密切相關(guān)。A73基因可能參與了EBV轉(zhuǎn)化和潛伏復(fù)制過(guò)程，并且其基因遺傳變異與腫瘤的侵襲相關(guān)[6]。

A73基因共有3個(gè)SNP位點(diǎn)，其中外顯子EBV A157154C位點(diǎn)呈高頻變異。目前對(duì)A73基因遺傳變異主要集中于鼻咽癌研究，全基因組關(guān)聯(lián)研究(genome wide association studies，GWAS)和文獻(xiàn)報(bào)道都提示A73基因是與鼻咽癌相關(guān)的新遺傳位點(diǎn)[3]。研究表明云南地區(qū)A73基因157154 nt多態(tài)C等位基因攜帶者患鼻咽癌的風(fēng)險(xiǎn)是A等位基因的22.685倍，提示CC基因型可能是鼻咽癌的危險(xiǎn)因素[4]。而A73基因A157154C與EBV感染相關(guān)GC(EBVaGC)易感性的關(guān)系鮮見(jiàn)報(bào)道。本文中我們采用病例對(duì)照研究方法分析該SNP與EBV IgM+ GC發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性。結(jié)果表明GC組A73基因157154 nt CC基因型和C等位基因分布頻率都明顯高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與攜帶AA野生基因型相比，攜帶CA或CC基因型者罹患GC的風(fēng)險(xiǎn)分別增加了2.41倍和5.46倍，這提示A73基因CC基因型可能是GC發(fā)生的危險(xiǎn)因素。男性GC患者CC基因型頻率顯著高于女性患者，這為流行病學(xué)數(shù)據(jù)顯示GC發(fā)病率男性明顯高于女性又提供了表觀遺傳學(xué)依據(jù)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示GC患者157154 nt與年齡、性別、吸煙和飲酒等臨床參數(shù)都無(wú)相關(guān)性，該結(jié)論受標(biāo)本例數(shù)的限制，也間接表明單一SNP位點(diǎn)與其他環(huán)境因素協(xié)同效應(yīng)在GC的發(fā)展中起重要作用。

本文結(jié)果提示A157154C位點(diǎn)是GC發(fā)病的危險(xiǎn)因素，所以在疾病的預(yù)防治療上要充分考慮人群易感性的重要性，如果能準(zhǔn)確預(yù)測(cè)GC高危人群將有助于提高GC的早期診斷率。要明確A73基因外顯子A157154C位點(diǎn)SNP與GC的確切關(guān)系尚需增大樣本例數(shù)和擴(kuò)大地域范圍及種族限制。

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