匙萼金絲桃化學成分研究

劉 健，肖朝江，2，張盼盼，崔淑君 ，李 陽，姜 北，2*

（1.大理大學藥學與化學學院，云南大理 671000；2.大理大學藥物研究所，云南大理 671000）

匙萼金絲桃（Hypericum uralum Buch.-Han.ex D.Don）又名土連翹、芒種花、金絲桃等，為藤黃科金絲桃屬植物，主要分布于西藏、云南西北部。該植物為灌木，高0.3～2 m，叢狀，有直立而拱彎、通常多葉的莖，花期7～9月，果期9～11月〔1〕。該植物全株可用于治療肝炎、痢疾、淋病、咽喉腫痛、口腔炎、瘡癰、跌打損傷、鼻咽癌、喉癌、扁桃體癌、肺癌、膀胱癌、前列腺癌等〔2-3〕。在前期開展的大規(guī)模滇西地區(qū)特色性植物鎮(zhèn)痛活性篩選研究中，發(fā)現匙萼金絲桃提取物具有顯著的鎮(zhèn)痛活性。為深入了解認識該植物的化學成分，本文采用硅膠和凝膠柱層析等手段，對采自云南大理地區(qū)的匙萼金絲桃95%乙醇提取物乙酸乙酯部位進行了化學成分研究，從中分離得到了6個化合物，分別鑒定為：β-谷甾醇（1）、豆甾醇（2）、胡蘿卜苷（3）、樺木酸（4）、槲皮素（5）、表兒茶素（6）。見圖1。

1 儀器與材料

圖1 化合物1～6的結構

1.1 實驗儀器 AL-204電子天平［梅特勒-托利多（上海）有限公司］；Bruker AvanceⅢ-400核磁共振儀（德國布魯克公司），四甲基硅烷（TMS）為內標；柱層析硅膠和薄層層析硅膠板GF254（青島海洋化工廠）；RE-52AA旋轉蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；Sephadex LH-20（Amersham Biosciences）；石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇等均為工業(yè)級有機溶劑，經重蒸后使用。

1.2 實驗材料 本實驗所用樣品于2017年7月采自云南省大理市蒼山，由大理大學張德全博士鑒定為匙萼金絲桃（Hypericum uralum Buch.-Ham.ex D.Don），植物樣本（20170705-1A）存放于大理大學藥物研究所姜北教授研究組。

2 提取方法

匙萼金絲桃全植株9.34 kg，用95%乙醇冷浸提取9次，合并提取液，減壓濃縮所得總浸膏（1.26 kg）以水分散，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到相應萃取物。乙酸乙酯萃取物（322 g）經300～400目硅膠柱，氯仿-丙酮洗脫系統(tǒng)（1：0→0：1）梯度洗脫，得到9個流分（A～I）；B段經300～400目硅膠柱色譜，石油醚-丙酮（1：0→0：1）梯度洗脫，得到化合物1（9 mg）和2（15 mg）；B3段經300～400目硅膠柱色譜，石油醚-乙酸乙酯（10：1）等度洗脫，得到化合物4（23 mg）和5（35 mg）；C段經兩次凝膠（Sephadex LH-20，甲醇）柱色譜，得到化合物6（40 mg）；G段經兩次凝膠（Sephadex LH-20，甲醇）柱色譜分離純化，得到化合物3（15 mg）。

3 實驗結果

化合物1：無色針晶（氯仿）。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：5.36（1H，brs，H-6），3.53（1H，m，H-3α），1.01（3H，s，Me-19），0.92（3H，d，J=6.5 Hz，Me-21），0.85，0.82，0.81（各3H，overlap，Me-26，27，29），0.68（3H，s，Me-18）；13C-NMR（100 MHz，CDCl3）δ：37.4（t，C-1），31.8（t，C-2），72.0（d，C-3），42.4（t，C-4），140.9（s，C-5），121.9（d，C-6），31.8（t，C-7），32.0（d，C-8），50.3（d，C-9），36.6（s，C-10），21.2（t，C-11），39.9（t，C-12），42.5（s，C-13），56.2（d，C-14），24.5（t，C-15），28.4（t，C-16），56.9（d，C-17），12.1（q，C-18），19.5（q，C-19），36.3（d，C-20），18.9（q，C-21），34.1（t，C-22），26.2（t，C-23），46.0（d，C-24），29.3（d，C-25），20.0（q，C-26），19.2（q，C-27），23.3（t，C-28），12.0（q，C-29）。上述數據與文獻〔4〕報道基本一致，故鑒定化合物1為β-谷甾醇。

化合物2：無色針晶（氯仿）。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：5.35（1H，brs，H-6），5.15（1H，dd，J=15.5，8.6Hz，H-23），5.01（1H，dd，J=15.5，8.6Hz，H-22），3.53（1H，m，H-3α），1.01（3H，s，Me-19），0.92（3H，d，J=6.5Hz，Me-21），0.84，0.82，0.80（各3H，overlap，Me-26，27，29），0.70（3H，s，Me-18）；13C-NMR（100 MHz，CDCl3）δ：37.4（t，C-1），31.8（t，C-2），72.0（d，C-3），42.5（t，C-4），140.9（s，C-5），121.9（d，C-6），32.1（t，C-7），32.0（d，C-8），50.3（d，C-9），36.6（s，C-10），21.2（t，C-11），40.7（t，C-12），42.4（s，C-13），56.1（d，C-14），24.5（t，C-15），28.4（t，C-16），57.0（d，C-17），12.0（q，C-18），19.5（q，C-19），40.6（d，C-20），21.4（q，C-21），138.5（d，C-22），129.4（d，C-23），51.4（d，C-24），32.0（d，C-25），21.4（q，C-26），19.1（q，C-27），25.6（t，C-28），12.1（q，C-29）。上述數據與文獻〔5〕報道基本一致，故鑒定化合物2為豆甾醇。

化合物3：白色粉末。1H-NMR（400MHz，C5D5N）δ：5.37（1H，brs，H-6），5.14（1H，d，J=7.4 Hz，H-1′），5.08（1H，d，J=7.7 Hz，H-1′），4.59（1H，dd，J=11.8，2.4 Hz，H-6′a），4.43（1H，dd，J=11.8，5.2 Hz，H-6′b），4.33（1H，overlap，H-4′），4.31（1H，overlap，H-5′），4.08（1H，m，H-3α），4.00（1H，overlap，H-2′），3.96（1H，overlap，H-3′），1.00（3H，overlap，Me-21），0.96（3H，s，Me-19），0.95（3H，overlap，Me-26），0.91（3H，overlap，Me-27），0.89（3H，overlap，Me-29），0.68（3H，s，Me-18）；13C-NMR（100MHz，C5D5N）δ：37.8（t，C-1），30.6（t，C-2），78.9（d，C-3），40.3（t，C-4），141.3（s，C-5），122.3（d，C-6），32.5（t，C-7），32.4（d，C-8），50.7（d，C-9），37.3（s，C-10），21.7（t，C-11），39.7（t，C-12），42.8（s，C-13），57.2（d，C-14），24.9（t，C-15），28.9（t，C-16），56.6（d，C-17），12.3（q，C-18），19.8（q，C-19），36.7（d，C-20），19.4（q，C-21），34.6（t，C-22），26.7（t，C-23），46.4（d，C-24），29.8（d，C-25），19.8（q，C-26），20.4（q，C-27），23.8（t，C-28），12.5（q，C-29），102.9（d，C-1′），75.7（d，C-2′），78.5（d，C-3′），72.1（d，C-4′），79.0（d，C-5′），63.2（t，C-6′）。上述數據與文獻〔6〕報道基本一致，故鑒定化合物3為胡蘿卜苷。

化合物4：白色粉末。1H-NMR（400MHz，C5D5N）δ：4.94（1H，brs，H-29a），4.76（1H，brs，H-29b），3.53（1H，td，J=10.9，5.0 Hz，H-3α），3.45（1H，dd，J=9.1，7.1 Hz，H-19），1.78（3H，s，H-30），1.21（3H，s，H-27），1.05（3H，s，H-26），1.04（3H，s，H-23），1.00（3H，s，H-25），0.80（3H，s，H-24）；13C-NMR（100 MHz，C5D5N）δ：38.9（t，C-1），28.6（t，C-2），78.5（d，C-3），39.9（s，C-4），56.2（d，C-5），19.1（t，C-6），35.2（t，C-7），41.4（s，C-8），51.3（d，C-9），37.8（s，C-10），21.5（t，C-11），26.4（t，C-12），38.9（d，C-13），43.2（s，C-14），30.6（t，C-15），33.2（t，C-16），57.0（s，C-17），48.1（d，C-18），50.1（d，C-19），151.7（s，C-20），31.5（t，C-21），37.9（t，C-22），29.0（q，C-23），16.8（q，C-24，C-26），16.7（q，C-25），15.2（q，C-27），179.2（s，C-28），110.3（t，C-29），19.8（q，C-30′）。上述數據與文獻〔7〕報道基本一致，故鑒定化合物4為樺木酸。

化合物 5：黃色粉末。1H-NMR（400 MHz，CD3COCD3）δ：12.1（1H，s，5-OH），7.80（1H，d，J=2.1 Hz，H-2′），7.67（1H，dd，J=8.4，1.9 Hz，H-6′），6.97（1H，d，J=8.4 Hz，H-5′），6.50（1H，brs，H-6），6.24（1H，brs，H-8）；13C-NMR（100 MHz，CD3COCD3）δ：146.9（s，C-2），136.7（s，C-3），176.5（s，C-4），162.3（s，C-5），99.1（d，C-6），164.9（s，C-7），94.4（d，C-8），157.7（s，C-9），104.1（s，C-10），123.7（s，C-1′），115.7（d，C-2′），145.8（s，C-3′），148.3（s，C-4′），116.2（d，C-5′），121.4（d，C-6′）。上述數據與文獻〔8〕報道基本一致，故鑒定化合物5為槲皮素。

化合物6：黃色粉末。1H-NMR（400 MHz，CD3COCD3）δ：7.05（1H，d，J=2.0 Hz，H-2′），6.83（1H，dd，J=8.1，1.8 Hz，H-6′），6.78（1H，d，J=8.1，H-5′），6.02（1H，d，J=2.3 Hz，H-6），5.92（1H，d，J=2.3 Hz，H-8），4.87（1H，s，H-2b），4.20（1H，m，H-3b），2.86（1H，dd，J=16.6，4.6 Hz，H-4a），2.74（1H，dd，J=16.6，3.3 Hz，H-4b）；13C-NMR（100 MHz，CD3COCD3）δ：79.5（d，C-2），67.1（d，C-3），29.1（t，C-4），157.6（s，C-5），96.3（s，C-6），157.7（s，C-7），95.8（d，C-8），157.2（s，C-9），99.9（s，C-10），132.3（d，C-1′），115.4（d，C-2′），145.4（s，C-3′），145.5（s，C-4′），115.6（d，C-5′），119.5（d，C-6′）。上述數據與文獻〔9〕報道基本一致，故鑒定化合物6為表兒茶素。

4 討論

本實驗從匙萼金絲桃95%乙醇提取物的乙酸乙酯部位分離得到6個化合物，均為首次從該植物中分離得到〔10-14〕，其主要涉及甾體類、黃酮類及萜類。前人研究表明黃酮類及萜類化合物具有豐富的藥理活性。文獻報道，槲皮素可顯著降低多種動物模型的痛閾值〔15〕。另外，阮洪生等〔16〕研究表明表兒茶素可以抑制對脂多糖誘導小鼠單核巨噬細胞炎癥反應，具有抗炎作用。徐先祥等〔17〕研究表明樺木酸可以通過活化糖皮質激素受體、抑制花生四烯酸代謝途徑、抑制一氧化氮生成等多種途徑發(fā)揮抗炎作用。由于鎮(zhèn)痛常與抗炎作用密切相關，從本研究所分離得到的化學成分及其相關研究報道，可初步推斷前期研究過程中所發(fā)現的匙萼金絲桃提取物顯示鎮(zhèn)痛作用具有一定的合理性。本研究為系統(tǒng)了解匙萼金絲桃的化學成分、更好地開發(fā)與利用該植物資源奠定了一定基礎。

〔1〕中國科學院中國植物志編輯委員會.中國植物志：第50（2）卷〔M〕.北京：科學出版社，1990：27.

〔2〕姜北，段寶忠.白族慣用植物藥〔M〕.北京：中國中醫(yī)藥出版社，2014：49-50.

〔3〕國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會.中華本草：第9卷〔M〕.上海：上海科學技術出版社，1999：607.

〔4〕HAMDAN D，EL-READI M Z，TAHRANI A，et al.Chemi?cal composition and biological activity of Citrus jambhiri Lush〔J〕.Food Chem，2011，127（2）：394-403.

〔5〕SANG S，LAPSLEY K，ROSEN R T，et al.New Prenylated Benzoic Acid and Other Constituents from Almond Hulls（Prunus amygdalus Batsch）〔J〕.J Agric Food Chem，2002，50（3）：607-609.

〔6〕王健，馬養(yǎng)民，閆夢茹，等.高叢珍珠梅莖枝化學成分研究〔J〕.中藥材，2015，38（10）：2098-2101.

〔7〕劉瑩，李喜鳳，劉艾林，等.細皺香薷葉的化學成分研究〔J〕.中草藥，2009，40（9）：1356-1359.

〔8〕CHEN Y P，LIU L，ZHOU Y H，et al.Chemical constitu?ents from Sappan Lignum〔J〕.Journal of Chinese Pharma?ceutical Science，2008，17（1）：82-86.

〔9〕胡江苗，陳紀軍，趙友興，等.山竺果殼的化學成分〔J〕.云南植物研究，2006，28（3）：319-322.

〔10〕ZHANG J J，YANG J，LIAO Y，et al.Hyperuralones A and B，New Acylphloroglucinol Derivatives with Intricately Caged Cores from Hypericum uralum〔J〕.Organic Letters，2014，16（18）:4912-4915.

〔11〕ZHANG J J，YANG X W，LIU X，et al.1，9-seco-Bicyclic Polyprenylated Acylphloroglucinols from Hypericum ural?um〔J〕.J Nat Prod，2015，78（12）:3075-3079.

〔12〕張晶晶.兩種金絲桃屬植物中間苯三酚類化學成分研究〔D〕.昆明：中科院昆明植物研究所，2014.

〔13〕ZHOU Z B，LI Z R，WANG X B，et al.Polycyclic Polypre?nylated Derivatives from Hypericum uralum:Neuroprotec?tive Effects and Antidepressant-like Activity of Uralodin A〔J〕.J Nat Prod，2016，79（5）:1231-1240.

〔14〕LI X Q，LI Y，LUO J G，et al.New phloroglucinol deriva?tives from the whole plant of Hypericum uralum〔J〕.Fito?terapia，2017，123:59-64.

〔15〕XIAO X，WANG X，GUI X，et al.Natural Flavonoids as Promising Analgesic Candidates：A Systematic Review〔J〕.Chem Biodivers，2016，13（11）：1427-1440.

〔16〕阮洪生，牟晉珠.表兒茶素對脂多糖誘導RAW264.7細胞分泌炎癥因子的影響〔J〕.中國實驗方劑學雜志，2017，23（4）：159-163.

〔17〕徐先祥，秦思，李瓊.樺木酸抗炎作用與機制〔J〕.中國現代應用藥學，2014，31（10）：1284-1287.