IgM抗體在急性呼吸道感染患者病原診斷中的應(yīng)用

廖建 曾洪偉 陳全敏

成都市新都區(qū)中醫(yī)醫(yī)院檢驗科，成都 610500

急性呼吸道感染是臨床常見疾病，不典型病原體感染給臨床病原診斷帶來了較大困難[1]。對于急性呼吸道感染患者而言，若無法做出及時的病原學(xué)診斷，極易因治療不及時或治療策略不當(dāng)引發(fā)重癥，甚至危及生命[2]。當(dāng)前臨床常用的呼吸道病原體診斷方法以分離培養(yǎng)、分子生物學(xué)檢測和血清學(xué)檢測為主，其中，分離培養(yǎng)存在耗時久的弊端，而分子生物學(xué)檢測成本偏高，難以廣泛推廣，故血清學(xué)檢測成為備受關(guān)注的急性呼吸道感染病原診斷技術(shù)[3]。本研究分析IgM抗體在急性呼吸道感染病原診斷中的應(yīng)用價值，為呼吸道感染的輔助診斷提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機取2015年2月—2017年2月783例擬診為急性呼吸道感染患者征得患者同意后進行IgM檢測。783例患者中，男459例，女324例，年齡2個月～85歲，平均（49.26±13.88）歲；科室分布：血液科193例，呼吸科99例，兒科436例，其他55例；癥狀分布：發(fā)熱338例，咳嗽301例，咽部充血218例，喘息526例，肺部濕啰音128例，扁桃體腫大228例。

1.2 檢測方法

抽取患者肘靜脈血3 mL，常規(guī)提取血清，以1：1比例加入磷酸鹽緩沖液稀釋，取30 μL稀釋后血清，加入150 μL吸附劑，離心15 min，將處理后的血清與質(zhì)控品加入載玻片的試驗孔內(nèi)，保存于37℃的濕盒內(nèi)，90 min后取出[4]，以PBS緩沖液沖洗2次，蒸餾水沖洗1次，而后加入熒光素結(jié)合物，再次沖洗，蓋蓋玻片，于400倍熒光顯微鏡下觀察并進行結(jié)果判讀[5-6]。呼吸道病原體譜診斷試劑盒購自德國歐盟公司，采用間接免疫熒光法進行檢測，檢測病原體包括腺病毒（ADV）、呼吸道合胞病毒（RSV）、流感病毒 A（INFA）、流感病毒 B（INFB）、副流感病毒（PIV）、肺炎支原體（MP）、肺炎衣原體（CP）、柯薩奇病毒A型（CVA）、柯薩奇病毒B型（CVB）、?？刹《荆‥CHO）以及嗜肺軍團菌（LP），共11項呼吸道病原體IgM抗體，檢測方法均嚴格參照試劑盒操作說明書。

1.3 分析方法

計算患者IgM抗體總陽性率以及不同年齡、性別患者IgM抗體陽性率分布，總結(jié)呼吸道病原體IgM抗體譜的臨床特征。使用SPSS19.0進行分析，IgM抗體陽性率以（n/%）表示，并采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

783例患者中，IgM抗體陽性311例，陽性率為39.72%，患者以單一感染（46.95%）、雙重感染（39.87%）為主，三重感染和多重感染占比為12.22%、0.96%。按照患者病原體檢出情況選擇適當(dāng)治療藥物，以阿奇霉素或紅霉素＋第3代頭孢＋中藥制劑為主，311例患者臨床治療均有效。

2.1 病原體分布

311例IgM抗體陽性患者病原體以INFB為主，占37.62%，其次為INFA，占27.33%，MP占24.44%、LP占20.58 、RSV5.47%、 CP4.82%、 PIV3.86%、 ADV1.29% CVA、CVB、 ECHO均低于1%。

2.2 不同年齡、性別患者病原體分布

＜18歲患者INFA的IgM抗體陽性率高于其他兩組，≥60歲患者LP的IgM抗體陽性率高于其他兩組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。女性患者INFA、MP、LP、PIV的IgM抗體陽性率高于男性患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

3 討論

病毒、細菌、衣原體及支原體均可引發(fā)急性呼吸道感染的發(fā)生，近年來，抗生素的廣泛使用以及病原微生物毒性、病原性的變化，細菌感染所致畸形呼吸道感染比例逐漸下降，而病毒感染、非典型性肺炎的發(fā)病率呈上升趨勢[7]。由于患者肺外臟器損害程度及臨床表現(xiàn)各不相同，加之細菌學(xué)培養(yǎng)多無陽性結(jié)果，無法指導(dǎo)合理有效治療方案的制定，常造成病情貽誤甚至進展，影響患者預(yù)后質(zhì)量[8-9]。因此，越來越多的學(xué)者開始強調(diào)急性呼吸道感染病原學(xué)診斷的必要性[10]。

機體遭受病原體感染后，最早出現(xiàn)的抗體即為IgM，通常發(fā)病后1周內(nèi)即可在血清中檢測到特異性IgM抗體，且IgM在血清內(nèi)持續(xù)時間一般為1～3個月，因此，急性期特異性IgM抗體的升高能夠為呼吸道感染患者病原診斷提供重要參考[11]。與此同時，隨著免疫標(biāo)記技術(shù)的不斷成熟，間接免疫熒光法的快速、方便、成本低等優(yōu)勢進一步凸顯，且檢測過程中僅需1份血液標(biāo)本，檢測結(jié)果借助熒光顯微鏡即可做出準(zhǔn)確判斷，故可有效避免因操作者技術(shù)水平差異對檢測結(jié)果造成的影響[12-13]。

我們使用的試劑盒可同時檢測11種呼吸道病原體IgM抗體，且該法可通過IgG抗體吸附處理待檢血清，有效去除血清內(nèi)IgG抗體沉淀，從而使診斷的特異性及靈敏度進一步提高[14-15]。783例急性呼吸道感染患者IgM抗體陽性率可達39.72%，且以單一感染、雙重感染為主，說明該檢測不僅能夠快速、準(zhǔn)確地確定致病因子，還可有效發(fā)現(xiàn)多種病原體合并感染，從而為臨床早期診斷及針對性抗菌藥物的選擇提供可靠的參考。同時，在病原體分布情況的觀察中，可以發(fā)現(xiàn)，INFA、INFB是最常見的急性呼吸道感染病原體，與國內(nèi)其他學(xué)者報道一致[16]，說明流感病毒仍為當(dāng)前臨床流行強度較高的呼吸道病原體。通過對不同年齡、不同性別患者病原體分布的對比，可以發(fā)現(xiàn)，＜18歲的急性呼吸道感染患者，其致病病原體以INFA為主，而老年患者LP的IgM抗體陽性率則偏高，其原因考慮與兒童、青少年免疫防御功能發(fā)育尚不完善，以及老年人群免疫功能特別是氣道防御功能的衰退有關(guān)[17]。同時，女性患者INFA、MP、LP、PIV的IgM抗體陽性率均偏高，這可能與不同性別間免疫功能、生理結(jié)構(gòu)、激素水平的差異有關(guān)[18]，但具體機制有待進一步探索。

表1 患者病原體分布情況（n/%）

綜上所述，急性呼吸道感染患者IgM抗體陽性率較高，且不同年齡、不同性別患者病原體分布存在一定差異，IgM檢測技術(shù)操作簡便、具有易于推廣的優(yōu)勢。

[1] ADNEY D R, VAN DOREMALEN N, BROWN V R, et al.Replication and shedding of MERS-CoV in upper respiratory tract of inoculated dromedary camels[J]. Emerg Infect Dis,2014, 20(12): 1999.

[2] LU Q B, WO Y, WANG H Y, et al. Detection of enterovirus 68 as one of the commonest types of enterovirus found in patients with acute respiratory tract infection in China[J]. Int J Med Microbiol, 2014, 63(3): 408-414.

[3] 荀春華, 張賢敏, 高志亮, 等. 九江地區(qū)1672例呼吸道感染患者呼吸道病原體的IgM的檢測和分析[J]. 細胞與分子免疫學(xué)雜志, 2015, 31(3): 391-393.

[4] ESPOSITO S, MARCHISIO P, PRADA E, et al. Impact of a mixed bacterial lysate (OM-85 BV) on the immunogenicity,safety and tolerability of inactivated influenza vaccine in children with recurrent respiratory tract infection[J]. Vaccine,2014, 32(22): 2546-2552.

[5] MAZUR N I, MARTINóN-TORRES F, BARALDI E, et al.Lower respiratory tract infection caused by respiratory syncytial virus: current management and new therapeutics[J]. Lancet Respir Med, 2015, 3(11): 888-900.

[6] LEYVA-GRADO V H, TAN G S, LEON P E, et al. Direct administration in the respiratory tract improves efficacy of broadly neutralizing anti-influenza virus monoclonal antibodies[J]. Antimicrob Agents Chemother, 2015, 59(7): 4162-4172.

[7] 嚴小夢, 葉劍榮, 楊芳慧. EB病毒IgG、IgA、IgM抗體和EB-DNA檢測在兒童呼吸道感染性疾病中的診斷價值[J]. 實用預(yù)防醫(yī)學(xué), 2015, 22(5): 541-543.

[8] CORMAN V M, ALBARRAK A M, OMRANI A S, et al. Viral shedding and antibody response in 37 patients with Middle East respiratory syndrome coronavirus infection[J]. Clin Infect Dis,2015, 62(4): 477-483.

[9] ZUMLA A, MEMISH Z A, MAEURER M, et al. Emerging novel and antimicrobial-resistant respiratory tract infections:new drug development and therapeutic options[J]. Lancet Infect Dis, 2014, 14(11): 1136-1149.

[10] JESPERSEN L, TARNOW I, ESKESEN D, et al. Effect of Lactobacillus paracasei subsp. paracasei, L. casei 431 on immune response to inf l uenza vaccination and upper respiratory tract infections in healthy adult volunteers: a randomized,double-blind, placebo-controlled, parallel-group study[J]. Am J Clin Nutr, 2015, 101(6): 1188-1196.

[11] HAAGMANS B L, AL DHAHIRY S H S, REUSKEN C B E M, et al. Middle East respiratory syndrome coronavirus in dromedary camels: an outbreak investigation[J]. Lancet Infect Dis, 2014, 14(2): 140-145.

[12] MEYER B, MüLLER M A, CORMAN V M, et al. Antibodies against MERS coronavirus in dromedary camels, United Arab Emirates, 2003 and 2013[J]. Emerg Infect Dis, 2014, 20(4): 552.

[13] 孫彬, 吳純, 韓冰, 等. 九種呼吸道感染病原體的IgM抗體檢測結(jié)果分析[J]. 標(biāo)記免疫分析與臨床, 2015, 22(7): 604-607.

[14] KHALAFALLA A I, LU X, AL-MUBARAK A I A, et al.MERS-CoV in upper respiratory tract and lungs of dromedary camels, Saudi Arabia, 2013–2014[J]. Emerg Infect Dis, 2015,21(7): 1153.

[15] ZLATEVA K T, DE VRIES J J C, COENJAERTS F E J, et al.Prolonged shedding of rhinovirus and re-infection in adults with respiratory tract illness[J]. Eur Respir J, 2014, 44(1): 169-177.

[16] 余珍波. 860例兒童急性呼吸道感染病原體分析[J]. 放射免疫學(xué)雜志, 2013, 26(2):249-250.

[17] ZUMLA A, HUI D S, PERLMAN S. Middle East respiratory syndrome[J]. Lancet, 2015, 386(9997): 995-1007.

[18] KARHU J, ALA-KOKKO T I, VUORINEN T, et al. Lower respiratory tract virus findings in mechanically ventilated patients with severe community-acquired pneumonia[J]. Clin Infect Dis, 2014, 59(1): 62-70.