9 865例兒科七項呼吸道病毒感染檢測及分析

[摘要] 目的 通過分析該院兒科近3年內七項呼吸道病毒感染的分布情況，病原學確診可為兒科醫(yī)生診療兒科呼吸系統(tǒng)疾病提供重要依據(jù)。 方法 收集整理并分析該院兒科2015年1月—2017年11月送檢9 865例呼吸道檢測咽拭子，對腺病毒（ADV）、流感病毒A型（IA）、流感病毒B型（IB）、呼吸道合胞病毒（RSV）、副流感病毒1型、2型、3型（P1、P2、P3） 釆用直接免疫熒光法進行檢測。 結果 9 865例兒科送檢的呼吸道咽拭子標本中，檢測陽性病例1 847例，單項病毒感染1 822例，雙重及以上感染25例，總陽性率18.79% 。其中呼吸道合胞病毒（10.31%）、甲型流感病毒（3.32%）、副流感病毒3型（2.48%），感染率位居前3位。陽性檢出病例各年齡段均有，以年齡小于6歲者為主。 結論 呼吸道合胞病毒（RSV）在該院兒科七項呼吸道病毒檢測中發(fā)現(xiàn)感染率居首，其流行與季節(jié)交替變化有明顯關聯(lián)，特別是冬春季溫度低、氣溫變化大好發(fā)，其它病毒感染次之；防治七項呼吸道病毒感染的重點監(jiān)控人群是機體免疫力低下的嬰幼兒和兒童，病原體的早期檢出可以為臨床醫(yī)生診斷和治療呼吸道疾病提供依據(jù)。

[關鍵詞] 七項呼吸道病毒感染檢測；兒科；直接熒光免疫法

[中圖分類號] R4 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-0742（2018）03（b）-0174-05

Test and Analysis of Seven Respiratory Virus Infections of 9 865 Cases in the Department of Pediatrics

ZHANG Zhong-yuan

Department of Clinical Laboratory， Nanping First Hospital Affiliated to Fujian Medical University， Nanping， Fujian Province， 353000 China

[Abstract] Objective To analyze the distributions and pathological diagnosis of seven respiratory virus infections of 9865 cases in the department of pediatrics in recent three years， thus providing important basis for the respiration system diseases in the department of pediatrics for the doctors. Methods 9 865 cases of throat swabs tested by the respiration tract in our hospital from January 2015 to November 2017 were collected， and the ADV， IA， IB， RSV， parainfluenza virus type 1， type 2 and type 3， were tested by the direct immunofluorescence. Results Of 9 865 cases of throat swab specimens of the respiration tract submitted by the department of pediatrics showed that there were 1 847 positive cases， and 1 822 cases with single virus infection， and 25 cases with double or above infections， and the total positive rate was 18.79%， including the respiratory syncytial virus（10.31%）， influenza A virus （3.32%） and Para influenza virus-3 （2.48%）， and the infection rate was in the top three， and the positive cases existed in various age phases， dominated by the patients aged less than 6 years old. Conclusion The infection rate of RSV in the test of seven respiratory virus infections is in the first place， and the prevalence is obviously correlated with the seasonal alternation， especially in the winter and spring， other viruses infections are in the second place， and the key monitoring group is the infants and children with low organ immunity， and the early test of pathology can provide basis for the diagnosis and treatment of respiration tract diseases by the clinical doctors.

[Key words] Test of seven respiratory virus infections； Department of pediatrics； Direct immunofluorescence

呼吸道感染位居各類感染之首，常引起世界各地區(qū)暴發(fā)或流行。在急性呼吸道感染中，尤其是病毒感染常呈現(xiàn)患病率高、傳播速度較快、感染病原體不斷演化變異等各種臨床特點，在感染人群不容易形成持續(xù)免疫力，這給臨床病情的有效感染控制帶來了極大的挑戰(zhàn)[1]。呼吸道感染的感染病毒種類多抗原存在變異性大，臨床出現(xiàn)的癥狀體征非常相似，鑒別診斷對醫(yī)生是個挑戰(zhàn)，實驗室檢測對病原學鑒定具有重要意義。現(xiàn)研究表明兒童時期呼吸道感染發(fā)病率最高，是我國兒童最常見的疾病之一也是重要的導致兒童死亡的原因，應引起醫(yī)師和家長們的重視[2]?，F(xiàn)收集整理該院2015年1月—2017年11月送檢9 865例兒科呼吸道檢測標本，對常見七項目呼吸道病毒釆用直接免疫熒光法進行檢測分析，通過病原體的早期檢出可以為臨床醫(yī)生診斷和治療呼吸道疾病提供依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集整理因急性呼吸道感染在南平市第一醫(yī)院就診的門診與住院兒科病例9 865例，全部病例均符合全國急性呼吸道感染診斷標準，所有患者中男為5 012例，女為4 853例，年齡為0～16周歲，重點人群為6歲及以下兒童（8 878/9 865，90 %）。該研究已征得患兒及家屬知情同意，得到福建醫(yī)科大學附屬南平第一醫(yī)院倫理委員會的批準通過，并嚴格遵循1975年的《赫爾辛基宣言》的倫理指南。

1.2 檢測原理及方法

1.2.1 檢測原理 將標記有熒光素（FITC）的特異性單克隆抗體與人鼻咽部呼吸道病毒感染的上皮細胞特異性抗原結合，形成待檢測的抗原-抗體結合物，在日本Olympus熒光顯微鏡觀察到綠色熒光即為陽性標本。

1.2.2 標本采集 由兒科醫(yī)生用專用呼吸道咽拭子在病人鼻咽部刮擦取樣或者使用生理鹽水鼻腔灌洗。將鼻咽拭子置于生理鹽水管中，必須24 h內送至檢驗科。

1.2.3 檢測試劑與方法 七項呼吸道病毒專用檢測試劑盒由美國Diagnostic Hybrids ，Inc廠家研發(fā)。七項呼吸道病毒包括易侵害部位為眼部、呼吸道與腸粘膜的腺病毒（AD），易導致喉炎和肺炎及氣管炎的甲型流感病毒（IA），乙型流感病毒（IB），副流感病毒1型（P1），副流感病毒2型（P2），副流感病毒3型（P3），呼吸道合胞病毒（RSV）。檢測各項操作嚴格執(zhí)行SOP規(guī)程。

1.2.4 陽性結果判斷 在200倍Olympus熒光顯微鏡下找到每高倍鏡視野下≥2個綠色熒光細胞即判斷陽性標本，毎孔對應七項呼吸道病毒中一種，否則判斷陰性標本。高倍鏡視野下被Evans Blue染料染為紅色為陰性。

2 結果

2.1 七項呼吸道病毒陽性標本檢出分布

在9 865例送檢標本中，共檢出陽性1 847例，其中混合感染25例，單種病毒感染18 22例，5 012例男性患者中有942例陽性（942/5 012，18.79%），4 853例女性患者中有905例陽性（ 905/4 853，18.65%），二者陽性率差異無統(tǒng)計學意義。送檢中標本主要是RSV感染 （1 017/9 865，10.31%），其次為IA（328/9 865，3.32%）、P3（245/9 865，2.48%）、IB（110/9 865，1.11%）、P1（52/9 865， 0.53%）、AD（38/9 865，0.32%）、P2（32/9 865，0.32%）。混合感染25例（25/9 865，0.25%）。結果分布詳見表1。

2.2 七項呼吸道病毒感染與患者年齡的關系

9 865份標本中，6歲以下兒童對7種呼吸道病毒較容易感染，占總檢出陽性患者數(shù)的95.29%（1 760/1 847）?！?個月年齡組的組內檢出率最高（31.95%），其次為3～6歲年齡組（28.09%）、6個月～1歲年齡組（21.07%）、1～2歲年齡組（18.64%）、2～3歲年齡組（11.98%）、7～15歲年齡組（20.57%），>15歲年齡組（21.57%）。各年齡組患者都以RSV感染為主，其它病毒感染次之。結果詳見表2。

2.3 季節(jié)與七項呼吸道感染的關系

春、夏、秋、冬季的病毒檢出率分別為20.25%、15.08%、15.07%、22.01% ，七項呼吸道病毒冬春季節(jié)陽性檢出率高。呼吸道合胞病毒（RSV）在該院兒科七項呼吸道病毒檢測中發(fā)現(xiàn)感染率居首，其流行與季節(jié)交替變化有明顯關聯(lián)，特別是春冬季溫度低、氣溫變化大好發(fā)，其檢出率分別為10.65%、12.86%，夏季檢出率最低，僅為8.04%。P3四季的檢出率分別為3.00%、2.22%、2.18%、2.36%。其它呼吸道病毒結果詳見表3。

2.4 疾病與七項呼吸道感染的關系

病毒檢出在不同呼吸道感染疾病患者中的分布不同，以收集的9 865例病例中主要幾種病因進行討論，其中肺炎患者檢出率最高（24.02%），其余依次為發(fā)熱待查（21.81%）、上呼吸道感染（21.23%）、急性支氣管炎（20.16%）、抽搐驚厥待查（19.12%）、急性支氣管肺炎（12.68%）。此外，130例哮喘急性發(fā)作患兒有9例病毒陽性（6.92%），176例腹瀉患兒有8例病毒陽性（4.55%）。結果見表4。

3 討論

毎年在美國、日本及歐洲大約有1億2千萬人感染流感病毒。而發(fā)生于2009年的甲型流感（H1N1）病毒大流行曾引發(fā)國際醫(yī)學界學者的高度關注，H1N1大流行主因在于沒有快速準確鑒別出甲型H1N1流感是導致肺炎的病原體[3]。因此在兒科中進行常規(guī)的七項呼吸道病毒檢測，是減少誤診、防止濫用抗生素，控制呼吸道疾病的暴發(fā)規(guī)模流行具積極意義。通常病毒是呼吸道感染的主要病原體，在小兒呼吸道感染中較為常見的是如下7項：IVA、IVB、RSV、PIVⅠ、PIVⅡ、PIVⅢ、ADV，而直接免疫熒光法檢測呼吸道病毒，是一種快速、高效、直觀、簡便的診斷呼吸道病毒感染最特異的方法。

南平地區(qū)地理位置上處于福建省西北部，降水較多，氣候潮濕，冬天氣溫低，冬春季氣溫變化大。七項呼吸道病毒各地呈現(xiàn)不同的流行形勢與年齡、季節(jié)、地域等關系密切[4]。該文收集2015年1月—2017年11月南平地區(qū)9 865份標本，有1 847例標本陽性，陽性總檢出率為18.79% 。在男性、女性陽性檢出率無明顯差別（其中男性18.79%，女性18.65%），單一感染1 822例，雙重感染25例。單一感染的主要病原為RSV（10.31%），其次為IA（328/9 865，3.32%）、P3（245/9 865，2.48%）、IB（110/9 865，1.11%）、P1（52/9 865，0.53%）、AD（38/9 865， 0.32%）、P2（32/9 865，0.32%）?；旌细腥?5例（25/9 865， 0.25%）。但是與賴劍秀等[5]報道的629例病毒當中，病毒陽性總檢出率為47.3%，構成比前3位的病 毒分別為FluA、RSV、FluB， 構 成 比 分 別 為38.63% （243/629）、31.48% （198/629）、12.08%（76/629）存在較大差異，這可能與所收集的標本數(shù)量，所取標本中含上皮細胞多少，患者的年齡構成或地區(qū)氣候差異相關[5]。有學者[6]經(jīng)過大量細致的調查及綜合分析，環(huán)境因素的綜合影響可能存在著差異變化大或者是數(shù)據(jù)的不確定性，氣候變化和地理位置的差異是重要的影響因素，實驗設計的不同可能影響了結果及數(shù)據(jù)的正確解釋。由于醫(yī)生樣本采集不規(guī)范或患者不配合導致咽拭子所含病毒感染的上皮細胞較少有關，也可能操作者水平差異引起細胞丟失相關，或與患者在標本采集前已接受聯(lián)合抗感染藥物，該研究顯示南平地區(qū)常見的七項呼吸道病毒陽性檢出率低于其它相關報道地區(qū)。

冬春季是雙重感染高發(fā)季節(jié)，其中P3合并RSV復合感染發(fā)現(xiàn)19例，IA合并P3復合感染發(fā)現(xiàn)6例。19例P3合并RSV復合感染病例年齡分布為6個月～2歲患兒，該年齡段尤其以RSV感染為主，P3感染其次，傾向于該混合感染以RSV感染為主，P3感染為伴隨感染的可能性較大。6例P3合并IA感染病例年齡段為1～2歲患兒，此年齡段P3陽性檢出率高于IA檢出率，故可能該混合感染以P3感染為主，IA感染為伴隨感染的可能性最大。從各年齡組來分析病毒的檢出率存在較大差異。該研究發(fā)現(xiàn) 1 847例七項呼吸道病毒感染兒童中RSV感染1 017例，陽性檢出率（10.31%），明顯高于其它六項呼吸道病毒，差異有統(tǒng)計學意義，近年來臨床醫(yī)生越來越重視兒童七項呼吸道病毒感染檢測，由于各地區(qū)、醫(yī)院、年份、季節(jié)及年齡的不同存在差別而引起七項呼吸道病毒感染病原譜不同，冬春季為高發(fā)季節(jié)，RSV是該院兒童呼吸道病毒感染的最重要致病因素，尤其是6歲以下患兒，遠高于其他病毒，與嚴華杰等[7]研究一致。提示 2007—2010 年，RSV 呈現(xiàn)秋初開始流行，至冬季發(fā)病高峰，在冬季組中 RSV 檢出最多（138例，13.6%），遠高于其他病毒，提示冬春季小嬰幼兒中預防 RSV 的非常重要，期盼著RSV疫苗的早日研發(fā)成功投入臨床使用。病原體的早期檢出可以為臨床醫(yī)生診斷和治療呼吸道疾病提供依據(jù)[8]。

呼吸道疾病的主要感染人群為0～2 歲的免疫力低下的新生兒及嬰幼兒，發(fā)熱呼吸道綜合征是目前全球發(fā)病最多的傳染病之一，約有 20 多種常見的呼吸道病毒可引起人體發(fā)熱及呼吸道癥狀。由于病毒的傳播、流行及進化深受地理環(huán)境、氣候、人口構成以及當?shù)剞r(nóng)業(yè)生產(chǎn)和經(jīng)濟發(fā)展等多種因素綜合影響，因此不同地區(qū)的發(fā)熱呼吸道綜合征存在著不同的病毒性病原譜構成[9]。小兒上呼吸道病毒感染的主要臨床特征為：入院時發(fā)現(xiàn)有不同程度上的流涕、鼻塞、咳嗽、肌肉痛、頭痛、咽痛、疲倦 、惡寒等癥狀，>50%，少數(shù)患兒伴隨全身中毒癥狀，而且大多年輕、沒有基礎疾病的人群構成為主[10]。對七項呼吸道病毒的病原學進行統(tǒng)計分析在一定程度上可以為臨床的有效診治及流感病毒的流行預測提供重要的參考價值[11]。

嬰幼兒由于免疫系統(tǒng)尚在發(fā)育中，呼吸道病毒感染性疾病的發(fā)病率較高，P3常引起3歲及以下嬰幼兒下呼吸道感染。病毒感染率呈現(xiàn)出明顯下降的趨勢與嬰幼兒隨著年齡的增長，以及日常通過與各種各樣病原體廣泛接觸而獲得相應免疫力，該研究提示嬰幼兒及兒童是防治七項呼吸道病毒感染的重點防控人群。呼吸道病毒在人群普遍容易感染特別在免疫力低下的人群及未發(fā)育完全的兒童健康危害性更大，給社會和家庭造成極大的疾病負擔和經(jīng)濟負擔[12]預防措施是關鍵環(huán)節(jié)。急性呼吸道感染是造成兒童感染和死亡的主要原因，而病毒是引起呼吸道感染的最主要病原菌，據(jù)統(tǒng)計分析，全世界至少有6%的人因為呼吸道疾病而導致傷殘或死亡。而病原體早期主要是侵犯鼻、咽、扁桃體以及喉部而引起人體炎癥，若炎癥進一步發(fā)展，可引起支氣管炎、支氣管擴張、肺壞死等疾病。因此，明確該地區(qū)七項呼吸道病毒的臨床分布及其特征，對于兒科呼吸道病毒引起呼吸系統(tǒng)疾病的預防及治療起到指導作用。

肺炎患者病毒檢出率在該研究中檢測的所有呼吸道病毒感染患者中最高（24.02%）。下呼吸道感染的病毒檢出率高于其他疾病，嬰幼兒急性呼吸道感染最常見病毒是RSV。發(fā)展中國家導致5歲以下兒童死亡的主要疾病是重癥肺炎，其致死率約20%～30%[5]，該院1 549例肺炎患兒病毒檢出率占24.02%，以RSV居首，準確，快捷檢測出病原體對于重癥肺炎患兒的預后及降低病死率具有指導價值。重癥肺炎研究在國內有很多新進展，有研究表明強離子隙（SIG）作為重癥肺炎患者病情危險分層、治療預后及有重要價值。相關研究表明，強離子隙和乳酸一樣，是新生兒貧血癥中酸堿失衡的一個重要檢測指標，強離子隙是一個新的、重要的判斷呼吸衰竭病人酸堿失衡的指標，對于臨床醫(yī)生適當適時補液糾正患者酸堿平衡失常，關鍵時刻搶救患者生命起到重要作用[13-14]。

各種急性呼吸道病毒感染是引起90%小兒哮喘的急性發(fā)作首要原因，且大多是由呼吸道病毒感染發(fā)病，該研究收集的130例哮喘急性發(fā)作患兒病毒陽性檢出率為6.92%。特別是發(fā)生在上呼吸道病毒感染后，63.9%的哮喘發(fā)作患兒在（4.2 ± 3.1）d 內發(fā)生哮喘急性發(fā)病，“呼吸道病毒感染誘導哮喘急性發(fā)作窗口期”平均時間大概4 d，直接免疫熒光法可以在2 h內準確檢出病原體，在此期間如果及時進行相關檢測，可為臨床醫(yī)師采取相應措施防治哮喘的急性發(fā)作起到?jīng)Q定性作用。

該文的研究結果顯示呼吸道合胞病毒（RSV）在該院兒科七項呼吸道病毒檢測中發(fā)現(xiàn)感染率居首，其流行與季節(jié)交替變化有明顯關聯(lián)，特別是冬春季溫度低、氣溫變化大而好發(fā)，其它病毒感染次之；防治七項呼吸道病毒感染的重點監(jiān)控人群是機體免疫力低下的嬰幼兒和兒童，病原體的早期檢出可以為臨床醫(yī)生診斷和治療呼吸道疾病提供依據(jù)。

[參考文獻]

[1] Kabir MS，Clements MO，Atkins M，et al. Application of RT-Bst enhance detection of pathogenic viruses of the respiratory tract [J]. Br J Biomed Sci，2015，72（3）：128-134.

[2] 俞漣芳，張晨美，邵媛仙，等.呼吸道病毒感染患兒的臨床分析[J].中華醫(yī)院感染學雜志，2016，26（12）：2846-2847.

[3] Andrew C. Miller，Ramanand A. Subramanian，F(xiàn)arnaz Safi，et al.Influenza A 2009 （H1N1） Virus in Admitted and Critically Ill Patients[J].Journal of Intensive Care Medicine.2012：25-31.

[4] 張雪清，胡駿，寧小曉，等.2 425 例小兒呼吸道感染 7 種常見病毒檢出情況分析[J].檢驗醫(yī)學，2013，28（7）：602-605.

[5] 賴劍秀，段達榮，宋相泉，等.629例住院兒童臨床七種常見呼吸道病毒分布特征[J].中國微生態(tài)學雜志，2016，28（3）：316-319.

[6] Pica N，Bouvier NM.Environmental Factors Affecting the Transmission of Respiratory Viruses[J].Curr Opin Virol，2012，2（1）：90–95.

[7] 嚴華杰，盛 軍，董 蔚，等. 2007—2013年上海南翔醫(yī)院急性呼吸道感染患兒咽拭病毒譜季節(jié)流行特征分析[J].中國實用兒科雜志，2016，31（3）：206-210.

[8] 徐淼玲，陸灶其，梁大立，等.兒童呼吸道感染7種呼吸道病毒抗原檢測結果分析[J].檢驗醫(yī)學與臨床，2016，13（6）：813-815.

[9] 王雅靜，武婕，康敏，等.2009—2012 年廣東省發(fā)熱呼吸道綜合征病毒性病原譜分析[J].廣東醫(yī)學，2016，37（8）：1197-1202.

[10] 朱益飛，張晨美，周招美，等.小兒急性上呼吸道病毒感染病原學與臨床特征研究[J].中華醫(yī)院感染學雜志，2015， 25（23）：5473-5474.

[11] 許宏濤，李毅，陳東科，等. 北京地區(qū)成人呼吸道病毒感染流行病學分析[J].檢驗醫(yī)學，2016，31（6）：499-502.

[12] Tsukagoshi H，Ishioka T，Noda M，et al.Molecular epidem iologyof respiratory viruses in virus-induced asthma[J]. Front Microbi-ol，2013（4）：278.

[13] 張忠源，胡望平，池細弟，等.強離子隙等指標在重癥肺炎中的應用價值分析[J].國際檢驗醫(yī)學雜志，2013，34（2）：136-137.

[14] 張忠源，章濤.強離子隙等指標在急性呼吸衰竭中的應用[J].醫(yī)學研究雜志，2015，44（10）：64-67.

（收稿日期：2017-12-19）