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    “益氣調(diào)血、扶本培元”藥線灸對多發(fā)梗死性癡呆大鼠空間記憶的影響

    2018-06-25 06:57:02羅本華郭雅雯彭敏家張亞飛覃斌寧
    中國老年學(xué)雜志 2018年11期
    關(guān)鍵詞:羅本藥線益氣

    羅本華 郭雅雯 彭敏家 張亞飛 王 燕 覃斌寧

    (廣西中醫(yī)藥大學(xué),廣西 南寧 530001)

    記憶減退、認(rèn)知障礙等為血管性癡呆(VD)核心癥狀。神經(jīng)行為學(xué)實(shí)驗(yàn)常用于評估這種認(rèn)知功能的情況,“益氣調(diào)血、扶本培元”藥線灸法是基于“三焦氣化失司理論”闡釋老年期癡呆的發(fā)病觀〔1〕、病機(jī)觀〔2〕及治療觀〔3〕,“益氣調(diào)血、扶本培元”針法多年臨床與實(shí)驗(yàn)研究〔4〕、取穴優(yōu)選組方〔5〕,結(jié)合特色的壯醫(yī)藥線灸刺激新創(chuàng)的一種老年期癡呆灸療新法;已取得其改善VD患者癥狀和認(rèn)知功能〔6,7〕的證據(jù),動物實(shí)驗(yàn)證實(shí)其改善多發(fā)梗死性癡呆(MID)模型大鼠中樞海馬乙酰膽堿(ACh)、Ach酯酶(AChE)與膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(ChAT)含量〔8〕的作用,提出其可能通過中樞ACh信息傳遞和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)起作用的假設(shè)機(jī)制。本實(shí)驗(yàn)觀察“益氣調(diào)血、扶本培元”藥線灸法對MID大鼠神經(jīng)行為學(xué)的影響。

    1 材料與方法

    1.1材料與試劑 健康SPF級Wistar雄性大鼠100只,體重(280±20)g,由廣西醫(yī)科大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心提供;室內(nèi)溫度18℃~22℃,相對濕度45%,室內(nèi)采光按照白晝循環(huán)模式,標(biāo)準(zhǔn)粒飼料定時(shí)喂養(yǎng),自由飲水,適應(yīng)性喂養(yǎng)15 d。儀器為Eppendorf research plus單道可調(diào)整支消毒移液器(10 μl、200 μl及1 000 μl,編號:3120000),12號彎錫灌胃針(GWL-12W),TM-vision行為學(xué)實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)(成都泰盟軟件有限公司)。

    1.2動物分組 采用隨機(jī)數(shù)字表法將大鼠隨機(jī)分為正常組10只、假手術(shù)組10只和預(yù)用栓子造模組80只;栓子造模組在經(jīng)過MID造模成功53只入選,Morris水迷宮篩選,剔除不符合癡呆標(biāo)準(zhǔn)(8只)及死亡(5只),最后入選40只,隨機(jī)分為模型組、藥線灸組、藥物組和藥線非穴組各10只。

    1.3MID造模方法〔9〕取同種大鼠股動脈采血,無菌條件下于37℃溫箱內(nèi)自然干燥24 h,用100目篩子過篩,制備200 μm以下的血凝塊備用。應(yīng)用時(shí)每10 mg血栓加0.3 ml生理鹽水制成混懸液。3.5%水合氯醛按35 mg/100 g體重腹腔麻醉。頸正中切開皮膚(約1 cm),剝離胸骨舌骨肌、肩胛舌骨肌與胸骨乳突肌,暴露頸外動脈,分離頸外動脈上兩分支,避開兩分支,分別在頸外動脈上備2根手術(shù)縫合線,結(jié)扎遠(yuǎn)心端,近心端先套一活結(jié)。用兒科4號頭皮針針頭逆行穿刺右頸外動脈至右頸內(nèi)動脈起始處,隨即用1 ml注射器緩慢(60~90 s)注入栓子鹽水懸液0.3 ml,使栓子通過頸內(nèi)動脈進(jìn)入顱內(nèi)至大腦各動脈,造成多灶性腦梗死,然后結(jié)扎頸外動脈,縫合皮膚。切口處滴注慶大霉素抗感染。假手術(shù)組手術(shù)方法同模型制作,只是注射時(shí)以生理鹽水0.3 ml代替栓子溶液。

    1.4模型篩選 栓子造模組于造模后7 d進(jìn)行Morris水迷宮隱蔽平臺試驗(yàn),連續(xù)訓(xùn)練5 d,2次/d。取第5天正常組逃避潛伏期均值為參考值,同時(shí)計(jì)算栓子造模組第5天平均逃避潛伏期與參考值之差占該鼠的平均逃避潛伏期時(shí)間的比值,該值>20%定為癡呆鼠。符合癡呆條件的動物待用。

    1.5干預(yù)方法及療程 干預(yù)方法:模型組給予藥線灸組相同時(shí)間、相同程度的捉抓刺激。藥物組于造模并癡呆篩選后將1 mg·kg-1·d-1鹽酸多奈哌齊溶于2 ml生理鹽水中灌胃,于每日早晨8:00灌胃。藥線灸組治則與取穴,與“益氣調(diào)血、扶本培元”針法相同。藥線灸操作方法:按《壯醫(yī)藥線灸療法》采用2號藥線(直徑0.5 mm),輕刺激手法點(diǎn)灸,按“先上后下、先軀干再四肢、先陽后陰:次序點(diǎn)灸以上相應(yīng)腧穴各1壯。藥線非穴組選取雙側(cè)肋下2個(gè)固定非穴點(diǎn),針刺雙側(cè)肋下各兩個(gè)固定非穴點(diǎn)〔9〕,約相當(dāng)于乳正中線外開2.5 mm肋弓下1 mm平行肋弓方向向外下斜刺3 mm;作為對照刺激點(diǎn),輕刺激手法藥線灸左3右4壯,或左4右3壯,交替。假手術(shù)組給予藥線灸組相同時(shí)間、相同程度的捉抓刺激。正常組給予藥線灸組相同時(shí)間、相同程度的捉抓刺激。療程:各組每天做相應(yīng)處理1次,第8、16天各停1次,連續(xù)21次治療。

    1.6行為學(xué)實(shí)驗(yàn)方案測試 Morris水迷宮參照文獻(xiàn)制作〔10,11〕由圖像自動采集和分析系統(tǒng)(成都泰盟軟件有限公司,TM-vision行為學(xué)實(shí)驗(yàn)系統(tǒng))自動分析和處理,包括動物的逃避潛伏期、游泳路徑、穿越原平臺的次數(shù)、游泳路線的長度等參數(shù)。水迷宮實(shí)驗(yàn)方法與操作參考文獻(xiàn)〔11〕。除探索試驗(yàn)記錄大鼠在60 s內(nèi)外,其余每次水迷宮時(shí)間均設(shè)90 s。水迷宮實(shí)驗(yàn)在針刺等干預(yù)后次日進(jìn)行;實(shí)驗(yàn)程序包括第1~2天共2 d的隱蔽平臺試驗(yàn),第3天為探索試驗(yàn),第4~6天共3 d反向試驗(yàn)及第7天的可視平臺試驗(yàn)。取每天兩次檢測的平均潛伏期時(shí)間均值為學(xué)習(xí)成績;以評價(jià)各組學(xué)習(xí)記憶能力變化。

    1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS16.0軟件進(jìn)行方差分析及組間兩兩比較,方差齊時(shí)選用LSD法檢驗(yàn),方差不齊時(shí)選用DunnettT3法檢驗(yàn)。

    2 結(jié) 果

    2.1隱蔽平臺試驗(yàn) 模型組平均潛伏期下降緩慢而正常組下降明顯,于第2天,組間出現(xiàn)顯著性差異(P=0.016);模型組平均潛伏期較正常組顯著長,也較假手術(shù)組顯著長,但假手術(shù)組與正常組無差異;藥線灸組較模型組、非穴組均明顯縮短,而藥物組沒有出現(xiàn)這種顯著性差異。見圖1和表1。

    2.2反向試驗(yàn) 在連續(xù)3 d的反向試驗(yàn)中,正常組和模型組逃避潛伏期時(shí)間均隨訓(xùn)練天數(shù)的增加而逐漸下

    降,再學(xué)習(xí)成績穩(wěn)步提高,反映針刺治療和水迷宮的訓(xùn)練顯著性改善再學(xué)習(xí)和記憶作用(P<0.01);訓(xùn)練天數(shù)與組間因素之間沒有交互作用(P>0.05)。各天組間因素兩兩比較發(fā)現(xiàn):模型組平均逃避潛伏期時(shí)間下降緩慢而正常組下降顯著;第4天組間比較出現(xiàn)顯著性差異(P<0.05),模型組平均逃避潛伏期時(shí)間顯著高于正常組(P<0.01)和假手術(shù)組(P<0.05),藥線灸組和藥物組均顯著性低于MID模型組(P<0.05),而藥線灸組又顯著性低于非穴組(P<0.05);此后2 d,第6天藥物組與模型組無顯著性差異,表現(xiàn)作用不穩(wěn)定,藥物組和藥線炙組無顯著性差異。見圖1和表1。

    圖1 6組隱蔽、反向及可視平臺試驗(yàn)的平均逃避潛伏期趨勢

    2.3空間探索試驗(yàn) 各組空間探索試驗(yàn)平均潛伏期有非常顯著性差異(P<0.01)。模型組比正常組穿越原平臺次數(shù)明顯減少(P<0.01);藥物組雖較模型組能增加穿越原平臺次數(shù),但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;而藥線灸組穿越原象限平臺次數(shù)明顯增加,且分別比模型組、藥物組及非穴組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見圖1和表1。

    2.4可視平臺試驗(yàn) 平均逃避潛伏期時(shí)間方面,6組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);平均運(yùn)動速度方面,6組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見圖1和表1。

    表1 6組水迷宮中平均逃避潛伏期時(shí)間

    與正常組比較:1)P<0.05,2)P<0.01;與模型組比較:3)P<0.05,4)P<0.01;與藥線灸非穴組比較:5)P<0.05,6)P<0.01;與藥物組比較:7)P<0.05

    3 討 論

    VD臨床以認(rèn)知功能障礙癥候?yàn)楹诵陌Y狀,兼有一些局灶性神經(jīng)系統(tǒng)癥狀、神經(jīng)心理癥狀和精神行為異常。動物研究常采用神經(jīng)行為學(xué)實(shí)驗(yàn)來檢測這種認(rèn)知功能狀況。本實(shí)驗(yàn)提示各組大鼠在感覺或運(yùn)動功能方面均無顯著差異,不對空間學(xué)習(xí)記憶產(chǎn)生顯著性差異,提示該實(shí)驗(yàn)具有可比性。藥線灸法有療效優(yōu)勢。藥線灸方法較藥物治療是更合適和更優(yōu)選的方法,為進(jìn)一步深入可能的通過中樞ACh信息傳遞及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的作用機(jī)制假說研究提供了鋪墊;藥線灸方法是較西醫(yī)金標(biāo)準(zhǔn)藥物多奈哌齊治療是更佳和更適宜的方法,原因或與壯醫(yī)藥線灸法顯示的多途徑、多靶點(diǎn)和多層次作用有關(guān),綜合改善VD認(rèn)知功能障礙作用是其取效的關(guān)鍵,這正是單一靶點(diǎn)金標(biāo)準(zhǔn)藥物所不具備的,多奈哌齊治療不可避免有其局限性、單一靶點(diǎn)性及副作用。

    4 參考文獻(xiàn)

    1羅本華,趙 嵐,成海燕,等.論老年期癡呆是生命氣化階段性異常病變〔J〕.中國老年學(xué)雜志,2014;34(13):3791-5.

    2羅本華,成海燕,趙 嵐,等.論生命氣化階段性失常是衰老病機(jī)之長〔J〕.遼寧中醫(yī)雜志,2012;39(12):2391-4.

    3羅本華,于建春,成海燕,等.論三焦氣化是腦神的基礎(chǔ)〔J〕.遼寧中醫(yī)雜志,2010;37(6):1004-7.

    4羅本華.“益氣調(diào)血、扶本調(diào)源”針法治療血管性癡呆研究進(jìn)展〔J〕.中國老年學(xué)雜志,2014;34(14):4091-2.

    5羅本華,張雪竹,趙 嵐,等.三種針法對快速老化癡呆模型小鼠老化評分及行為學(xué)影響研究〔J〕.環(huán)球中醫(yī)藥,2013;6(3):165-71.

    6羅本華,于建春,吳躍強(qiáng),等.“益氣調(diào)血、扶本調(diào)源”藥線灸療法治療輕中度血管性癡呆30例〔J〕.中國老年學(xué)雜志,2014;34(11):3134.

    7羅本華,于建春,胡躍強(qiáng),等.“益氣調(diào)血、扶本培源”藥線灸治療輕中度血管性癡呆臨床觀察〔J〕.時(shí)珍國醫(yī)國藥,2015;26(3):649-51.

    8羅本華,羅梅桂,張亞飛,等.“益氣調(diào)血、扶本培元”藥線灸對多發(fā)梗塞性癡呆大鼠海馬乙酰膽堿、乙酰膽堿脂酶與乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶含量影響的研究〔J〕.中國老年學(xué)雜志,2016;37(8):4467-9.

    9Liu CZ,Yu JC,Cheng HY,etal.Spatial memory performance and hippocampal neuron number in osteoporotic SAMP6 mice〔J〕.Exp Neurol,2006;201(2):452-60.

    10Morris R.Developments of a water-maze procedure for studying spatial learning in the rat〔J〕.Neurosci Meth,1984;11(1):47-50.

    11Yu J,Liu C,Zhang X,etal.Acupuncture improved cognitive impairment caused by multi-infarct dementia in rats〔J〕.Physiol Behav,2005;86(4):434-41.

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