結(jié)直腸腺癌中DNA結(jié)合/分化抑制蛋白-1和血管內(nèi)皮生長因子-C的表達(dá)及意義

劉 寧 繆 巍 燕 速 馬曉明 楊賢達(dá)

(青海大學(xué)附屬醫(yī)院胃腸腫瘤外科，青海 西寧 810001)

結(jié)直腸腺癌主要見于中老年人，病變形成后的主要播散途徑是淋巴道播散〔1〕。近年人們關(guān)注腫瘤間質(zhì)的淋巴結(jié)管生成，認(rèn)為淋巴管新生與淋巴管生成因子有關(guān)，最重要的淋巴管生成因子是血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)-C，其可以與受體結(jié)合，促進(jìn)間質(zhì)的淋巴管新生，為轉(zhuǎn)移提供必要的結(jié)構(gòu)〔2,3〕。DNA結(jié)合/分化抑制蛋白(ID)-1是近年發(fā)現(xiàn)的一種分化抑制因子，通過抑制環(huán)-螺旋-環(huán)轉(zhuǎn)錄因子的作用調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的增殖及轉(zhuǎn)移〔4〕。本文關(guān)注結(jié)直腸腺癌中ID-1和VEGF-C的表達(dá)特點(diǎn)，探討其臨床價(jià)值。

1 資料與方法

1.1臨床資料 2016年1～12月青海大學(xué)附屬醫(yī)院住院治療、經(jīng)病理學(xué)確診并行手術(shù)根治的患者67例為觀察組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①臨床資料完整；②符合WHO中的診斷標(biāo)準(zhǔn)；③患者或家屬簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①伴有其他器官惡性腫瘤；②林奇綜合征；③腸道疾病手術(shù)史；④術(shù)前有放、化療史。其中男35例，女32例，年齡46～86歲，平均57.3歲。上述患者標(biāo)本中距腫物邊緣>8 cm的非腫瘤性結(jié)腸黏膜組織45例為對(duì)照組。其中男23例，女22例，年齡47～81歲，平均58.3歲。兩組性別、年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。

1.2ID-1和VEGF-C表達(dá)檢測 兩組均應(yīng)用免疫組化二步法檢測ID-1和VEGF-C的表達(dá)。ID-1和VEGF-C試劑均為標(biāo)準(zhǔn)的濃縮液，先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，按不同比例進(jìn)行稀釋，選擇染色效果最好的濃度用在正式實(shí)驗(yàn)，即ID-1配比濃度是1∶50，VEGF-C配比濃度是1∶100。正式實(shí)驗(yàn)均由同一技師進(jìn)行操作，二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色，做好質(zhì)控工作。

1.3ID-1和VEGF-C結(jié)果 ID-1和VEGF-C的陽性表達(dá)部位均為腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)(部分病例的間質(zhì)中的弱表達(dá)不計(jì)為陽性)。著色強(qiáng)度：無著色為0分；弱著色為1分，中等程度著色為2分，強(qiáng)著色為3分。選擇上皮細(xì)胞分布區(qū)且染色較為明顯的區(qū)域進(jìn)行計(jì)數(shù)，共選擇2個(gè)高倍視野，取平均值，以<5%為0分，≥5%且<10%為1分，≥10%且<30%為2分，≥30%且<50%為3分，以≥50%為4分。按著色強(qiáng)度和陽性率的評(píng)分之和進(jìn)行評(píng)定。以≤3分為陰性，>3分為陽性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)和線性相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1兩組中ID-1和VEGF-C表達(dá)的比較 觀察組ID-1和VEGF-C表達(dá)的陽性率明顯高于對(duì)照組(P<0.001)。見表1。

表1 兩組中ID-1和VEGF-C陽性表達(dá)的比較〔n(%)〕

2.2觀察組中ID-1和VEGF-C的陽性率在不同臨床特征分組中的比較 ID-1和VEGF-C表達(dá)與病變的增殖指數(shù)、脈管累犯和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，ID-1表達(dá)與腫瘤分化程度和浸潤深度密切相關(guān)。見表2。

2.3觀察組中ID-1和VEGF-C表達(dá)的相關(guān)性 ID-1和VEGF-C表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.54，P=0.041)。

表2 ID-1和VEGF-C在觀察組不同臨床特征中表達(dá)陽性率的比較〔n(%)〕

3 討 論

結(jié)直腸上皮細(xì)胞發(fā)生異型增生、癌變后，對(duì)肌層和周圍組織進(jìn)行侵犯，形成浸潤性腺癌〔5〕。腫瘤多為高、中分化的，具有腺管樣結(jié)構(gòu)，部分病例由于異型增生明顯，可以表現(xiàn)為低分化，并伴有黏液腺癌形成〔6〕。腫瘤間質(zhì)可以觀察到比正常結(jié)腸黏膜間質(zhì)更多的淋巴管，這些淋巴管可以為腫瘤細(xì)胞進(jìn)入淋巴循環(huán)提供直捷通路〔7〕。淋巴管在腫瘤進(jìn)展時(shí)是由淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞增殖后形成的，其中促進(jìn)增殖的因子最常見的是VEGF-C和VEGF-D，二者也被稱為淋巴管生長因子〔8,9〕。VEGF-C是最早發(fā)現(xiàn)的，也是作用最強(qiáng)的，其作用途徑是通過VEGF受體(VEGFR)2實(shí)現(xiàn)的，當(dāng)VEGF-C和VEGFR2結(jié)合后，使淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的DNA復(fù)制，細(xì)胞增生繁殖，同時(shí)在淋巴液的沖擊作用下形成管腔，使淋巴液在管腔中流動(dòng)，進(jìn)入淋巴管的腫瘤細(xì)胞通過此途徑形成轉(zhuǎn)移性播散〔10,11〕。ID-1基因具有癌基因的特征，被認(rèn)為有“永生化”的特征，其具有阻止細(xì)胞分化、促進(jìn)細(xì)胞增殖的作用〔12,13〕。也有研究認(rèn)為ID-1過度表達(dá)可以延遲細(xì)胞老化〔14〕。近年研究顯示ID-1高表達(dá)可以促進(jìn)血管生成，同時(shí)對(duì)淋巴管生成也有一定的調(diào)節(jié)作用，ID-1調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)移的過程主要是對(duì)脈管生成的促進(jìn)作用實(shí)現(xiàn)的〔15〕。本研究結(jié)果提示ID-1和VEGF-C二者具有癌基因樣的作用，是促進(jìn)腫瘤形成的重要因素。ID-1和VEGF-C表達(dá)上調(diào)后可以引起腫瘤細(xì)胞的失控性增殖、脈管侵犯和淋巴道播散的形成。ID-1可以調(diào)節(jié)腫瘤的分化和鄰近組織直接蔓延。ID-1升高時(shí)可以調(diào)節(jié)腺癌細(xì)胞的分化，而分化作為細(xì)胞在發(fā)育進(jìn)程中的表達(dá)過程，其也是細(xì)胞生長過程中不同時(shí)期細(xì)胞形態(tài)的反映，ID-1表達(dá)上調(diào)，細(xì)胞處于幼稚階段，腫瘤細(xì)胞異型性明顯，與起源組織的差別小，核染色深，此類細(xì)胞具有高度增殖的特征。本文結(jié)果提示，ID-1和VEGF-C二者具有正向協(xié)同作用，ID-1對(duì)淋巴管生成因子具有促進(jìn)作用〔16〕，因此ID-1的作用可能具有多向性。ID-1可能是上游基因，調(diào)節(jié)VEGF-C、表皮生長因子受體和磷酸肌醇-3-激酶/蛋白激酶B等信號(hào)通路，引起細(xì)胞增殖和遷移〔17〕。但是否ID-1/VEGF-C/VEGFR-3是一個(gè)淋巴管生成的通路有待更多實(shí)驗(yàn)證實(shí)。

4 參考文獻(xiàn)

1田衛(wèi)華,張 煦,蘇曉路,等.大腸癌組織中Id-1和P53表達(dá)的意義〔J〕.醫(yī)學(xué)爭鳴,2008;29(6):549-51.

2Onogawa S,Kitadai Y,Tanaka S,etal.Expression of VEGF-C and VEGF-D at the invasive edge correlates with lymph node metastasis and prognosis of patients with colorectal carcinoma〔J〕.Cancer Sci,2004;95(1):32-9.

3Ichikura T,Tomimatsu S,Ohkura E,etal.Prognostic significance of the expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) an d VEGF-C in gastric carcinoma〔J〕.J Surg Oncol,2001;78(2):132-7.

4Zhao Z,Zhang Z,Zhang H,etal.Overexpression of Id-1 protein is a marker in colorectal cancer progression〔J〕.Oncol Rep,2008;19(2):419-24.

5武雪亮,王立坤,薛 軍,等.Id-1在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及其臨床意義〔J〕.山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2016;47(3):228-31.

6武雪亮,王立坤,薛 軍,等.結(jié)直腸癌組織中Id-1表達(dá)、臨床意義及預(yù)后分析〔J〕.安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2016;51(8):1192-5.

8Bierer S,Herrmann E,Kopke T,etal.Lymphangiogenesis in kidney cancer:expression of VEGF-C,VEGF-D and VEGFR-3 in clear cell and papillary renal cell carcinoma〔J〕.Oncol Reports,2008;20(4):721-5.

9Li M,Chen H,Diao L,etal.Caveolin-1 and VEGF-C promote lymph node metastasis in the absence of intratumoral lymphangiogenesis in non-small cell lung cancer〔J〕.Tumori,2010;96(5):734-5.

10Stanton MJ,Dutta S,Zhang H,etal.Autophagy control by the VEGF-C/NRP-2 axis in cancer and its implication for treatment resistance〔J〕.Cancer Res,2013;73(1):160-2.

11Simiantonaki N,Jayasinghe C,Michelschmidt R,etal.Hypoxia-induced epithelial VEGF-C/VEGFR-3 upregulation in carcinoma cell lines〔J〕.Int J Oncol,2008;32(32):585-92.

12Zhang X,Ling M,Wong Y,etal.Evidence of a novel antiapoptotic factor:role of inhibitor of differentiation or DNA binding (Id-1) in anticancer drug-induced apoptosis〔J〕.Cancer Sci,2007;98(3):308-14.

13Qiu J,Wang G,Zheng Y,etal.Coordination of Id1 and p53 activation by oxidized LDL regulates endothelial cell proliferation and migration〔J〕.Ann Biomed Engineer,2011;39(12):2869-70.

14Dong Z,Liu S,Zhou C,etal.Overexpression of Id-1 is associated with tumor angiogenesis and poor clinical outcome in oral squamous cell carcinoma〔J〕.Oral Oncol,2010;46(3):154-7.

15Yuen H,Chan Y,Chan K,etal.Id-1 and Id-2 are markers for metastasis and prognosis in oesophageal squamous cell carcinoma〔J〕.Brit J Cancer,2007;97(10):1409-10.

16Dong Z,Wei F,Zhou C,etal.Silencing Id-1 inhibits lymphangiogenesis through down-regulation of VEGF-C in oral squamous cell carcinoma〔J〕.Oral Oncol,2011;47(1):27-8.

17陳晶晶,陳 柯,王曉秋.子宮內(nèi)膜癌組織中Id-1、VEGF-C和EGFR的表達(dá)及臨床意義〔J〕.臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志,2010;26(2):183-6.