廖文勝 李江發(fā) 何陽陽
(廣西壯族自治區(qū)南溪山醫(yī)院肝膽胰脾外科,廣西 桂林 541002)
原發(fā)性肝細胞癌是肝細胞異型增生來源的腫瘤,病變常與肝炎病毒感染有關,病變形成后具有侵襲和播散的特征〔1〕。腫瘤在侵襲時常常與細胞間黏附和細胞外基質降解有關?;|金屬蛋白酶(MMP)-14是細胞外基質中的重要蛋白,其在腫瘤中表達升高時具有降解細胞外基質的作用〔2〕。磷脂酶Cε(PLCE)1是近年認識的一種基因,是磷脂酰肌醇信號通路中的關鍵酶〔3〕,可以引起各種G蛋白水解,并且能調節(jié)腫瘤細胞遷移。本研究檢測原發(fā)性肝細胞癌術后組織中PLCE1和MMP-14的表達量,分析其在不同臨床病理特征中的差異。
1.1臨床資料 2015年1月至2017年10月廣西壯族自治區(qū)南溪山醫(yī)院確診為原發(fā)性肝細胞癌,并且行手術切除的患者61例為觀察組,年齡49~86歲,平均59.1歲,其中男31例,女30例。納入標準:①符合世界衛(wèi)生組織病理學診斷標準,并經病理醫(yī)師復診并分型;②均為原發(fā)腫瘤;③無其他器官惡性腫瘤;④無消化系統(tǒng)手術史;⑤術前均未行放、化療。選取上述患者中距腫物邊緣>5 cm的正常肝組織新鮮組織18例為對照組,年齡48~81歲,平均57.2歲,其中男9例,女9例。兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
1.2流式細胞術檢測PLCE1和MMP-14表達 兩組均為術后新鮮標本,立即取材,置于75%酒精中固定48 h后,用手術剪將組織剪成碎末,在過濾網上輕搓組織,輔以生理鹽水沖洗,取過濾過后的組織,2 000 r/min離心5 min后,取沉淀物,制備成單細胞懸液(1×106/ml)。每種抗體上機檢測時均取1 ml單細胞懸液后,嚴格按實驗步驟加入一抗、磷酸鹽緩沖液(PBS)及熒光二抗后,上機檢測,應用熒光指數(FI)計算結果。FI=(腫瘤中蛋白表達的熒光強度-對照樣品平均熒光強度)/正常對照樣品平均熒光強度。
1.3統(tǒng)計學方法 應用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行χ2檢驗、t檢驗和線性相關分析。
2.1兩組PLCE1和MMP-14蛋白表達量比較 兩組PLCE1(觀察組1.31±0.26,對照組1.00±0.15)和MMP-14蛋白表達量(觀察組1.40±0.28,對照組1.00±0.27)差異有統(tǒng)計學意義(t=9.78,12.64;均P=0.000)。
2.2PLCE1和MMP-14在觀察組不同臨床特征中表達量比較 PLCE1和MMP-14表達量與病變脈管累犯和腫瘤最大徑密切相關,PLCE1表達量與腫瘤增殖指數和炎細胞浸潤程度密切相關(均P<0.05)。見表1。
表1 PLCE1和MMP-14在觀察組不同臨床特征中表達量的比較
2.3觀察組PLCE1和MMP-14表達相關性 PLCE1和MMP-14表達呈正相關(r=0.50,P=0.039 3)。
原發(fā)性肝細胞癌病變由類似肝細胞的腫瘤細胞組成,間質由襯覆單層內皮的血竇樣腔隙形成,實質細胞可以形成條索狀、假腺樣和腺泡樣、實性和硬化的形態(tài)〔4〕。PLCE1基因定位于染色體的10q23,是一個單拷貝基因,共有33個外顯子,除包含血小板蛋白激酶C同源區(qū)、交換因子亞型和X區(qū)、Y區(qū)催化結構域外〔5,6〕,還含有細胞分裂周期25結構域和兩個類風濕關節(jié)炎(RA)結構,具有鳥嘌呤核苷酸交換的特征,與蛋白的激活密切相關,激素、細胞因子及生長因子等均可以激活蛋白,使其發(fā)揮催化活性〔7,8〕。近年研究顯示PLCE1的異?;罨c腫瘤進展相關〔9〕。張曉娟等〔10〕發(fā)現PLCE1在腫瘤中高表達,且與臨床分期、淋巴結轉移及腫瘤最大徑相關,認為PLCE1的升高可能成為食管癌早期診斷和判斷預后的輔助指標。MMP-14是MMPs家族中的重要成員,具有前肽區(qū)、信號肽區(qū)、催化區(qū)、鉸鏈區(qū)和類血紅素蛋白結合區(qū)共5個功能區(qū)域,能活化MMP-2等MMP家族中的其他蛋白,MMP-14還具有直接分解基底膜中層黏連蛋白的作用〔11,12〕。也有觀點認為MMP-14可以作用在腫瘤細胞周圍的間質細胞,誘導間質細胞產生MMP-14原酶,該酶激活后可以降解Ⅳ型膠原,使腫瘤轉移的屏障結構破壞,引起轉移〔13,14〕。本研究結果提示PLCE1和MMP-14表達升高具有促進腫瘤形成的作用,即二者類似癌基因的功能,這種作用主要與PLCE1基因在12-O-十四烷酰氟波醋酸酯(TPA)的刺激下使腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)激活而引起的惡變有關,其惡變后腫瘤細胞失控性增生明顯〔15〕。本文結果提示PLCE1和MMP-14二者高表達可以促進腫瘤生長,使腫瘤體積增大,對周圍組織的破壞能力增加,促進局部蔓延的形成。二者與脈管累犯的相關性使PLCE1和MMP-14與腫瘤的轉移直接相關,這種作用可能與PLCE1和MMP-14對內皮細胞的調節(jié)有關,使腫瘤細胞易于進入脈管,為腫瘤轉移提供了便捷的通路,隨著脈管內液體的流動,細胞易于定殖在其他組織和器官,形成轉移瘤〔12,16〕。本文結果提示PLCE1是促進腫瘤細胞增殖的相關蛋白。PLCE1表達升高后,能使細胞停滯于幼稚階段,腫瘤細胞趨于原始,腫瘤細胞異型性明顯,細胞增生快,核染色深。本文結果提示PLCE1表達與腫瘤間質反應有關,間質反應在一定程度上提示腫瘤性病變,這也是病理醫(yī)師診斷惡性腫瘤的直接證據,而PLCE1高表達促進腫瘤細胞周圍炎性反應的發(fā)生,也使PLCE1與腫瘤細胞免疫和體液免疫功能聯系在一起。PLCE1和MMP-14二者具有協(xié)同作用。二者的相關性可能與引起VEGF分泌〔1〕,促進腫瘤血管內皮細胞增殖有關,但是其具體機制有待證實。
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