農(nóng)殘速測(cè)技術(shù)在農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)中的應(yīng)用

高婭芳

摘 要：為保障農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全，控制農(nóng)殘較高的水果、蔬菜等農(nóng)產(chǎn)品進(jìn)入市場(chǎng)是確保農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全的重要工作。本論文結(jié)合2017年大麥地鎮(zhèn)農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)操作的相關(guān)步驟，系統(tǒng)介紹農(nóng)殘速測(cè)技術(shù)在農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)中的應(yīng)用，簡(jiǎn)要分析了檢測(cè)操作步驟中應(yīng)該注意的問(wèn)題和避免措施作。

關(guān)鍵詞：農(nóng)藥殘留；快速檢測(cè)；農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全

一、 農(nóng)藥殘留的原因與危害

農(nóng)藥殘留是指在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中施用農(nóng)藥后一部分農(nóng)藥直接或間接殘存于谷物、蔬菜、果品、畜產(chǎn)品、水產(chǎn)品中以及土壤和水體中的現(xiàn)象。

1.農(nóng)藥殘留的危害

農(nóng)藥是把“雙刃劍”，對(duì)促進(jìn)農(nóng)業(yè)增產(chǎn)有極其重要的作用。但由于農(nóng)藥本身固有的化學(xué)屬性和對(duì)其使用不當(dāng)，導(dǎo)致農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留嚴(yán)重超標(biāo)，嚴(yán)重危害到廣大人民群眾的身體健康。

2.農(nóng)藥殘留的原因

在我國(guó)農(nóng)藥中，70%為有機(jī)磷農(nóng)藥，而在我國(guó)生產(chǎn)使用的有機(jī)磷農(nóng)藥中，70%為劇毒、高毒類，如果用于生長(zhǎng)期較短，連續(xù)采收的蔬菜，很難避免因殘留量超標(biāo)而導(dǎo)致人畜中毒，雖然很多高度農(nóng)藥是禁止在蔬菜作物上使用的，但仍然存在諸多因素。

一是農(nóng)戶農(nóng)產(chǎn)品安全意識(shí)淡薄，農(nóng)產(chǎn)品不按規(guī)定使用藥量、次數(shù)、方法或安全間隔期施藥，或施用不允許在蔬菜上使用的劇毒、高毒農(nóng)藥；二是農(nóng)藥殘留監(jiān)管單位宣傳指導(dǎo)不到位，導(dǎo)致農(nóng)殘質(zhì)量超標(biāo)的后果認(rèn)識(shí)不足。三是現(xiàn)在標(biāo)準(zhǔn)施行的農(nóng)藥殘留測(cè)定需要通過(guò)有機(jī)溶劑提取、凈化和用大型分析儀器進(jìn)行，無(wú)法對(duì)廉價(jià)的蔬菜進(jìn)行隨時(shí)隨地或快速檢測(cè)而形成的監(jiān)管不到位。四是消費(fèi)者對(duì)農(nóng)產(chǎn)品的安全意識(shí)差等一系列原因，導(dǎo)致很多農(nóng)產(chǎn)品中毒事件的發(fā)生。

為保證人們吃上安全放心的蔬菜，保障人民身體健康，加強(qiáng)對(duì)農(nóng)藥殘留的快速檢測(cè)已成為十分必要的監(jiān)管措施。因此，蔬菜農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)越來(lái)越普遍地被各大農(nóng)產(chǎn)品檢測(cè)機(jī)構(gòu)所采用。

二、農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)

農(nóng)藥殘留檢測(cè)是農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)的主要工作，主要的檢測(cè)方法有兩種：色譜檢測(cè)法和速測(cè)儀器法。

1.色譜檢測(cè)法

色譜檢測(cè)法用作農(nóng)殘定量分析，可為農(nóng)藥殘留執(zhí)法提供依據(jù)。優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高、準(zhǔn)確、定性定量；缺點(diǎn)：成本高、操作復(fù)雜、時(shí)間較長(zhǎng)。

2.速測(cè)法

速測(cè)法只能作為農(nóng)殘定性分析，易于在基層推廣等特點(diǎn)，是目前我國(guó)控制高毒農(nóng)藥殘留的一種有效方法，也是目前國(guó)內(nèi)和我省應(yīng)用最為廣泛的農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)方法。

速測(cè)法的主要優(yōu)點(diǎn)：一是該方法具有快速方便、前處理簡(jiǎn)單、成本較低等優(yōu)點(diǎn)，適用于現(xiàn)場(chǎng)定性測(cè)定，特別適合在蔬菜生產(chǎn)基地、批發(fā)市場(chǎng)及農(nóng)產(chǎn)品檢測(cè)部門開(kāi)展快速檢測(cè)工作。二是該方法可對(duì)有農(nóng)藥殘留的蔬菜進(jìn)行粗篩，將一部分農(nóng)藥殘留含量較高的蔬菜控制在市場(chǎng)之外，避免因農(nóng)藥殘留發(fā)生中毒事件。速測(cè)儀的檢測(cè)方法又分：速測(cè)卡法（紙片法）和酶抑制率法（分光光度法）。

兩種快速檢測(cè)方法的技術(shù)原理：根據(jù)有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥能抑制昆蟲中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)中的乙酰膽堿酯酶的活性造成神經(jīng)傳導(dǎo)介質(zhì)乙酰膽堿的積累，影響正常傳導(dǎo)，導(dǎo)致昆蟲中毒致死的原理而設(shè)計(jì)。如果蔬菜中不含有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥，乙酰膽堿酯酶水解后，水解產(chǎn)物可與顯色劑反應(yīng)產(chǎn)生顏色；如果蔬菜中含可以抑制乙酰膽堿酯酶的活性的有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥，這種酶就不能被水解，從而無(wú)顯色反應(yīng)。在溶液中加入乙酰膽堿酯酶和顯色劑，用此判斷有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留是否存在。該方法僅對(duì)含有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的蔬菜進(jìn)行粗篩，對(duì)其他農(nóng)藥的檢測(cè)無(wú)作用，檢測(cè)結(jié)果僅起監(jiān)督作用。

計(jì)算公式計(jì)算：

抑制率（%）=[（△Ao-△Ai）/△Ao]×100

式中：△Ao---對(duì)照溶液反應(yīng)1min吸光度的變化值；

△Ai---樣品溶液反應(yīng)1min吸光度的變化值；

下面我主要分析一下酶抑制率法（分光光度法）的操作方法及注意事項(xiàng)。

三、酶抑制率法（分光光度法）技術(shù)

1.試劑的配制

（1）緩沖液。將緩沖液試劑袋中的試劑倒出，溶于500ml蒸餾水中，溶解，混合即可。

（2）底物。往標(biāo)注于底物的瓶中加入13ml蒸餾水，2～4°C環(huán)境條件下，冷藏保存。

（3）顯色劑。無(wú)需配置放入冰箱冷藏（2～4°C）切勿冷凍結(jié)冰。

（4）酶試劑。酶試劑已配置成溶液可以直接使用。需放入冰箱冷藏（2～4°C）切勿冷凍結(jié)冰。

2.檢測(cè)時(shí)用到的儀器

燒杯（50ml、500ml）、量筒（500ml）、電子天平、玻璃棒、細(xì)口試劑瓶 、移液器、移液吸頭、試管、試管架、三角燒瓶、稱量瓶、試管刷、膠頭滴管、塑料洗瓶、塑料瓶小瓶、比色皿、農(nóng)藥殘留檢測(cè)儀。

3.檢測(cè)操作步驟分析

（1）樣品前處理。

①植株：選取有代表性的蔬菜樣品，沖洗掉表面泥土，剪成1cm左右見(jiàn)方碎片，取樣品2g，放入三角瓶中，加入10mL緩沖溶液，振蕩1～2min，倒出提取液，靜置3～5min，待用。

②茶葉：稱取0.5g茶葉樣品，加入5ml丙酮，振蕩提取5min，取0.2ml上述丙酮溶液，40～50°C水浴蒸干，加入2.5ml緩沖溶液，振蕩2min。

（2）對(duì)照溶液測(cè)試。

先于試管中加入100ul酶液，再加入2.5mL緩沖溶液、100ul顯色劑，搖勻后于35℃放置15min以上（每批樣品的控制時(shí)間應(yīng)一致）。加入100ul底物搖勻，此時(shí)檢液開(kāi)始顯色反應(yīng)，應(yīng)立即放入儀器比色池中，記錄反應(yīng)1min的吸光度變化值△Ao。對(duì)照值應(yīng)為0.15—0.3為對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)值。

（3）樣品溶液測(cè)試。

先于試管中加入100ul酶液， 2.5mL樣品提取液，再加入100ul顯色劑，搖勻后于35℃放置15min以上（每個(gè)樣品的控制時(shí)間應(yīng)一致）。加入100ul底物搖勻，此時(shí)檢液開(kāi)始顯色反應(yīng)，應(yīng)立即放入儀器比色皿中，記錄反應(yīng)1min的吸光度變化值△Ai。

結(jié)果以酶被抑制的程度（抑制率）表示。當(dāng)樣品抑制率在40～50%之間為可疑農(nóng)殘超標(biāo)樣品；當(dāng)抑制率≥50%時(shí)，表示蔬菜中有高劑量有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥存在，樣品為陽(yáng)性結(jié)果。陽(yáng)性結(jié)果的樣品需要重復(fù)檢驗(yàn)2次以上，對(duì)陽(yáng)性結(jié)果的樣品，建議用氣相色譜等儀器分析法進(jìn)一步確認(rèn)。

4.酶抑制率法注意事項(xiàng)

（1）蔬菜農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)方法。適用于葉菜類、果菜類、豆菜類、瓜菜類、根菜類 （ 除胡蘿卜、茭白等 ） 中甲胺磷、氧化樂(lè)果、對(duì)硫磷、甲拌磷、久效磷、倍硫磷、殺撲磷、敵敵畏、克百威、涕滅威、滅多威、抗蚜威、丁硫克百威、甲萘威、丙硫克百威、速滅威、殘殺威、異丙威等農(nóng)藥殘留的快速檢測(cè)。蔥、蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中，含有對(duì)酶有影響的植物次生物質(zhì)，容易產(chǎn)生假陽(yáng)性。處理這類樣品時(shí)，可采取整株（體）蔬菜浸提。對(duì)一些含葉綠素較高的蔬菜，也可采取整株（體）蔬菜浸提的方法，減少色素的干擾。

生菜、小白菜、豆角、芹菜等為必檢項(xiàng)目，因?yàn)檫@幾類蔬菜或容易殘留農(nóng)藥， 或使用農(nóng)藥次數(shù)多、密度大。

（2）酶液和顯色劑多少的影響。酶液和顯色劑不能漏加或多加。每個(gè)樣品中的試劑應(yīng)保持一致，才能保證測(cè)出數(shù)值的準(zhǔn)確性。

（3）待測(cè)樣品放入分光光度計(jì)速度的影響。待測(cè)樣品加入底物后，應(yīng)馬上搖勻，放入測(cè)定儀，否則影響數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性。

（4）比色皿的透光度影響。注意不要用手觸摸比色皿的光面，要拿毛面，面對(duì)準(zhǔn)光路。比色皿中的液體要超過(guò) 2/3 ，且不得溢出，要保持光面外側(cè)的潔凈，使比色皿有好的透光度是減少檢測(cè)誤差的必要條件。比色皿可定期用乙醇進(jìn)行清洗。

（5）微量移液器的影響。微量移液器要專用，貼上標(biāo)簽，避免交叉使用造成試劑污染；試劑從試劑瓶吸出后，不能再放回瓶中，堅(jiān)持只吸不進(jìn)的原則，防止試劑污染。

（6）藥品配制和部分儀器最后的沖洗過(guò)程。一定要用蒸餾水、純凈水或去離子水，不可使用礦物質(zhì)水，否則在測(cè)量過(guò)程中干擾較大，影響準(zhǔn)確性。

四、農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)中易出現(xiàn)的問(wèn)題及解決措施

蔬菜農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)技術(shù)對(duì)生化反應(yīng)條件要求嚴(yán)格，在操作過(guò)程中常會(huì)出現(xiàn)一些問(wèn)題，為了減少失誤，提高檢測(cè)結(jié)果的可信度，應(yīng)采取相應(yīng)的措施加以避免。

1.同批次蔬菜檢測(cè)結(jié)果重現(xiàn)性不同

由于該方法為快速檢測(cè)，是粗測(cè)，所以每次檢測(cè)過(guò)程中使用的定量加液器的加液量及取樣量有差異，加上操作方法和儀器系統(tǒng)誤差等原因，會(huì)造成結(jié)果重現(xiàn)性不同。解決措施：

（1） 要保證抽樣工具和容器潔凈、干燥、異味，不會(huì)對(duì)樣品造成污染，同時(shí)及時(shí)封存，保護(hù)樣品的待檢性狀。

（2）檢測(cè)儀器工作以前，應(yīng)預(yù)熱 5～10 min ，使儀器狀態(tài)穩(wěn)定。儀器應(yīng)置于干燥、通風(fēng)的環(huán)境中，并保持電流穩(wěn)定。

（3）取樣檢測(cè)時(shí)，樣品量要保證，一般葉菜類取 2 g ，非葉菜類取 4 g 。對(duì)同批次蔬菜抽樣要有公正性和代表性，取樣部位要均勻合理，多點(diǎn)混取，盡量取可食用部分。

（4）在制備待測(cè)液的過(guò)程中，定量加液器的加液量要均勻一致，酶液和顯色劑不能漏加或多加。加入提取液后需震蕩 1～2 min ，并保證靜置 3～5 min ，振蕩后要充分靜置，為了避免細(xì)小菜沫被吸到比色皿中，影響吸光值。（5）在測(cè)量過(guò)程中，不要打開(kāi)樣品室蓋，以免影響測(cè)量結(jié)果，并且定期對(duì)儀器進(jìn)行自檢，嚴(yán)格按照操作規(guī)程操作，這樣方可減小誤差，有效避免結(jié)果重現(xiàn)性不同。

2.抑制率偏小

該方法是通過(guò)酶被抑制的程度 （ 即抑制率 ） 來(lái)反映農(nóng)藥殘留是否超標(biāo)。 抑制率的正常范圍是 -10%～+110% ， 對(duì)照組 / 樣本的吸光值在 3 min 后與 3 min 前的差值 （ΔAc/ΔAs） 范圍是 0.3～0.8 。 當(dāng)抑制率值偏小，即小于 -10% 時(shí)，會(huì)出現(xiàn)以下情況：（1）酶在參加反應(yīng)之前就已經(jīng)部分失活， 導(dǎo)致ΔAs<0.3 。（2）底物與酶未反應(yīng)完全。

解決措施：取底物時(shí)，用移液槍直接加到比色皿內(nèi)，盡量不要濺到壁上，加完底物后立即進(jìn)行比色。

3.抑制率偏大

當(dāng)抑制率出現(xiàn)不正常的偏大時(shí)，主要原因是在上機(jī)比色前酶就已經(jīng)與底物發(fā)生反應(yīng)，致使 ΔAs 較小。解決措施： 從樣本培養(yǎng)結(jié)束到上機(jī)比色速度要快，盡量在 1 min 內(nèi)完成。 培養(yǎng)時(shí)間也要準(zhǔn)確把握，不能超過(guò) 15 min 。

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