關(guān)于豬鏈球菌及豬流感臨床分離血清的抗體檢測(cè)

王維維，周衛(wèi)松

（山東省樂(lè)陵市畜牧獸醫(yī)局，樂(lè)陵 253600 ）

0 引言

筆者選取臨床發(fā)病的豬血清進(jìn)行檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)，以便分析和驗(yàn)證豬鏈球菌2型和豬流感H1亞型的流行規(guī)律，分別選取對(duì)應(yīng)的抗體檢驗(yàn)試劑盒來(lái)進(jìn)行抗體的檢測(cè)，通過(guò)空間層面和時(shí)間層面來(lái)分析獲得的檢測(cè)結(jié)果，以便對(duì)豬鏈球菌和豬流感病毒的流行感染規(guī)律進(jìn)行深層次的探究，以便更好的指導(dǎo)豬鏈球菌和豬流感病毒的防治工作。

1 試劑盒與血清

試劑盒：選取由武漢科前公司所生產(chǎn)的兩種對(duì)應(yīng)的抗體檢測(cè)試劑盒。

血清：共選取了來(lái)自河北、浙江、湖南、江西、安徽、廣東、湖北、河南等省市自治區(qū)臨床發(fā)病，經(jīng)分離獲得的4659份豬血清，冷凍保存、保存條件為-70℃的冰箱內(nèi)。

2 待檢血清的抗體檢測(cè)

在4659份總的豬樣本血清之中，采取隨機(jī)選取的方法，選擇了2811份血清通過(guò)豬流感病毒ELISA抗體試劑盒進(jìn)行抗體檢測(cè)；采取隨機(jī)選取的方法，選擇了4132份血清通過(guò)豬鏈球菌2型ELISA抗體試劑盒進(jìn)行抗體檢測(cè)；除此之外，采取隨機(jī)選取的方法，選擇了2301份血清同時(shí)開展兩種類型的抗體檢測(cè)[1]。以上抗體檢測(cè)得到的結(jié)果均分別從空間層面和時(shí)間層面開展了全面而深入的分析工作。

按照說(shuō)明書的要求嚴(yán)格的進(jìn)行抗體試劑盒的相關(guān)操作，其中，豬流感H1亞型的操作步驟如下：首先，將待檢血清予以稀釋，稀釋劑為血清稀釋液，稀釋比例為1：40，完成稀釋后，將待檢血清（100 uL）放進(jìn)到抗原體背包孔之內(nèi)，開展1孔空白對(duì)照、2孔陽(yáng)性對(duì)照和2孔陰性對(duì)照，然后將血清樣品進(jìn)行輕微的搖勻，接著放置在37℃環(huán)境下經(jīng)30 min孵育后，將孔內(nèi)溶液進(jìn)行清除，間隔3 min的時(shí)間對(duì)反應(yīng)孔進(jìn)行清洗[2]。完成后，將100 uL羊抗豬酶標(biāo)二抗滴入到反應(yīng)孔之內(nèi)，放置在37℃環(huán)境下經(jīng)30 min孵育后，將孔內(nèi)溶液進(jìn)行清除，將A、B底物液置入到所有反應(yīng)孔之內(nèi)，并搖晃均勻，然后通過(guò)10 min避光室溫的環(huán)境下顯色后，滴入1滴終止液，在15 min后對(duì)結(jié)果進(jìn)行觀測(cè)[3]。判定標(biāo)準(zhǔn)如下：選取酶標(biāo)儀來(lái)對(duì)孔OD630值進(jìn)行測(cè)定，若0.25×陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥樣品孔測(cè)定值，則為陰性，反之則為陽(yáng)性。

豬鏈球菌2型的操作步驟與豬流感H1亞型的操作步驟基本相同。判定標(biāo)準(zhǔn)如下：選取酶標(biāo)儀來(lái)對(duì)孔OD630值進(jìn)行測(cè)定，若樣品孔測(cè)定值＜0.35，則為陰性，反之則為陽(yáng)性。

3 統(tǒng)計(jì)與分析

3.1 關(guān)于豬鏈球菌2型抗體檢測(cè)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)與分析

基于空間層面和時(shí)間層面獲得的統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果如下表1、表2。

表1 采樣地區(qū)抗體結(jié)果

表2 不同月份抗體結(jié)果

基于地域?qū)用娴慕嵌瓤梢园l(fā)現(xiàn)，血清樣本地區(qū)的陽(yáng)性占比平均為54.72%，其中陽(yáng)性占比較高的省份有湖南、江西、安徽、湖北和河南。

基于時(shí)間層面的角度可以發(fā)現(xiàn)，全年陽(yáng)性占比平均為54.72%，其中陽(yáng)性占比最高的月份為11月，占比數(shù)值達(dá)到70.90%。

3.2 關(guān)于豬流感H1亞型抗體檢測(cè)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)與分析

基于空間層面和時(shí)間層面獲得的統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果見(jiàn)表3、表4。

表3 采樣地區(qū)抗體結(jié)果

表4 不同月份抗體結(jié)果

基于地域?qū)用娴慕嵌瓤梢园l(fā)現(xiàn)，血清樣本地區(qū)的陽(yáng)性占比平均為45.11%，其中陽(yáng)性占比較高的省份有湖南、江西、安徽、湖北。

基于時(shí)間層面的角度可以發(fā)現(xiàn)，全年陽(yáng)性占比平均為45.11%，其中陽(yáng)性占比最高的月份為4月、10月、11月和12月。

4 結(jié)束語(yǔ)

針對(duì)豬流感病毒的抗體檢測(cè)結(jié)果的分析，應(yīng)當(dāng)全年進(jìn)行疫苗免疫，并在每年4月、10月、11月和12月開展免疫檢測(cè)工作，對(duì)于湖南、江西、安徽、湖北等相關(guān)省份來(lái)說(shuō)，必須高度關(guān)注豬流感病毒的防疫工作。

針對(duì)豬流感病毒的抗體檢測(cè)結(jié)果的分析，應(yīng)當(dāng)全年進(jìn)行疫苗免疫，并在每年9月、10月、11月開展免疫檢測(cè)工作，對(duì)于湖南、江西、安徽、湖北和河南等相關(guān)省份來(lái)說(shuō)，必須高度關(guān)注豬流感病毒的防疫工作。

[1] 李天芝，于新友，王金良，等．我國(guó)豬流感的流行現(xiàn)狀及分子生物學(xué)診斷方法研究進(jìn)展[J]．養(yǎng)豬，2017（2）：125-128.

[2] 馮萍，譚明診，陳志海，等．豬鏈球菌2型感染的臨床特征和治療效果分析[J]．四川大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2007（9）：874-878．

[3] 張安定，金梅林，陳煥春．豬鏈球菌2型研究進(jìn)展[J]．養(yǎng)殖與飼料，2005（10）：13-18．