針刺對(duì)高尿酸血癥大鼠模型血尿酸等的影響

劉冰云，王心怡，王健彤，王 珊，劉旭峰，陳虹屹，睢明河

（北京中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院，北京 100029）

高尿酸血癥是一種嘌呤與尿酸代謝異常的疾病，隨著病情加重可發(fā)展為痛風(fēng)，因此控制尿酸的升高可有效降低痛風(fēng)的發(fā)病率。

在查閱的25篇關(guān)于針灸治療痛風(fēng)的文獻(xiàn)中，僅有2篇是針對(duì)痛風(fēng)高尿酸血癥的治療，其余均為治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎，其治療主要起到降低炎癥指標(biāo)以及緩解局部關(guān)節(jié)癥狀的作用，而非從致病原因上進(jìn)行干預(yù)，治標(biāo)而非治本。本實(shí)驗(yàn)基于中醫(yī)和西醫(yī)對(duì)痛風(fēng)發(fā)病原因的認(rèn)識(shí)，所涉及的臟腑病理，擬通過針刺相關(guān)臟腑的俞、募、原穴，來調(diào)節(jié)臟腑功能，從而達(dá)到干預(yù)痛風(fēng)高尿酸血癥形成的目的。觀察不同穴組對(duì)痛風(fēng)高尿酸血癥的干預(yù)作用。

1 實(shí)驗(yàn)材料及方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料 選用健康6周清潔級(jí)Wistar大鼠50只，雄性，體質(zhì)量（200±20）g。由北京市海淀區(qū)興隆實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖廠提供。合格號(hào)：SCXK-（軍）2007-004。飼養(yǎng)于北京中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院針灸機(jī)理實(shí)驗(yàn)室。

1.2 主要試劑及儀器 造模劑：鹽酸乙胺丁醇片（沈陽紅旗制藥有限公司，規(guī)格0.25 g×100片，批號(hào)H21022349）；腺嘌呤（美國Sigma-aldrich公司，每瓶25 g，批號(hào)BCBK3010V）；試劑：尿酸試劑盒、黃嘌呤氧化酶試劑盒、堿性磷酸酶試劑盒（南京建成生物工程研究所）。毫針：直徑0.30 mm，長25 mm（蘇州華佗醫(yī)療器械用品有限公司）；直徑0.30 mm，長40 mm（北京漢醫(yī)醫(yī)療器械中心）。低溫離心機(jī)（5810 R，德國Eppendorf 公司）；超低溫冰箱（MDF-U50V，日本三洋公司）；電子天平（ER-182A，日本）；P1000微量可調(diào)移液器（100～1 000 μL，芬蘭DRGON）。

1.3 分組與造模 分組：采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)法，利用隨機(jī)數(shù)字表將Wistar大鼠分為5組：空白組、模型組、俞穴組、原穴組、募穴組，每組10只。除空白組外，另4組制作痛風(fēng)高尿酸血癥大鼠模型。造模：據(jù)熊湘明等[1]文獻(xiàn)記載，自實(shí)驗(yàn)第1天起，模型組、俞穴組、原穴組、募穴組給予造模劑腺嘌呤100 mg/（kg·d）和乙胺丁醇250 mg/（kg·d）的比例，用蒸餾水將兩者混合后，進(jìn)行灌胃，連續(xù)給予21 d，21 d后改為隔日1次，直至第90 d實(shí)驗(yàn)結(jié)束，使大鼠始終保持持續(xù)性高尿酸血癥。取材后，與空白組比較，模型組SUA、BUN指標(biāo)含量呈顯著升高（P＜0.05），即提示造模成功。

1.4 取穴 按照余曙光著《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》[2]所附的常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物針灸穴位取穴，分別為肝俞穴、脾俞穴、腎俞穴、天樞穴、關(guān)元穴、太溪穴、太沖穴、太白穴的大鼠對(duì)應(yīng)點(diǎn)，均為雙側(cè)取穴。

1.5 各組處置方法 空白對(duì)照組：正常同步喂養(yǎng)，不進(jìn)行任何處理；只做對(duì)照。模型組：僅造模，不進(jìn)行任何針刺干預(yù)處理，與各針刺干預(yù)組同步捆綁固定，每次15 min；俞穴組：造模同模型組，隔日針刺肝俞、脾俞、腎俞；原穴組：造模同模型組，隔日針刺太沖、太白、太溪；募穴組：造模同模型組，隔日針刺天樞、關(guān)元。操作：俞穴組、原穴組、募穴組在造模的同時(shí)進(jìn)行針刺干預(yù)，將毫針刺入穴區(qū)3～5 mm，每穴作均勻的捻轉(zhuǎn)行針手法10 s，每次留針15 min，隔日1次，每10次為1療程，每療程結(jié)束后休息10 d，共90 d，3個(gè)療程。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后取材。

1.6 檢測指標(biāo) SUA、BUN、ALT、AST。檢測方法：于實(shí)驗(yàn)第90天治療結(jié)束后禁食，次日將大鼠腹腔注射20%的烏拉坦（1 g/kg）進(jìn)行麻醉，腹主動(dòng)脈取血4～5 mL，注入含有惰性分離膠、促凝劑的促凝管中，輕輕搖晃以確保血液和促凝劑充分接觸，不要用力過猛，以免出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，血樣在室溫下自然凝血1 h，用離心機(jī)以4 000 r/min的數(shù)值分離血清，使用Sysmex XS 800 i型全自動(dòng)生化分析儀檢測各項(xiàng)指標(biāo)。檢測時(shí)間：各組均在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后第一天，即第91天統(tǒng)一取材。

1.7 數(shù)據(jù)處理方法 應(yīng)用SAS 9.4統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x± s ）表示，多組間比較采用方差分析，組間兩兩比較采用SNK檢驗(yàn)。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 各針刺干預(yù)組對(duì)SUA的影響 1）與空白組比較，模型組SUA明顯升高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異性（P＜0.05）。2）與模型組比較，各針刺干預(yù)組SUA含量明顯下降（P＜0.05）。3）與俞穴組比較，原穴組、募穴組SUA含量明顯降低（P＜0.05）。4）與原穴組比較，募穴組SUA含量明顯偏低（P＜0.05）。見表1。

2.2 各針刺干預(yù)組對(duì)BUN的影響 1）與空白組比較，模型組BUN明顯升高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異性（P＜0.05）。2）與模型組比較，各針刺干預(yù)組BUN含量均下降，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異性（P＜0.05）。3）與俞穴組比較，原穴組的BUN含量較高（P＜0.05）。與原穴組比較，募穴組的BUN含量較低（P＜0.05）。

表1 針刺俞、原、募穴對(duì)大鼠SUA、BUN的影響（x± s ）

2.3 各針刺治療組對(duì)AST、ALT的影響 俞穴組、原穴組、募穴組AST活性較模型組均偏高，ALT活性較模型組均偏低，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

表2 針刺俞、原、募穴對(duì)大鼠AST、ALT的影響（x± s ）

3 討論

痛風(fēng)高尿酸血癥在傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中屬“痹證”“歷節(jié)”等范疇，有內(nèi)外因素之分，二者相互影響。外因主要責(zé)之于風(fēng)、寒、濕、熱、濁瘀之邪，積聚日久，使氣血運(yùn)行遲澀，脈絡(luò)閉阻，臟腑功能失調(diào)而遷延不愈。內(nèi)因則與肝、脾、腎三臟關(guān)系最為密切，同時(shí)小腸主受盛與化物，泌別清濁，大腸主津液，傳導(dǎo)糟粕，二者同主飲食的消化吸收及排泄，若肝失疏泄、脾失健運(yùn)、腎失開闔，則津液代謝失常，濁毒沉積于臟腑經(jīng)絡(luò)，可引發(fā)痛風(fēng)高尿酸血癥[3-6]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，嘌呤與尿酸的代謝異常是痛風(fēng)高尿酸血癥最重要的生物化學(xué)基礎(chǔ)[7-11]，是導(dǎo)致該病的基本原因。嘌呤核苷酸主要在肝、小腸黏膜和胸腺中合成，在肝、小腸、腎中分解代謝；尿酸是在酶催化嘌呤作用下產(chǎn)生的，通過腎臟以及腸道排泄[12]。由此可見，高尿酸血癥均與肝、腎、小腸、大腸有關(guān)[13]。

《靈樞·九針十二原》曰：“五臟有疾，當(dāng)取十二原?！薄额惤?jīng)圖翼》說：“五臟居于腹中，其氣脈俱出于背之足太陽經(jīng)，是為五臟之俞”。募穴為臟腑之氣所結(jié)聚于胸腹部的腧穴，其分布與所屬臟腑位置相近，并與背俞穴相對(duì)應(yīng)，主要治療相關(guān)的臟腑疾病，尤以治療六腑病癥為佳?！妒慕?jīng)發(fā)揮》又說：“陰陽經(jīng)絡(luò)，氣相交貫，臟腑腹背，氣相通應(yīng)”。可見，俞穴、原穴、募穴在古代文獻(xiàn)記載中均是治療相關(guān)臟腑疾病的重要穴位。同時(shí)，現(xiàn)代研究表明，三組腧穴除了在古文中論述的作用外，還與臟腑之間存在著某種特殊或者特定的聯(lián)系途徑[14-16]。

本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，針刺俞穴組、募穴組、原穴組對(duì)降低SUA、BUN均有影響，募穴組效果最好，降低SUA原穴組好于俞穴組，降低BUN俞穴組好于原穴組?？赡苁且?yàn)楫?dāng)針刺相應(yīng)腧穴時(shí)，可以調(diào)節(jié)相關(guān)臟腑對(duì)SUA、BUN的合成、代謝以及排泄等功能，從而達(dá)到降低SUA和BUN的作用。AST、ALT的活性程度雖有小幅度波動(dòng)卻仍在正常值內(nèi)，各組間均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能是造模劑未對(duì)肝臟造成影響[17]，其原因還需進(jìn)一步研究。其中募穴組干預(yù)效果最為顯著，可能是因?yàn)樾∧c是分解代謝嘌呤核苷酸最旺盛的器官[18]，形成的尿酸均經(jīng)腸道和腎臟排泄。而消化道中產(chǎn)生的氨、嘌呤代謝過程中產(chǎn)生的氨，都是尿素生成的基礎(chǔ)物質(zhì)，最終尿素通過腎臟排出體外。因此，SUA和BUN的來源與形成都與腸道有直接關(guān)系，是生產(chǎn)、代謝其物質(zhì)的重要場所。從中醫(yī)的角度來分析，痛風(fēng)高尿酸血癥是濁瘀之毒沉積在臟腑經(jīng)絡(luò)等部位，從而使臟腑功能失調(diào)，進(jìn)一步加重影響各臟腑的氣化功能，以及經(jīng)絡(luò)運(yùn)行氣血，滋養(yǎng)四肢百骸的功能，使該病纏綿不愈。本實(shí)驗(yàn)中所選用的大、小腸的募穴與另外2組不同，能更直接與其臟腑的解剖位置相對(duì)應(yīng)，大腸募穴“天樞”具有疏通腸腑、理氣通便、消食導(dǎo)滯、活血化瘀之功；小腸募穴“關(guān)元”具有導(dǎo)赤通淋、導(dǎo)氣利水的作用。此外，“關(guān)元”穴是足三陰和任脈的交會(huì)穴，內(nèi)應(yīng)胞宮精室，為元陰元陽之氣閉藏之處，具有培元固本之功效，使腎氣充足，不受外邪侵犯。有研究證明[19]，關(guān)元穴確實(shí)具有養(yǎng)生保健，增強(qiáng)人體免疫力的作用。

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