化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)在乙肝病毒血清學(xué)檢驗(yàn)中的價(jià)值分析

辛?xí)躁?yáng)　徐立群　潘峰

[摘要] 目的 比較化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)（CLIA）和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）在乙肝病毒血清學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用價(jià)值。 方法 選取2014年1月～2017年6月間我院收治的80例疑似乙型肝炎患者，采用CLIA法、ELISA法對(duì)乙肝病毒血清學(xué)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，以實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢驗(yàn)結(jié)果作為參照，分析CLIA法、ELISA法對(duì)乙肝的診斷結(jié)果。 結(jié)果 ELISA法對(duì)乙肝的診斷靈敏度、特異度、準(zhǔn)確性分別為91.84%、93.55%、92.50%，CLIA法分別為93.88%、96.77%、95.00%，二者比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P均>0.05）。CLIA法、ELISA法對(duì)乙肝的診斷結(jié)果與實(shí)時(shí)熒光定量PCR之間具有良好一致性，Kappa均>0.7。CLIA法對(duì)HBsAg、HBeAg、HBeAb的陽(yáng)性檢出率高于ELISA法（P<0.05），而在HBsAb、HBcAb陽(yáng)性檢出率比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。 結(jié)論 CLIA法、ELISA法對(duì)乙型肝炎的診斷效果均較好，而在乙肝病毒血清學(xué)標(biāo)志物檢驗(yàn)中，CLIA法的檢驗(yàn)準(zhǔn)確性高于ELISA法。

[關(guān)鍵詞] 乙型肝炎；乙肝病毒；血清學(xué)檢驗(yàn)；化學(xué)發(fā)光免疫分析法；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

[中圖分類號(hào)] R446 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2018）10-0127-04

Analysis on the value of chemiluminescence immunoassay and enzyme-linked immunosorbent assay in serological detection of hepatitis B virus

XIN Xiaoyang PAN Feng XU Liqun CHEN Zhaojun

Clinical Laboratory， The Affiliated Hospital of Hangzhou Normal University， Hangzhou 310015， China

[Abstract] Objective To compare the application value of chemiluminescence immunoassay（CLIA） and enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA） in serological testing of hepatitis B virus. Methods From January 2014 to June 2017， 80 patients with suspected hepatitis B who were admitted to our hospital were selected. CLIA method and ELISA method were used to determine the serological indices of hepatitis B virus. Real-time fluorescence quantitative PCR test results were used as the reference. The diagnosis results of hepatitis B by CLIA method and ELISA method were analyzed. Results The diagnostic sensitivity， specificity and accuracy of ELISA for hepatitis B were 91.84%， 93.55% and 92.50% respectively， and those of CLIA were 93.88%， 96.77%， 95.00% respectively. There was no statistically significant difference between the two methods（P>0.05 for all）. CLIA method and ELISA method for the diagnostic results of hepatitis B were well consistent with real-time fluorescence quantitative PCR（Kappa>0.7 for all）. The positive detection rate of HBsAg， HBeAg and HBeAb by CLIA was higher than that of ELISA（P<0.05）， and the difference of positive detection rate of HBsAb and HBcAb was not statistically significant（P>0.05）. Conclusion CLIA method and ELISA method are favorable for the diagnosis of hepatitis B. In the hepatitis B virus serological marker test， the test accuracy of CLIA is higher than that of ELISA.

[Key words] Hepatitis B；Hepatitis B virus；Serological testing；Chemiluminescence immunoassay（CLIA）；Enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）乙型肝炎是一種臨床上常見的病毒性肝炎，主要由乙肝病毒感染所致，其傳染性較強(qiáng)。乙肝病毒是導(dǎo)致乙型肝炎的主要病毒，據(jù)統(tǒng)計(jì)，國(guó)內(nèi)攜帶乙肝病毒的人數(shù)達(dá)到9300萬(wàn)人，乙肝病毒在人體中長(zhǎng)期潛伏，部分乙肝病毒攜帶者因體內(nèi)乙肝病毒被激活而患上乙型肝炎，可能會(huì)發(fā)展為肝硬化、肝衰竭、肝癌等，對(duì)患者的生命安全構(gòu)成威脅[1-3]。臨床上主張對(duì)乙型肝炎進(jìn)行積極預(yù)防和治療，有研究報(bào)道指出，人體免疫系統(tǒng)會(huì)對(duì)乙肝病毒產(chǎn)生特異性免疫反應(yīng)，對(duì)乙肝病毒DNA、乙肝病毒血清學(xué)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)是乙型肝炎診斷和預(yù)后評(píng)估的重要依據(jù)[4，5]。化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)是兩種常見的乙肝病毒檢驗(yàn)方法，但關(guān)于這兩種檢驗(yàn)方法對(duì)乙型肝炎病毒血清學(xué)標(biāo)志物的檢驗(yàn)價(jià)值一直存在爭(zhēng)議，未能達(dá)成共識(shí)。本研究為比較化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)在乙肝病毒血清學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用價(jià)值，特針對(duì)2014年1月～2017年6月間我院收治的80例疑似乙型肝炎患者進(jìn)行前瞻性研究，分別對(duì)其血清樣本進(jìn)行化學(xué)發(fā)光免疫分析檢驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料

選取2014年1月～2017年6月我院收治的80例疑似乙型肝炎患者進(jìn)行前瞻性研究，所有患者均因全身乏力、下肢水腫、食欲不振、皮膚黃染、肝區(qū)疼痛等癥狀就診，且均具有與乙型肝炎患者接觸史，其中，男52例，女28例，年齡23～67歲，平均（43.84±14.23）歲。研究前所有患者均對(duì)研究方法和目的知情了解，自愿配合檢查。

1.2 方法

所有患者均接受采血，采用化學(xué)發(fā)光免疫分析法（chemiluminescence immunoassay，CLIA）、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）這兩種檢驗(yàn)方法對(duì)乙肝病毒血清學(xué)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)。于患者清晨空腹?fàn)顟B(tài)下，采集其肘部靜脈血液5 mL作為檢驗(yàn)樣本，在4℃環(huán)境下對(duì)其進(jìn)行離心處理，每分鐘轉(zhuǎn)速為3000 r，持續(xù)離心10 min后，取上層清液待檢。

先進(jìn)行ELISA檢驗(yàn)，將ELISA試劑與微孔反應(yīng)條在室溫下放置30 min，將待測(cè)血清樣本加入至微孔反應(yīng)條中，采用封片對(duì)其進(jìn)行封鎖處理，放置于37℃水浴箱中持續(xù)60 min后取出，將微孔反應(yīng)條中液體去除，反復(fù)洗滌5次，再在反應(yīng)條中加入試劑，封鎖，放置于37℃水浴箱中持續(xù)30 min后取出，加入終止液。如所測(cè)得的血清值≥臨界值（2×標(biāo)準(zhǔn)差+陰性樣品平均A值），即可判定檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性。

再進(jìn)行CLIA檢驗(yàn)，將待測(cè)血清樣本加入至已包被HBV核心抗原的聚苯乙烯試管中，采用100 μL辣根過(guò)氧化酶進(jìn)行標(biāo)記，在37℃環(huán)境下持續(xù)放置2 h，再采用PBS緩沖液反復(fù)沖洗3次，每次持續(xù)沖洗3 min，再加入100 μL氫氧化鈉（0.1 mol/L）、100 μL魯米諾（30 mol/L），在室溫下靜置10 min，再加入100 μL濃度為3%的過(guò)氧化氫，采用發(fā)光儀對(duì)其發(fā)光強(qiáng)度進(jìn)行測(cè)定。如HBsAg、HBeAg COI≥1.0，即可判斷為陽(yáng)性。

再取血清樣本進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢驗(yàn)，采用Roche LC480實(shí)時(shí)熒光分析儀進(jìn)行測(cè)定，試劑為配套試劑，按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作。

1.3 觀察指標(biāo)

以實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢驗(yàn)結(jié)果作為參照，比較這兩種檢驗(yàn)方法對(duì)乙型肝炎的診斷靈敏度[真陽(yáng)性/（真陽(yáng)性+假陰性）×100%]、特異度[真陰性/（真陰性+假陽(yáng)性）×100%]、準(zhǔn)確性[（真陽(yáng)性+真陰性）/總例數(shù)×100%]。比較兩種檢驗(yàn)方法對(duì)各項(xiàng)乙肝病毒血清學(xué)標(biāo)志物（HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb）的陽(yáng)性檢出率，HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb的正常參考值上限分別為0.2 ng/mL、10.0 mU/mL、0.05 NCU/mL、2.0 NCU/mL、1.5 NCU/mL，測(cè)出結(jié)果超出相應(yīng)指標(biāo)參考值上限即為陽(yáng)性，反之則為陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS19.0軟件處理本研究數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料比較用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；采用McNemar檢驗(yàn)（配對(duì)卡方檢驗(yàn)）分析診斷結(jié)果，一致性系數(shù)計(jì)算采取Kappa檢驗(yàn)，Kappa<0.4即一致性較差，Kappa在0.4～0.7之間即一致性中等，Kappa>0.7即一致性良好。

2 結(jié)果

2.1 兩種檢驗(yàn)方法對(duì)乙型肝炎的診斷結(jié)果分析

經(jīng)實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢驗(yàn)后，80例疑似乙型肝炎患者中共有49例診斷為乙型肝炎，31例患者為HBV感染但HBV-DNA顯示為陰性者。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)對(duì)乙型肝炎的診斷靈敏度、特異度、準(zhǔn)確性分別為91.84%、93.55%、92.50%，化學(xué)發(fā)光免疫分析法的診斷靈敏度、特異度、準(zhǔn)確性分別為93.88%、96.77%、95.00%，二者比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P均>0.05），見表1、表2。

2.2兩種檢驗(yàn)方法與實(shí)時(shí)熒光定量PCR診斷結(jié)果間的一致性分析

化學(xué)發(fā)光免疫分析法、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)對(duì)乙型肝炎的診斷結(jié)果與實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢驗(yàn)結(jié)果之間均具有良好的一致性（Kappa分別為0.735、0.718）。

2.3 兩種檢驗(yàn)方法對(duì)乙肝病毒血清學(xué)指標(biāo)的陽(yáng)性檢出率比較

化學(xué)發(fā)光免疫分析法對(duì)乙肝病毒血清學(xué)指標(biāo)中HBsAg、HBeAg、HBeAb的陽(yáng)性檢出率高于酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（P<0.05），而其對(duì)HBsAb、HBcAb的陽(yáng)性檢出率與酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），見表3。

3討論

乙型肝炎是一種較為常見的病毒性肝炎，發(fā)病率較高，病情遷延不愈，具有反復(fù)發(fā)作的特點(diǎn)[6，7]。臨床上關(guān)于乙型肝炎的防治工作原則為“防治結(jié)合，以防為主”，乙型肝炎主要由乙肝病毒感染所致，而乙肝病毒在人體內(nèi)長(zhǎng)期潛伏，病毒被激活后才發(fā)展為乙型肝炎，在乙型肝炎的起病階段，往往不具有明顯的癥狀，容易導(dǎo)致誤診和漏診的發(fā)生，但由于乙型肝炎存在發(fā)展為肝硬化、肝癌的風(fēng)險(xiǎn)，對(duì)患者的生命安全構(gòu)成一定的威脅[8-10]，因此，還應(yīng)對(duì)乙型肝炎進(jìn)行早期診斷，以便于給予其及時(shí)治療。

乙肝病毒血清學(xué)檢驗(yàn)是診斷乙型肝炎的主要手段之一，隨著生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，臨床上逐漸采用ELISA、CLIA這兩種檢驗(yàn)方法對(duì)乙肝病毒血清學(xué)標(biāo)志進(jìn)行檢驗(yàn)，但關(guān)于二者價(jià)值高低尚存在爭(zhēng)議[11，12]。ELISA主要是針對(duì)包被于固相板孔中的待測(cè)抗原和抗體進(jìn)行檢測(cè)，即采用酶標(biāo)記抗體，將已知抗體吸附于固相載體表面，根據(jù)酶在底物的顯色情況來(lái)判斷抗體情況，其操作簡(jiǎn)便，但由于該檢驗(yàn)方法是采用間接法測(cè)定，其檢驗(yàn)結(jié)果有可能存在誤差[13-15]。而化學(xué)發(fā)光免疫分析法是具有高靈敏度的化學(xué)發(fā)光測(cè)定技術(shù)、具有高特異性的免疫反應(yīng)技術(shù)相結(jié)合發(fā)展而來(lái)的一種新型免疫檢測(cè)技術(shù)，其檢驗(yàn)時(shí)的抗體通常不會(huì)受到突變抗體的影響，標(biāo)記物具有豐富的來(lái)源，可對(duì)各種逃逸的變異株進(jìn)行有效識(shí)別，減輕人為因素對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的干擾，具有良好的檢驗(yàn)準(zhǔn)確性[16-19]。