動物性食品中氯霉素殘留量檢測方法簡化及分析

□ 扎西窮達(dá) 央拉 姜靜雨 次仁卓嘎 劉亞洲 西藏自治區(qū)食品藥品檢驗研究院

1 引言

氯霉素能使白細(xì)胞減少，對人體造血系統(tǒng)的毒性極大，特別是會殺傷顆粒性白細(xì)胞，從而影響紅細(xì)胞的成熟，并容易引起再生障礙性貧血癥，可損害視力，引起急性中毒性表皮松懈癥，使眼瞼粘連及產(chǎn)生角膜瘢痕。此外，氯霉素對老年人、新生兒、早產(chǎn)兒以及肝腎功能不全人群的影響更大[1]。

隨著經(jīng)濟(jì)生活水平的提高，人們對食品的質(zhì)量要求也隨之提高，并逐漸認(rèn)識到抗生素飼料添加劑在經(jīng)濟(jì)效益的背后存在較大弊端。因此，大部分發(fā)達(dá)國家和地區(qū)禁用抗生素，而我國農(nóng)業(yè)部公告第235號《動物性食品中獸藥最高殘留限量》附錄4也規(guī)定氯霉素及其鹽、酯（包括琥珀氯霉素）在所有動物性食品中是禁止使用的藥物，并不得檢出[2]。

2 實(shí)驗

2.1 樣品、儀器、標(biāo)準(zhǔn)品及試劑

2.1.1 樣品：購置于市場，分別隨機(jī)抽取畜禽生肉、水產(chǎn)品、蜂蜜共80批，餐飲業(yè)隨機(jī)抽取熟肉加工制品70批。

2.1.2 儀器：高效液相色譜串聯(lián)三重四極桿質(zhì)譜LCMS-MS（高效液相色譜，日本島津公司；質(zhì)譜，美國AB公司）；色譜柱C18（4.6mm×150mm×5μm，美國安捷倫公司）。

表1 標(biāo)準(zhǔn)品名稱及來源

2.1.3 標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品名稱及來源，見表1。

2.1.4 試劑：實(shí)驗用水為二次蒸餾水；氯化鈉、正己烷、乙腈為分析純；甲醇、乙酸乙酯為色譜純。

2.2 儀器條件

2.2.1 高效液相色譜條件

表2 流動相和梯度比例

表3 氯霉素質(zhì)譜條件

進(jìn)樣量：10μL；柱溫：40℃；流速：0.8mL/min，流動相和梯度比例，見表2。

2.2.2 質(zhì)譜條件：

離子源：ESI；掃描方式：負(fù)離子掃描；檢測方式：MRM。

2.3 對照品制備與樣品處理

2.3.1 對照品制備

氯霉素標(biāo)準(zhǔn)工作液：準(zhǔn)確量取標(biāo)準(zhǔn)溶液，用甲醇+水（3+7）稀釋至刻度，制成濃度為100ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

氯霉素D-5標(biāo)準(zhǔn)工作液：準(zhǔn)確量取內(nèi)標(biāo)溶液，用甲醇+水（3+7）稀釋至刻度，制成濃度為100ng/mL的內(nèi)標(biāo)工作液。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：精密量取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液工作液，用基質(zhì)溶液稀釋至1.0mL，制成氯霉素濃度分別為0.5、1.0、5.0、10.0、50.0和100ng/mL，氯霉素D-5內(nèi)標(biāo)濃度為20.0ng/mL，氯霉素濃度檢出限濃度為0.5ng/mL。

2.3.2 樣品處理

取試樣5.0g置于50mL塑料離心管中，加氯霉素D-5內(nèi)標(biāo)工作液200μL，加入乙腈10mL和4%氯化鈉溶液10mL，渦旋振蕩30min提取。離心10min轉(zhuǎn)速4500r/min，取上清液到新的50mL塑料離心管中。在新的塑料離心管中加正己烷5mL，渦旋振蕩3min，4500r/min，離心5min，棄去正己烷液，反復(fù)幾次直至去除樣品中脂肪。加乙酸乙酯溶液6mL，渦旋振蕩5min，4500r/min，離心5min，將乙酸乙酯層轉(zhuǎn)移至15mL玻璃離心管中，經(jīng)氮?dú)獯蹈?，加甲?水（3+7）1mL，渦旋5min使之溶解，于12000rpm下離心3min，經(jīng)0.22μm濾膜過濾，取濾液進(jìn)樣測定。[3-5]

3 結(jié)果

3.1 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

針筒直接進(jìn)樣質(zhì)譜儀，用全掃描方式將氯霉素和D5-氯霉素的標(biāo)準(zhǔn)溶液注入離子源中，找到目標(biāo)化合物的分子離子峰。進(jìn)行二級質(zhì)譜，掃描二級質(zhì)譜圖（圖1）找到碎片離子信息，目標(biāo)化合物的質(zhì)譜參數(shù)CE電壓、DP電壓、EP電壓等進(jìn)行優(yōu)化，達(dá)到質(zhì)譜條件最佳。[6]

3.2 樣品前處理優(yōu)化

本實(shí)驗選用正己烷去除樣品中脂肪，乙酸乙酯提取樣品中的氯霉素，進(jìn)行渦旋和離心，氮?dú)獯蹈伞?/p>

圖1 氯霉素（321.1/152.0）MRM掃描TIC圖

3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線、檢出限及回收率

用標(biāo)準(zhǔn)溶液溶解基質(zhì)樣品來制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量，消除基質(zhì)效應(yīng)對結(jié)果的影響。得曲線方程y=3.44348e4x±10951.42692，相關(guān)系數(shù)=0.99993，見圖 2。

本實(shí)驗的樣品稱樣以5.0 g計，定容體積按1mL計，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線氯霉素的檢出限濃度為0.5ng/mL，儀器測試信噪比如圖3所示，本實(shí)驗檢出限為0.07ug/kg。[7]

圖2 氯霉素標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

稱取空白試樣后同時分別加入0.03、0.1mL氯霉素標(biāo)準(zhǔn)工作液100ng/mL，各平行5份同樣品處理，實(shí)際加入標(biāo)準(zhǔn)品的量為0.6、2.0 μ g/kg，計算見表4。

圖3 氯霉素濃度在0.5ng/mL時信噪比S/N

表4 回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD

4 結(jié)論

4.1 方法簡化

本實(shí)驗簡化了提取步驟，提高了檢測效率；同時優(yōu)化檢測方法，達(dá)到最佳檢測條件，得到結(jié)果為該方法的最低檢出限為0.07ug/kg， 靈敏度得到提高，線性范圍擴(kuò)大，為0.5～100ng/mL（r=0.99993），回收率達(dá)99%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為2.6%。滿足了對動物性食品氯霉素監(jiān)督檢測的要求，提高了檢測時效。

4.2 檢測數(shù)據(jù)結(jié)果分析

樣品購置于市場，分別隨機(jī)抽取畜禽生肉，其中牛肉20批、豬肉10批、雞肉10批、水產(chǎn)品20批、蜂蜜及蜂產(chǎn)品20批，共80批；從餐飲業(yè)隨機(jī)抽取熟肉加工制品共70批，其中牛肉加工制品20批、豬肉加工制品20批、雞肉加工制品20批、鴨肉加工制品10批。檢測結(jié)果顯示，其中牛肉1批、雞肉1批、蜂蜜1批、雞肉加工制品2批檢測出氯霉素殘留量，共計5批樣品不合格，不合格率達(dá)3.3%。從上述情況看，氯霉素殘留量控制依舊是食品安全重大問題，檢出率較高的為雞肉類樣品中氯霉素殘留，禽類養(yǎng)殖業(yè)中使用氯霉素較為廣泛，其他類產(chǎn)品也存在含有氯霉素殘留，因此應(yīng)從源頭加強(qiáng)畜禽等養(yǎng)殖業(yè)中獸藥使用監(jiān)管，同時在企業(yè)生產(chǎn)和餐飲業(yè)加工中應(yīng)注重加工原料的把關(guān)。[8]

[1] 熊琳，李維紅等，肉制品中藥物殘留風(fēng)險因子概述[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報，2016年4月第7卷第4期:1572-1577.

[2] 農(nóng)業(yè)部235號公告-2002，動物性食品中獸藥最高殘留限量[S].

[3] 農(nóng)業(yè)部781號公告-2-2006，動物源食品中氯霉素殘留量的測定高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[S].

[4] GB/T 22338-2008，動物源性食品中氯霉素類藥物殘留量測定[S].

[5] SN/T 1864-2008，進(jìn)出口動物源性食品中氯霉素殘留量的檢測方法液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[S].

[6] 馬曉年等，超高效液相色譜串聯(lián)三重四極桿質(zhì)譜測定蜂蜜中氯霉素殘留[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報，2017年10月第8卷第10期：3898-3902.

[7] 張厚森等，高效液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜測定熟肉制品中磺胺嘧啶和氯霉素藥物殘留[J].分析科學(xué)學(xué)報，2013年8月第29卷第4期：527-530.

[8] 勇艷華等，熟肉制品中氯霉素的監(jiān)測與分析[J].糧食加工，2010年09期：154-155.