香菇L808單孢雜交育種篩選試驗

黃書文

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香菇L808單孢雜交育種篩選試驗

黃書文

（三明市真菌研究所 三明市三真生物科技有限公司，福建 三明 365000）

香菇L808單孢雜交技術(shù)路線：親本選擇→單孢分離→單核體菌絲確認→配對雜交組合→移植擴大繁殖→初篩→復(fù)篩→區(qū)別性鑒定→中間試驗→示范栽培。選育出的香菇L16菌株主要栽培特性及產(chǎn)量與親本相當(dāng)；菌絲耐高溫能力優(yōu)于親本。新菌株與親本間有拮抗反應(yīng)。新菌株與親本在生理特性、遺傳特性上有一定的差異性。

香菇L808；單孢雜交；香菇L16

香菇（（Berk.）Pegler）又名香蕈、香菰、花菇、冬菇、花冬菇、明花、天白花菇、暗花、茶花、椎茸、香信、板栗菇、椎菇等[1, 2]，是中國傳統(tǒng)的著名食用菌并最早人工馴化栽培成功。香菇品種L808子實體中大型，形態(tài)好，肉厚，質(zhì)地致密，耐貯運。自2009年起成為華北地區(qū)香菇主栽品種，并逐漸向其他地區(qū)擴散，成為各主產(chǎn)區(qū)主栽品種。但L808也有明顯的缺點：菌絲不耐高溫，菌棒越夏期間容易燒菌，導(dǎo)致爛棒。本試驗試圖用香菇L808單孢雜交育種方式選育出一株既具有親本的優(yōu)良性狀，又一定程度上提高其菌絲抗高溫能力的新菌株。

選育出的香菇L16菌株，其主要栽培特性及產(chǎn)量與親本相當(dāng)，菌絲耐高溫能力優(yōu)于親本；與親本間有一定拮抗反應(yīng)；生理特性、遺傳特性與親本有一定的差異性。示范推廣表明，L16適合多種氣候條件，適應(yīng)區(qū)域廣，品質(zhì)好，產(chǎn)量高。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

（1）供試菌株。香菇L808，三明市真菌研究所保藏。

（2）培養(yǎng)基。PDA培養(yǎng)基：去皮馬鈴薯200 g、瓊脂20 g、葡萄糖20 g、水1 000 mL。原種、栽培種培養(yǎng)基：闊葉樹木屑（3～6 mm）78%、麥麩20%、輕質(zhì)碳酸鈣1%、蔗糖1%，含水量60%。栽培料培養(yǎng)基：闊葉樹木屑（3～6 mm）83%、麥麩16%、輕質(zhì)碳酸鈣1%，含水量60%。

（3）容器。18×180（mm）玻璃試管，90 mm培養(yǎng)皿，14×28（cm）折角聚丙烯袋，15×58（cm）聚乙烯袋。

1.2 實驗方法

（1）親本選擇、單孢分離、單核體菌絲確認。從本所栽培的香菇L808中選擇生長健壯、菌肉厚、形態(tài)完整的七分成熟子實體作親本。親本采后立即于無菌條件下用孢子印法收集孢子。14.5 h后取適量擔(dān)孢子放入無菌水中，稀釋至一定濃度，用接種環(huán)醮取孢子液涂于平板培養(yǎng)基上，密封培養(yǎng)皿，于22～25 ℃避光培養(yǎng)。待出現(xiàn)眾多直徑3～6 mm的菌落時，每獨立菌落挑取一小塊菌絲置于斜面培養(yǎng)基中央，25 ℃培養(yǎng)。待菌絲體生長最快的即將長滿斜面時對各菌落鏡檢，挑出單核體菌絲。

（2）配對雜交組合。選取菌絲形態(tài)、色澤、生長速度各異的16個單核體菌絲于斜面培養(yǎng)基上進行交互配對，兩菌種塊相距20 mm，共120個組合。兩菌落接觸后挑取交接處菌種塊置于斜面培養(yǎng)基中央，25 ℃培養(yǎng)。分別于3天、13天后測量菌絲兩生長端之間的距離，生長速度≥4.0 mm/d的進行鏡檢，＜4.0 mm/d的淘汰。鏡檢后有鎖狀聯(lián)合的移植擴大繁殖。

（3）小試初篩。所有雜交菌株每組10棒，3個重復(fù)，親本作對照。每棒重量2 175±25 g，三層無紡布封口，108～110 ℃蒸汽滅菌5 h，種源為原種，每棒3個接種口，套袋，接種后14天剝?nèi)ヌ状?。培養(yǎng)條件：溫度25 ℃，避光，CO2濃度≤0.3%，相對濕度60%～70%。記錄菌絲長滿菌棒需要的天數(shù)，所有菌棒長滿后，白天給予300 lx光照，其他培養(yǎng)條件不變。瘤狀物較多時用6.67 cm鐵釘刺孔增氧，每棒54個孔，刺孔后10天內(nèi)保持相對濕度90%～95%。培養(yǎng)120天后搬至菇棚，再7天脫袋出菇。每潮菇出完養(yǎng)菌15天后注水。菇棚環(huán)境條件：全出菇期溫度5 ℃以上，26 ℃以下，晴天日夜溫差約10 ℃；濕度80%～90%；光照100～300 lx；CO2濃度≤0.1%。

表1 小試初篩菌株栽培表現(xiàn)

（4）小試復(fù)篩。初篩選出的4個菌株進行復(fù)篩，親本作對照。每菌株每組30棒，3個重復(fù)。按1.2（3）的方法進行。

（5）菌絲耐高溫與拮抗試驗。選出的菌株與親本進行耐高溫和拮抗試驗。耐高溫試驗：將25 ℃下培養(yǎng)14天的斜面菌種在40 ℃條件下放置1 h、3 h、5 h、7 h、9 h后，于25 ℃條件下培養(yǎng)2天，每處理移接5支試管，觀察能否萌發(fā)。

（6）生產(chǎn)性試驗。1 000棒，按1.2（3）的方法進行。

（7）示范推廣。龍巖市新羅區(qū)綠態(tài)食用菌專業(yè)合作社示范形推廣栽培20萬袋，每袋裝干料980～1 000 g，按花菇高棚層架培育方法進行。

2 結(jié)果與分析

2.1 單核體菌絲確認

共挑取56個獨立菌落，經(jīng)鏡檢確認有51個單核體菌絲。另5個有鎖狀聯(lián)合或無鎖狀聯(lián)合，由兩個能親合的單核體菌絲發(fā)生交配或兩個不能親合的單核體菌絲混雜在一起。單核體菌絲粗細不一；有的生長端整齊，有的不整齊；顏色有白，灰白，淡黃；生長速度差異大，0.25～0.99 mm/d 的有7株，1.00～1.99 mm/d 的有15株，2.00～2.99 mm/d 的有23株，3.00～3.14 mm/d的有6株。

2.2 配對雜交組合

配對雜交組合中生長速度≥4.0 mm/d的有18個，經(jīng)鏡檢其中13個有鎖狀聯(lián)合，另5個沒有鎖狀聯(lián)合。香菇為雙因子四極性，品種內(nèi)單核體菌絲間親合概率為25%，本試驗只獲得13個雜交菌株的原因有：一是入試單核體菌絲極性分布不均勻，兩個不親合極性的單核體菌絲較多，而另兩個極性的單核體菌絲較少；二是有的雜交菌株生長速度小于4.0 mm/d。

2.3 小試初篩

小試初篩結(jié)果如表1所示，13個雜交菌株栽培性狀分化明顯，3個菌株能扭結(jié)原基，但原基不能分化成子實體，表明菌棒遠未達到生理成熟，為超晚熟菌株；06、09兩菌株有少部分原基不能分化成子實體，菌棒未達完全生理成熟；其他菌株原基都能正常分化成子實體，菌棒已達完全生理成熟；各菌株菌蓋圓整。

2.4 小試復(fù)篩

小試復(fù)篩結(jié)果，各菌株與初篩時表現(xiàn)一致（表2），11號菌株明顯優(yōu)于其他菌株，定名為L16。

表2 復(fù)篩菌株栽培表現(xiàn)

2.5 菌絲耐高溫與拮抗試驗

菌絲耐高溫試驗結(jié)果，L16比親本明顯耐高溫（表3）。拮抗試驗結(jié)果（圖1），L16與親本L808之間存在一定的拮抗反應(yīng)；兩者在生理特性及遺傳特性上有一定差異。

表3 香菇L16菌絲與親本耐高溫比較

2.6 生產(chǎn)性試驗

生產(chǎn)性試驗的1 000個菌棒共采收鮮香菇819.37 kg，平均每棒產(chǎn)量為819 g。子實體形態(tài)好，菌肉厚，質(zhì)地致密。

2.7 示范推廣

示范推廣栽培的20萬個菌棒，共采收鮮香菇103 419 kg，平均每棒產(chǎn)量為517 g，生物學(xué)效率≥51.7%。子實體形態(tài)好，菌肉厚，質(zhì)地致密；菌棒越夏安全性好。

圖1 L16-L808拮抗試驗結(jié)果

3 小結(jié)與討論

在本所的試驗部分都是在人工控制環(huán)境條件下進行，香菇L16的耐高溫優(yōu)勢與親本相比顯現(xiàn)不出來。從示范推廣的結(jié)果看，在自然氣候下培養(yǎng)，經(jīng)越夏管理，兩者差異很大，海拔越低，差異越大。相同條件下，香菇L16比L808越夏安全性好，表現(xiàn)為前者正常出菇，后者常常是第一潮爆發(fā)性出菇，菇多、小、質(zhì)量差，之后菌棒解體。

試驗中發(fā)現(xiàn)，同一極性的單核體菌絲在形態(tài)、生長速度上有差異。這表明雜交后代的性狀分離明顯，同時也意味著在香菇單孢雜交育種中，應(yīng)選擇形態(tài)好、生長端整齊、生長速度較快的單核體菌絲進行配對。

香菇品種內(nèi)單孢雜交育種親和概率低，育種成功概率要低于品種間的單孢雜交育種。香菇育種主要方向應(yīng)該是品種間的單孢雜交育種。

[1] 黃年來, 林志彬, 陳國良, 等. 中國食藥用菌學(xué)[M]. 上海: 上海科學(xué)技術(shù)文獻出版社, 2010.

[2] 卯曉嵐. 中國大型真菌[M]. 鄭州: 河南科學(xué)技術(shù)出版社, 2010.

S646

B

2095-0934（2018）03-184-03

黃書文，高級農(nóng)藝師，主要從事食用菌品種選育、栽培技術(shù)研究及推廣工作。E-mail：fjsmhuangshuwen@