牛布魯氏菌病不同檢測方法比較與試劑質(zhì)控

豆 玲,豆思遠

(甘肅省動物疫病預(yù)防控制中心，甘肅 蘭州 730046)

布魯氏菌病(布病) 是一種由布氏桿菌引起的人畜共患傳染病，世界動物衛(wèi)生組織(OIE)列為 B類傳染病，是國際貿(mào)易檢疫中必檢的傳染病。近幾年來，隨著養(yǎng)牛(尤其是奶牛) 業(yè)的發(fā)展，牛及其制品調(diào)運越來越頻繁，致使奶牛布魯氏菌病疫情在一些地方有所抬頭。加強布魯氏菌病的監(jiān)測，撲殺陽性牛是控制奶牛布魯氏菌病的關(guān)鍵措施之一。

根據(jù) GB/T18646-2002國標中規(guī)定，虎紅平板凝集試驗(RBT)、試管凝集試驗(SAT) 和補體結(jié)合試驗(CFT)等經(jīng)典試驗方法為我國動物布病的診斷技術(shù)。隨著生物技術(shù)的發(fā)展，新的快速方便的檢測技術(shù)不斷出現(xiàn)，酶聯(lián)免疫試驗(ELISA)是近幾年研制出來的一種快速檢測技術(shù)，是OIE規(guī)定的在國際貿(mào)易中指定的檢測診斷方法之一。

對選用的抗原與ELISA試劑盒質(zhì)控進行質(zhì)控，再利用虎紅平板凝集試驗(RBT)、試管凝集試驗(SAT)和抗體競爭ELISA試驗三種方法，分別對甘肅地區(qū)某奶牛養(yǎng)殖場1167份血清進行了檢測，并將這3種方法進行了比較，并對報告如下。

1 材料與方法

1.1 試劑

虎紅平板凝集試驗、試管凝集試驗所用抗原及對照，均購自青島易邦生物工程有限公司。布魯氏菌抗體競爭ELISA試劑盒購自瑞典Svanova公司。

1.2 被檢樣品

在甘肅省河西地區(qū)隨機抽取4個奶牛養(yǎng)殖場，采集樣品共計1 167份。

1.3 方法

RBT、SAT依據(jù)GB/T18646-2002國標中的規(guī)定的方法操作和判定結(jié)果，布魯氏菌抗體競爭ELISA按照試劑盒說明書進行。

1.4 布病試劑質(zhì)量控制

包括抗原質(zhì)控與ELISA試劑盒質(zhì)控

1.5 數(shù)據(jù)分析

結(jié)果數(shù)據(jù)采用SPSS20.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，用X2檢驗比較不同方法的陽性檢出率，P<0.05表示有統(tǒng)計學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 抗原與ELISA試劑盒質(zhì)控

虎紅抗原質(zhì)控選擇國標等同陽性血清，用生理鹽水稀釋：1/25，1/40，1/45，1/55，1/100。經(jīng)三次重復(fù)試驗，稀釋度為1/45時反應(yīng)陽性，1/55時反應(yīng)陰性。ELISA試劑盒質(zhì)控選擇ANSES中列出合格批次，國標等同陽性血清，稀釋度：1/16，1/64。每個稀釋度做20個重復(fù)，每個試劑盒選2塊板。稀釋度為1/16時反應(yīng)陽性，1/64時反應(yīng)陰性。

2.2 三種檢測方法結(jié)果比較

通過表1可知，利用抗體競爭ELISA試驗檢出陽性樣品數(shù)量最多，虎紅平板凝集試驗次之，試管凝集試驗最少。2次重復(fù)試驗，均使用同一批次的試劑并在相同環(huán)境條件下進行。抗體競爭ELISA試驗、RBT與SAT檢出陽性率分別為7.80%、4.11%、2.66%。對上述三種檢測結(jié)果進行兩兩比較?？贵w競爭ELISA試驗與虎紅平板試驗、試管凝集試驗相比，抗體競爭ELISA陽性檢出率較高(P<0.05)?；⒓t平板試驗與試管凝集試驗相互比較，檢出陽性率率均無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，結(jié)果見表 2。

表1 三種檢測方法結(jié)果比較

2.3 試驗敏感性與符合率比較

由表3可知，試管凝集試驗檢出的31份陽性樣品中，虎紅平板凝集試驗和抗體競爭ELISA試驗也均為陽性，符合率為100%?；⒓t平板凝集試驗檢出的48份陽性樣品，抗體競爭ELISA試驗均為陽性，符合率為100%，但抗體競爭ELISA試驗檢出的91份陽性樣品，與虎紅平板凝集試驗符合率為52.7%，與試管凝集試驗符合率為34%，說明抗體競爭ELISA更為敏感，可能存在假陽性。

表2 三種檢測方法陽性檢出率比較

表3 三種檢測方法敏感性與符合率比較

3 分析與討論

2015年，人間布病全國甲、乙傳染病發(fā)病順位第7位，全國劃分為四個區(qū)域，甘肅屬一類區(qū)，2014-2015年增加910例，變化幅度65.33%，發(fā)病率3.478%。人間布病近幾年雖然得到了有效控制，但是國家缺乏經(jīng)濟和社會資源，缺乏安全、有效、廣泛應(yīng)用的人用苗，這就意味著當前的措施微乎其微，只能通過個人衛(wèi)生、安全操作、保護環(huán)境和食品安全來最小化布病的風(fēng)險。布病檢測對所選抗原和試劑盒進行質(zhì)量控制，才能保證結(jié)果的準確、可靠性。目前布病診斷有多種方法，但是新型的診斷技術(shù)對于實驗室條件及環(huán)境有特殊要求，在大多數(shù)實驗室推行還具有很大的局限性。

布病診斷技術(shù)按照國標規(guī)定，虎紅平板凝集試驗適用于家畜布病的初篩，注意抗原須在2～8℃保存，避免冷凍，使用前充分混勻，整個實驗必須按照操作規(guī)程進行，避免使用血漿，血清溶血，杜絕假陽性。試管凝集試驗適用于診斷布病，ELISA可用于檢測單個或混合血清樣品，乳樣。敏感性、特異性高，但特異性小于CFT，可用于高通量檢測，但是該方法尚未列入我國布病監(jiān)測標準。

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