不同消毒劑和不同濃度激素對(duì)鹿茸草外植體誘導(dǎo)研究

王 瑩，邱江明

（江西環(huán)境工程職業(yè)學(xué)院，江西贛州 341000）

鹿茸草又名牙痛草、白蘆基、千年艾等。為多年生草本植物，全株有白色茸毛，生于向陽(yáng)山坡上，主要分布于江蘇、浙江、江西、福建、湖南等地。鹿茸草具有清熱解毒、祛風(fēng)止痛、涼血止血等功效，常用于治感冒、咳嗽、肺炎發(fā)熱、吐血、赤痢、便血、月經(jīng)不調(diào)、風(fēng)濕骨痛、牙痛、乳癰等[1]。市場(chǎng)上，野生鹿茸草干品130～140元/kg。但由于其野生資源有限，而且再生能力差，使得目前鹿茸草野生資源匱乏。利用組培快繁技術(shù)能對(duì)江西野生鹿茸草進(jìn)行有效保護(hù)，能夠大大增加當(dāng)?shù)剞r(nóng)戶的經(jīng)濟(jì)收入。但野生鹿茸草的快繁技術(shù)研究還少有報(bào)道，本文通過(guò)對(duì)比不同消毒劑在不同處理時(shí)間對(duì)野生鹿茸草的消毒效果，以及不同濃度6-BA和NAA組合對(duì)其外植體誘導(dǎo)率的影響，以期為野生鹿茸草的組織培養(yǎng)和快速繁殖提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

2017年4月，以江西省贛州市信豐縣野生鹿茸草帶腋芽的莖段為試驗(yàn)材料。

1.2 方法

江西野生鹿茸草外植體準(zhǔn)備好后先用酒精消毒30s，再分別進(jìn)行如下方式消毒：①用0.1%升汞分別處理江西野生鹿茸草莖段外植體 3min、4min、5min、6min、7min、8min、9min。②用2%次氯酸鈉分別處理江西野生鹿茸草莖段外植體10min、15min、20min、25min、30min。③用0.1%升汞分別處理江西野生鹿茸草種子 3min、4min、5 min、6min、7min、8min、9min。④用2%次氯酸鈉分別處理江西野生鹿茸草種子10min、15min、20min、25min、30min。

消毒完后用無(wú)菌蒸餾水沖洗3～5遍，將外植體切成帶腋芽的莖段接種到培養(yǎng)基中，每瓶接1株，每個(gè)處理接種20瓶，將消毒好的種子接種到培養(yǎng)基中，每瓶接3株，每個(gè)處理接種20瓶。

培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，并同時(shí)加入6-BA和NAA這2種植物激素。其中6-BA采用3種不同濃度，分別為2.0mg/L、2.5mg/L、3mg/L；NAA采用5種不同濃度，分別為0.1mg/L、0.2mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L、1.5mg/L。

試驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)：1個(gè)月后統(tǒng)計(jì)用不同消毒劑在不同處理時(shí)間下外植體的污染率、成活率和死亡率，以及不同培養(yǎng)基對(duì)外植體誘導(dǎo)率的影響。計(jì)算各種指標(biāo)的公式如下：①成活率（%）=（外植體成活數(shù)量/外植體接種數(shù)量）×100；②死亡率（%）=（外植體死亡數(shù)量/外植體接種數(shù)量）×100；③污染率（%）=（外植體污染數(shù)量/外植體接種數(shù)量）×100；④誘導(dǎo)率（%）=（成功誘導(dǎo)芽數(shù)量/誘導(dǎo)外植體數(shù)量）×100。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同消毒劑、不同消毒時(shí)間對(duì)野生鹿茸草外植體消毒效果的影響

2.1.1 0.1%升汞在不同消毒時(shí)間對(duì)野生鹿茸草莖段消毒效果的影響。從表1中可以看出，用0.1%升汞消毒時(shí)，污染率隨著消毒時(shí)間的增加在降低，死亡率在處理6min中首次出現(xiàn)，并隨著消毒時(shí)間的增加而增加，存活率隨著消毒時(shí)間的延長(zhǎng)先增加后降低，在處理7min中達(dá)到最大值為35%。綜合以上指標(biāo)可以得到用0.1%升汞消毒時(shí)最適宜野生鹿茸草外殖體的消毒時(shí)間為7min。

表1 0.1%升汞在不同消毒時(shí)間對(duì)野生鹿茸草莖段消毒效果的影響

2.1.2 2%次氯酸鈉在不同消毒時(shí)間對(duì)野生鹿茸草莖段消毒效果的影響。從表2中可以看出，用2%次氯酸鈉消毒時(shí)，污染率隨著消毒時(shí)間的增加變化不大，污染率都在96%以上，死亡率都為0，存活率隨著消毒時(shí)間的增加首次在25min中出現(xiàn)，但存活率太低，只有4%。綜合以上指標(biāo)可以看出用2%次氯酸鈉對(duì)野生鹿茸草莖段消毒時(shí)由于污染率太高（高達(dá)96%以上），且存活率太低（只有4%），所以2%次氯酸鈉不適合用于野生鹿茸草外植體的消毒。

表2 2%次氯酸鈉在不同消毒時(shí)間對(duì)野生鹿茸草莖段消毒效果的影響

2.1.3 0.1%升汞在不同消毒時(shí)間對(duì)野生鹿茸草種子消毒效果的影響。從表3中可以看出，用0.1%升汞消毒時(shí)，污染率隨著消毒時(shí)間的增加在降低，6min時(shí)最低達(dá)6%，死亡率在處理4min中首次出現(xiàn)，并隨著消毒時(shí)間的增加而增加，存活率隨著消毒時(shí)間的延長(zhǎng)先增加后降低，在處理4min中達(dá)到最大值為90%。綜合以上指標(biāo)可以得到用0.1%升汞消毒時(shí)最適宜野生鹿茸草種子的消毒時(shí)間為4min。

表3 0.1%升汞在不同消毒時(shí)間對(duì)野生鹿茸草種子消毒效果的影響

2.1.4 2%次氯酸鈉在不同消毒時(shí)間對(duì)野生鹿茸草種子消毒效果的影響。從表4中可以看出，用2%次氯酸鈉消毒時(shí)，污染率隨著消毒時(shí)間的增加不變，污染率都控制在6%，死亡率隨著時(shí)間的增加而增加，25min時(shí)死亡率達(dá)到100%，存活率隨著消毒時(shí)間的增加而降低，25min時(shí)存活率為0。綜合以上指標(biāo)可以看出用2%次氯酸鈉對(duì)野生鹿茸草種子消毒的最佳時(shí)間是10min，污染率為6%，存活率可達(dá)到96%。

表4 2%次氯酸鈉在不同消毒時(shí)間對(duì)野生鹿茸草種子消毒效果的影響

2.2 不同濃度的6-BA和NAA組合對(duì)江西野生鹿茸草外植體誘導(dǎo)率的影響

從表5中可以看出，當(dāng)6-BA的濃度為2.0mg/L時(shí)，隨著NAA濃度的增大誘導(dǎo)率反而降低，當(dāng)NAA濃度為0.1mg/L時(shí)誘導(dǎo)率最大為63%。當(dāng)6-BA的濃度為2.5mg/L時(shí)，隨著NAA濃度的增大誘導(dǎo)率也在降低，當(dāng)NAA濃度為0.1mg/L時(shí)誘導(dǎo)率最大為98%。當(dāng)6-BA的濃度為3.0mg/L時(shí)，隨著NAA濃度的增大誘導(dǎo)率也在降低，當(dāng)NAA濃度為0.1mg/L和0.2mg/L時(shí)誘導(dǎo)率最大都為98%，但在6-BA的濃度為3.0mg/L時(shí)有玻璃化現(xiàn)象出現(xiàn)，且隨著NAA濃度的增加玻璃化現(xiàn)象更明顯。綜合以上考慮，最適宜鹿茸草外植體誘導(dǎo)的培養(yǎng)基為MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.2mg/L，在此培養(yǎng)基中鹿茸草的誘導(dǎo)率高達(dá)98%。

表5 不同濃度6-BA和NAA組合對(duì)野生鹿茸草外植體誘導(dǎo)率的影響

3 結(jié)論與討論

本試驗(yàn)研究了0.1%升汞、2%次氯酸鈉2種消毒劑在不同處理時(shí)間對(duì)江西野生鹿茸草莖段和種子的消毒效果，從而得到了最適宜江西野生鹿茸草種子的消毒藥劑為2%升汞，最適宜的消毒時(shí)間為10min，其污染率僅為6%，存活率高達(dá)96%，最適宜江西野生鹿茸草莖段的消毒藥劑為0.1%升汞，最適宜的消毒時(shí)間為7min，其污染率為26%，存活率達(dá)35%，但是通過(guò)后期觀察發(fā)現(xiàn)通過(guò)莖段誘導(dǎo)的外植體生長(zhǎng)狀況較差，可能是由于升汞對(duì)其毒害的作用最適合莖段誘導(dǎo)的消毒方法還有待進(jìn)一步改善。同時(shí)本試驗(yàn)還通過(guò)比較不同濃度的6-BA和NAA組合對(duì)野生鹿茸草外植體誘導(dǎo)率的影響，從而得到最適宜鹿茸草外植體誘導(dǎo)的培養(yǎng)基為MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L，在此培養(yǎng)基中鹿茸草的誘導(dǎo)率高達(dá)98%。

本試驗(yàn)利用江西野生鹿茸草為外植體成功的誘導(dǎo)出其組培瓶苗，為實(shí)現(xiàn)江西野生鹿茸草的商業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)做好了一部分技術(shù)儲(chǔ)備。

[1]蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典,下冊(cè),第1版[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,1977：2242.