一株四環(huán)素高效降解菌的分離及降解特性

吳學(xué)玲 吳曉燕 李交昆 申麗 余潤(rùn)蘭 曾偉民

（1. 中南大學(xué)資源加工與生物工程學(xué)院，長(zhǎng)沙 410083；2. 中南大學(xué)生物冶金教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，長(zhǎng)沙 410083）

降解四環(huán)素類抗生素的方式主要有以下兩種：一是生物降解，包括微生物降解和植物降解；二是非生物降解，如水解、氧化降解及光降解等［11］。Reyes等［12］分別用長(zhǎng)波紫外光、可見(jiàn)光和紫外光來(lái)照射四環(huán)素水溶液，發(fā)現(xiàn)加入TiO2后四環(huán)素的降解速率明顯高于不加。β-內(nèi)酰胺類和磺胺類抗生素在水中容易發(fā)生水解作用。臭氧的強(qiáng)氧化作用對(duì)四環(huán)素類抗生素的降解效率極高，Wu 等［13］發(fā)現(xiàn)20 mg/L的四環(huán)素經(jīng)過(guò)臭氧處理5 min以后能夠全部降解?？股卦谖⑸镒饔孟缕錃埩粑锏睦砘再|(zhì)及結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，從大分子化合物降解為小分子化合物，最終轉(zhuǎn)變?yōu)镠2O和CO2，這一過(guò)程稱為抗生素的微生物降解。其中耐藥細(xì)菌起最重要的作用。成潔等［14］從長(zhǎng)期受四環(huán)素類抗生素污染的土壤中分離到一株能降解土霉素、四環(huán)素和金霉素的菌株，降解率分別為58.3%、63.9%和65.5%。微生物降解四環(huán)素具有操作方便、易于控制、效率高且不會(huì)造成二次污染等優(yōu)點(diǎn)。

本研究從長(zhǎng)期以四環(huán)素類抗生素為飼料添加劑的養(yǎng)豬廠糞便沉積池底部的污泥中篩選出一株能夠高效降解四環(huán)素的菌株，對(duì)其進(jìn)行分類鑒定，研究其對(duì)四環(huán)素的降解能力及最佳降解條件，初步探究其四環(huán)素耐藥基因。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品（土壤）來(lái)源 本實(shí)驗(yàn)樣品是從長(zhǎng)沙市某養(yǎng)豬廠（長(zhǎng)期用四環(huán)素類抗生素作為飼料添加劑）糞便沉積池底部污泥中取得的。土壤樣品用無(wú)菌自封袋裝好，置于-20℃的冰箱中待后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

1.1.2 培養(yǎng)基 單一碳源培養(yǎng)基：EDTA 15 mg/L，ZnSO4·7H2O 4.5 mg/L，CaCl2·2H2O 4.5 mg/L，F(xiàn)eSO4·7H2O 3 mg/L，MnCl2·4H2O 1 mg/L，Na2MoO4·2H2O 0.4 mg/L，CuSO4·5 H2O 0.3 mg/L，KI 0.1 mg/L，（NH4）2SO45 g/L，KH2P043 g/L，MgS04·7H2O 0.5 g/L，pH 7.0-7.2，121℃高壓滅菌20 min。

篩選培養(yǎng)基：在滅菌單一碳源培養(yǎng)基中加入四環(huán)素母液（20 mg四環(huán)素標(biāo)準(zhǔn)品于1 mL甲醇中，充分溶解，用0.22 μm 已滅菌的尼龍過(guò)濾，現(xiàn)配現(xiàn)用）。

1.1.3 藥品 四環(huán)素標(biāo)準(zhǔn)品（C22H24N2O8·HCl），購(gòu)于上海源葉生物科技有限公司；甲醇（色譜純）；乙腈（色譜純）；磷酸二氫鈉（分析純）、草酸（分析純）、乙二胺四乙酸二鈉（Na2EDTA）（分析純）、檸檬酸（分析純）；水為Millipore超純水。細(xì)菌基因組提取試劑盒和Taq DNA聚合酶均購(gòu)自天根生化科技（北京）有限公司。

1.將白菜切成寬約2厘米的條，海帶用開(kāi)水焯透，切成約1厘米的條。豬肉切成片備用，胡蘿卜切成片備用，蝦皮準(zhǔn)備好。

1.2 方法

1.2.1 四環(huán)素降解菌的篩選及分離純化 用10 mL無(wú)菌水將0.1g污泥樣品制成懸液，混勻后靜置，向篩選培養(yǎng)基（四環(huán)素濃度20 mg/L）中加1 mL上清液，25℃，150 r/min 搖床中暗培養(yǎng)，8 d后吸取0.5 mL培養(yǎng)液再次接種到篩選培養(yǎng)基（四環(huán)素濃度40 mg/L）中，其他條件不變，培養(yǎng)8 d。重復(fù)以上操作步驟，直至四環(huán)素終濃度為120 mg/L。富集結(jié)束后用稀釋涂布法和平板劃線法篩出能以四環(huán)素為唯一碳源的單菌落并分離、純化。

1.2.2 四環(huán)素降解菌的形態(tài)觀察和生理生化實(shí)驗(yàn) 將降解菌接種到篩選培養(yǎng)基平板上，25℃恒溫養(yǎng)2 d后革蘭氏染色，再用普通光學(xué)顯微鏡和掃描電鏡觀察菌體形態(tài)。對(duì)篩選出的四環(huán)素降解菌株進(jìn)行生理生化實(shí)驗(yàn)，具體步驟可參考《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊(cè)》［15］和《常見(jiàn)細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)》［16］來(lái)操作。

1.2.3 四環(huán)素降解菌16S rDNA 序列分析及菌株遺傳學(xué)分析 利用試劑盒提細(xì)菌基因組，以其DNA為模板進(jìn)行目的片段的擴(kuò)增。擴(kuò)增細(xì)菌基因組16S rDNA通用引物由上海權(quán)陽(yáng)生物科技公司合成。PCR 反應(yīng)體 系（50 μL）：10×PCR 緩 沖 液 5 μL，dNTP（25 mmol/L）1.0 μL，上下游引物（20 mmol/L）各 1.0 μL， 模 板 DNA 1.0 μL，Mg2+（25 mmol/L）3.0 μL，Taq DNA聚合酶0.5 μL，加超純水補(bǔ)足至50 μL。反應(yīng)參數(shù)為：94℃預(yù)變性 5 min，94℃變性40 s，60℃退火40 s，72℃延伸1 min，30個(gè)循環(huán)，72℃再延伸10 min，4℃保存10 min。用0.8%的瓊脂糖凝膠電泳對(duì)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行驗(yàn)證分析，再送樣測(cè)序。將所得菌株的16S rDNA序列在NCBI中作BLAST比對(duì)，用Bioedit分析同源性和遺傳距離，最后在MEGA6.0軟件中繪制發(fā)育樹(shù)。

1.2.4 四環(huán)素殘留測(cè)定方法的建立——高效液相色譜法 色譜條件為色譜柱：C18柱；流動(dòng)相：乙腈和10 mmol/L磷酸二氫鈉（NaH2PO4）溶液；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：360 nm。

用1 mL甲醇充分容解20 mg四環(huán)素標(biāo)準(zhǔn)品，即得20 mg/mL的四環(huán)素標(biāo)準(zhǔn)液，再用甲醇分別稀釋成25、20、15、10、5 mg/L等系列濃度，超聲排氣后用上面得到的色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

取5 mL培養(yǎng)液以8 000 r/min離心15 min。取4 mL上清液加入到含4 mL Na2EDTA-Mcllvaine緩沖液的離心管中，再加入正己烷和三氯甲烷各1 mL，振蕩2 min并超聲30 s，8000 r/min離心15 min，0.22 μm微孔濾膜過(guò)濾，密封4℃冷藏待測(cè)。

向不接菌的單一碳源培養(yǎng)基中加入四環(huán)素標(biāo)準(zhǔn)液制得四環(huán)素濃度為10 mg/L、40 mg/L溶液，旋渦混勻，同時(shí)用流動(dòng)相將四環(huán)素標(biāo)準(zhǔn)液配成對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度，HPLC測(cè)定，回收率的計(jì)算公式為：回收率=A/As×100%（A和As分別是單一碳源培養(yǎng)基和相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)液中四環(huán)素的峰面積）。

1.2.5 培養(yǎng)溫度對(duì)四環(huán)素降解菌的生長(zhǎng)及其降解四環(huán)素的影響 菌的生長(zhǎng)用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器測(cè)定。將四環(huán)素降解菌的接種液以3%的接種量接入四環(huán)素濃度為50 mg/L、初始pH為7.0的單一碳源培養(yǎng)基中，分別在20、25、30、35和40℃五個(gè)溫度下以轉(zhuǎn)速150 r/min搖床上暗培養(yǎng)，每個(gè)樣品重復(fù)3次，培養(yǎng)8 d后測(cè)定四環(huán)素的降解率。

1.2.6 初始pH對(duì)四環(huán)素降解菌的生長(zhǎng)及其降解四環(huán)素的影響 將四環(huán)素濃度為50 mg/L的單一碳源培養(yǎng)基的初始pH值分別調(diào)至5.0、6.0、7.0、8.0和9.0，向培養(yǎng)基中加入3%的降解菌菌液，25℃，150 r/min搖床上黑暗培養(yǎng)，每個(gè)樣品做3組平行，培養(yǎng)8 d后對(duì)四環(huán)素的降解率進(jìn)行測(cè)定。

1.2.7 培養(yǎng)時(shí)間對(duì)四環(huán)素降解菌的生長(zhǎng)及其降解四環(huán)素的影響 按3%的接種量將降解菌的接種液接入到四環(huán)素濃度為50 mg/L的篩選培養(yǎng)基中，調(diào)節(jié)初始pH到7.0，在溫度為25℃，150 r/min搖床上黑暗培養(yǎng)，每個(gè)樣品重3次，在培養(yǎng)第2、4、6、8、10、12和14 d 后對(duì)菌株生長(zhǎng)量和四環(huán)素的降解率分別進(jìn)行測(cè)定。

1.2.8 降解菌的耐藥基因研究 選取兩種常見(jiàn)的四環(huán)素耐藥基因tet（D）和tet（E）［17］對(duì)降解菌進(jìn)行耐藥檢測(cè)。耐藥基因引物由上海權(quán)陽(yáng)生物科技公司合成。利用試劑盒提取降解菌基因組，以基因組DNA為模板進(jìn)行目的片段的擴(kuò)增。PCR產(chǎn)物電泳回收后送樣測(cè)序。四環(huán)素耐藥基因tet（D）和tet（E）的引物序列［17］見(jiàn)表1。

表1 四環(huán)素耐藥基因引物序列

2 結(jié)果

2.1 四環(huán)素降解菌的篩選、形態(tài)特征及生理生化特性

富集、分離純化過(guò)后得到6株能夠降解四環(huán)素的菌株，選取其中降解效果較好的菌株XY-1做進(jìn)一步研究。菌株XY-1在單一碳源培養(yǎng)基平板上的菌落呈圓形、白色、不透明、邊緣整齊、表面粘稠。在掃描電鏡下為短桿狀，無(wú)芽孢（圖1）。生理生化鑒定結(jié)果（表2）顯示，為革蘭氏陰性菌，淀粉水解、接觸酶、葡萄糖、尿素、V.P、硝酸鹽還原為陽(yáng)性，過(guò)氧化氫酶、氧化酶、M.R、明膠液化等為陰性。

2.2 四環(huán)素降解菌XY-1的16S rDNA序列分析及遺傳學(xué)分析

菌株16S rDNA片段經(jīng)PCR擴(kuò)增，瓊脂糖凝膠電泳驗(yàn)證后，由測(cè)序公司完成測(cè)序工作。獲得16S rDNA的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度為1 381 bp，將其序列輸入GenBank后，用BLAST軟件比對(duì)分析序列同源性，在MEGA6.0軟件中對(duì)同源性較近的細(xì)菌繪制系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)（圖2）。綜合菌株形態(tài)特征、生理生化鑒定及16S rDNA序列分析［18］得出四環(huán)素降解菌XY-1在分子系統(tǒng)發(fā)育分類上屬于拉烏爾菌屬（Raoultellasp.），與植生拉烏爾菌（Raoultella planticola）相似度為99%，將其命名為Raoultellasp.XY-1。

圖1 掃描電子顯微鏡下XY-1的形態(tài)

表2 菌株XY-1的生理生化特性

2.3 HPLC法檢測(cè)四環(huán)素殘留量

本實(shí)驗(yàn)選用了含有EDTA的弱酸性溶劑0.1 mol/L EDTA-Mcllvaine緩沖液（pH 4.0）作為提取溶劑，提取效果好。對(duì)四環(huán)素標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行全波長(zhǎng)紫外掃描，發(fā)現(xiàn)四環(huán)素在360 nm處有一個(gè)吸收峰，經(jīng)HPLC檢測(cè)，基線平穩(wěn)，峰形較好，所以選擇360 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

HPLC檢測(cè)四環(huán)素系列濃度標(biāo)準(zhǔn)液結(jié)果見(jiàn)表3。四環(huán)素標(biāo)準(zhǔn)品的相對(duì)保留時(shí)間為13.75 min，利用四環(huán)素的系列濃度為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行相關(guān)性分析之后得出四環(huán)素回歸方程y=94.186x-327.46，相關(guān)系數(shù)R2=0.995 2。結(jié)果表明四環(huán)素進(jìn)樣濃度與峰面積有良好的線性關(guān)系，滿足四環(huán)素定量分析要求，符合檢測(cè)條件。

表3 四環(huán)素的峰面積

空白培養(yǎng)基中四環(huán)素在10、40 mg/L兩個(gè)濃度下的回收測(cè)定結(jié)果，見(jiàn)表4。在兩個(gè)濃度下的平均回收率分別為87.86%和91.92%，變異系數(shù)為1.45%和1.43%。

2.4 培養(yǎng)溫度對(duì)四環(huán)素降解菌XY-1的生長(zhǎng)及其降解四環(huán)素的影響

表4 培養(yǎng)基中的四環(huán)素回收率

降解菌XY-1的生長(zhǎng)受溫度影響較大，在20℃和40℃時(shí)生長(zhǎng)量很低，僅為3.2×109和1.8×109，25℃左右時(shí)生長(zhǎng)量最高，活性最好，細(xì)菌濃度為6.63×109。降解菌XY-1的降解率在20℃-25℃之間隨著溫度的升高而升高，在25℃時(shí)四環(huán)素的降解率達(dá)到70.68%，在25℃-40℃之間先保持平穩(wěn)最后緩慢降低（圖3）。由于四環(huán)素在高溫下結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定易于水解，加速了降解，所以在30-40℃之間降解率并沒(méi)有隨著菌體數(shù)量大幅度下降而顯著降低。結(jié)合菌株的生長(zhǎng)情況，選擇25℃為適宜的培養(yǎng)溫度。

圖3 溫度對(duì)降解菌XY-1的生長(zhǎng)及降解四環(huán)素的影響

2.5 初始pH對(duì)四環(huán)素降解菌XY-1的生長(zhǎng)及其降解四環(huán)素的影響

適當(dāng)?shù)膒H值既能保證微生物的生長(zhǎng)速度，也能保證其降解酶的活性。本實(shí)驗(yàn)中當(dāng)pH為5和9時(shí)菌株的生長(zhǎng)受到明顯抑制，細(xì)菌濃度分別為2.7×109和3.8×109，pH為7時(shí)菌株生長(zhǎng)最旺盛，細(xì)菌濃度為6.6×109，此時(shí)降解率也最高，達(dá)到70.68%，得出pH值對(duì)降解菌XY-1的生長(zhǎng)及降解率的影響都呈現(xiàn)先增長(zhǎng)后下降的趨勢(shì)（圖4）。分析是由于四環(huán)素在堿性條件下不穩(wěn)定，易發(fā)生C環(huán)破壞，所以出現(xiàn)了降解率降低的速率沒(méi)有菌體數(shù)量減少快的情況。所以選擇初始pH值為7時(shí)菌株生長(zhǎng)量最大且四環(huán)素降解最快。

2.6 培養(yǎng)時(shí)間對(duì)四環(huán)素降解菌XY-1的生長(zhǎng)及其四環(huán)素降解的影響

圖4 pH對(duì)降解菌XY-1的生長(zhǎng)及降解四環(huán)素的影響

在以四環(huán)素為單一碳源的培養(yǎng)基中降解菌XY-1的生長(zhǎng)在第4天進(jìn)入對(duì)數(shù)期，第8天生物量達(dá)到6.7×109，隨后進(jìn)入穩(wěn)定期。對(duì)四環(huán)素的降解率隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)而增長(zhǎng)，在第8天之前降解率增長(zhǎng)顯著，第8 天的降解率達(dá)到70.68%，8 d以后略有增長(zhǎng)，趨于平穩(wěn)，增長(zhǎng)速率大大降低（圖5）。因此，綜合考慮選擇第8天測(cè)量數(shù)據(jù)來(lái)衡量菌株生長(zhǎng)及降解率比較合理。

圖5 培養(yǎng)時(shí)間對(duì)降解菌XY-1的生長(zhǎng)及降解四環(huán)素的影響

2.7 降解菌XY-1耐藥基因的PCR擴(kuò)增

本研究通過(guò)PCR擴(kuò)增、電泳驗(yàn)證、切膠回收及送樣測(cè)序，最終在四環(huán)素降解菌Raoultellasp.XY-1中檢測(cè)到了耐藥基因tet（D）和tet（E）（圖6），序列長(zhǎng)度分別為1 161 bp和778 bp，使得該菌株表現(xiàn)出強(qiáng)的耐受性。已被國(guó)內(nèi)外報(bào)道并命名過(guò)的四環(huán)素耐藥基因有幾十種，多數(shù)為tet耐藥基因，還有的是otr耐藥基因。按照耐藥性機(jī)制的不同分為外排泵機(jī)制、核糖體保護(hù)機(jī)制、基因修飾或鈍化四環(huán)素分子的酶降解機(jī)制和其他機(jī)制。而tet（D）和tet（E）基因就屬于外排泵機(jī)制，負(fù)責(zé)編碼膜相關(guān)蛋白，可以將四環(huán)素分子排出細(xì)胞外，降低了細(xì)胞內(nèi)的濃度保護(hù)了胞內(nèi)的核糖體，避免四環(huán)素藥物的作用影響，從而產(chǎn)生耐藥性。

圖6 tet（D）和tet（E）基因PCR鑒定結(jié)果

3 討論

隨著獸藥、農(nóng)藥等長(zhǎng)期大量施用四環(huán)素類抗生素，殘留四環(huán)素在環(huán)境中降解、遷移，最終對(duì)環(huán)境生物造成的影響和對(duì)人類健康構(gòu)成的威脅越來(lái)越多，利用降解菌降解抗生素殘留物是目前最為經(jīng)濟(jì)有效的方法，因此發(fā)掘新的四環(huán)素高效降解菌對(duì)于去除四環(huán)素類抗生素在環(huán)境中的殘留，保障人們的身體健康，提高環(huán)境質(zhì)量，保護(hù)生態(tài)平衡及對(duì)畜牧業(yè)的可持續(xù)發(fā)展均具有重要的科學(xué)意義和應(yīng)用價(jià)值。

本研究篩選到一株能降解四環(huán)素的拉烏爾菌Raoultellasp.XY-1。2001年，Olson等學(xué)者［19］成立了拉烏爾菌屬，包括解鳥(niǎo)氨酸拉烏爾菌、植生拉烏爾菌和土生拉烏爾菌3個(gè)種屬。據(jù)報(bào)道該屬中某些菌具有產(chǎn)生表面活性劑的能力［20］，表面活性劑可以增加污染物的傳遞速率［21］；葛超榮等［22］也分離出2株能夠產(chǎn)KPC酶的植生拉烏爾菌，都能耐受多種藥物。根據(jù)國(guó)內(nèi)外報(bào)道，已有一些能降解四環(huán)素類抗生素的微生物，例如Huang［23］從生產(chǎn)四環(huán)素的藥渣中分離得到一株能夠降解四環(huán)素的酵母菌Trichosporon mycotoxinivoransXPY-10；王志強(qiáng)等［24］篩選出土霉素降解菌蠟樣芽孢桿菌；馬志強(qiáng)等［25］篩選到一株無(wú)丙二酸檸檬酸桿菌，該菌對(duì)藥渣中殘留四環(huán)具有高效降解作用；許曉玲等［26］篩選到2株四環(huán)素降解菌株，分別為缺陷短波單胞菌和人蒼白桿菌等，總體而言并不多，有關(guān)拉烏爾菌降解四環(huán)素的研究還未見(jiàn)報(bào)道。本研究首次發(fā)現(xiàn)拉烏爾菌屬Raoultellasp.XY-1可以高效降解四環(huán)素，其降解率在70%以上，說(shuō)明它是一種非常有潛力的微生物菌種資源。

培養(yǎng)溫度、初始pH及培養(yǎng)時(shí)間對(duì)四環(huán)素降解菌XY-1的生長(zhǎng)和降解率都有顯著影響，在25℃左右時(shí)生長(zhǎng)量最高，活性最好，降解率達(dá)到最高70.68%。趙永斌等［27］研究了四環(huán)素類抗生素降解菌木糖氧化無(wú)色桿菌和枯草芽孢桿菌對(duì)四環(huán)素的降解率受溫度的影響情況，也發(fā)現(xiàn)隨溫度升高其降解率先升高然后保持平穩(wěn)最后緩慢降低的趨勢(shì)，且在最佳溫度下菌株對(duì)四環(huán)素類抗生素的降解率在68%左右。本研究還發(fā)現(xiàn)pH對(duì)降解菌XY-1的生長(zhǎng)及降解率的影響都呈現(xiàn)先增長(zhǎng)后下降的趨勢(shì)，pH值為7時(shí)菌株生長(zhǎng)量最大且四環(huán)素降解最快。于浩等［28］研究畜禽糞便無(wú)害化處理中高效降解菌短波單孢菌對(duì)四環(huán)素類抗生素土霉素的降解率亦隨pH值呈現(xiàn)先增大再降低的趨勢(shì)，且pH為7是其最適pH，與本文研究得出的結(jié)果相一致。降解菌XY-1對(duì)四環(huán)素的降解率在第8d時(shí)達(dá)到70.68%，隨后略有增長(zhǎng)再趨于穩(wěn)定，呈現(xiàn)出隨培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)先增大后平穩(wěn)的變化趨勢(shì)與Leng等［29］研究四環(huán)素高效降解菌嗜麥芽窄食單胞菌隨時(shí)間的降解率趨勢(shì)類似。

抗生素的微生物降解是指在微生物作用下，將抗生素殘留物從大分子化合物降解為小分子化合物，最后生成CO2和H2O，實(shí)現(xiàn)對(duì)環(huán)境污染的無(wú)害化處理。由于降解抗生素的細(xì)菌首先需要在抗生素存在條件下存活才能發(fā)揮其降解作用，所以能夠?qū)股仄鸾到庾饔玫?，大多是耐藥?xì)菌［30］。許多抗生素含有易水解的敏感化學(xué)鍵（如酯健和酰胺鍵），而耐藥菌通常含有消除這些脆弱化學(xué)鍵的酶，可以直接破壞和修飾抗生素，從而摧毀這些抗生素的活性。本研究在Raoultellasp.XY-1中首次檢測(cè)到了2種四環(huán)素耐藥基因tet（D）和tet（E），說(shuō)明該菌具有對(duì)四環(huán)素耐藥的分子基礎(chǔ)，使其具備了降解四環(huán)素的前提和可能性，有助于在分子水平上進(jìn)一步探究Raoultellasp.XY-1對(duì)四環(huán)素的降解轉(zhuǎn)化機(jī)制。

4 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)從利用四環(huán)素類抗生素作為飼料添加劑的養(yǎng)豬廠底泥中篩選獲得一株能夠高效降解四環(huán)素的細(xì)菌XY-1，經(jīng)鑒定為Raoultellasp.XY-1。當(dāng)該菌株在四環(huán)素濃度為50 mg/L時(shí)，溫度為25℃、初始pH為7的單一碳源培養(yǎng)基中，暗培養(yǎng)8 d時(shí)細(xì)菌生長(zhǎng)量最大且四環(huán)素降解率最高達(dá)70.68%。首次在該菌中檢測(cè)到2種四環(huán)素耐藥基因tet（D）和tet（E）。

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