普洱茶抑肥降脂作用比較研究

熊昌云，楊 彬，彭遠(yuǎn)菊，閆 剛，何普明(.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)熱帶作物學(xué)院，云南 普洱 665000；.浙江大學(xué)茶葉研究所，浙江 杭州 30058)

【研究意義】肥胖癥是人類(lèi)社會(huì)物質(zhì)生活水平達(dá)到一定階段所呈現(xiàn)出來(lái)的一種典型病癥，當(dāng)人體攝入熱量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)消耗的熱量時(shí)，多余的熱量主要以脂肪形式存儲(chǔ)于人體的脂肪組織、肝臟、腹部等器官或部位，引起肥胖癥的發(fā)生，一般在缺乏運(yùn)動(dòng)的職業(yè)群體中比較常見(jiàn)。肥胖不僅影響形體美觀(guān)，還影響人的身心健康，并且它還會(huì)引起嚴(yán)重的并發(fā)癥，比如冠心病、充血性心力衰竭、腦梗塞等心血管疾?。桓哐?、高血壓、高血脂、血管栓塞等代謝類(lèi)疾??；嚴(yán)重時(shí)還會(huì)成為導(dǎo)致呼吸暫停綜合癥及部分癌癥發(fā)病的罪魁禍?zhǔn)譡1-2]。隨著人類(lèi)生活水平的不斷提升，飲食方式和膳食結(jié)構(gòu)的日益豐富，人們?nèi)粘z入的營(yíng)養(yǎng)過(guò)剩較為嚴(yán)重，同時(shí)由于缺乏足夠的身體鍛煉，導(dǎo)致體內(nèi)脂肪類(lèi)物質(zhì)的蓄積，從而引起肥胖癥的發(fā)生和發(fā)病，尤其是發(fā)展中國(guó)家的肥胖癥發(fā)病率日益上升，預(yù)防和治療肥胖癥已成為21世紀(jì)全球關(guān)注的普通健康問(wèn)題[3-4]。【前人研究進(jìn)展】普洱茶按照加工工藝及品質(zhì)特征不同可分為普洱茶(生茶)和普洱茶(熟茶)，普洱生茶是指以云南省地理保護(hù)標(biāo)志范圍內(nèi)的云南大葉種茶樹(shù)鮮葉經(jīng)殺青、揉捻、日光曬干等工藝制成的曬青毛茶，經(jīng)精制蒸壓成型干燥后包裝而成；普洱熟茶是以云南大葉種曬青毛茶為原料，經(jīng)適度潮水渥堆發(fā)酵形成半成品茶后篩分形成不同級(jí)號(hào)散茶，再經(jīng)蒸壓形成磚、餅、沱等成型茶[5-6]。研究認(rèn)為，普洱茶具有降脂減肥功效主要是因?yàn)槠斩柚械挠行С煞?如EGCG)能影響試驗(yàn)動(dòng)物對(duì)食物的攝取量及食物的利用效率，改善血脂(甘油三酯、膽固醇、血清瘦素、高密度脂蛋白)水平，同時(shí)能夠通過(guò)加速脂肪氧化，增加脂肪排泄及促進(jìn)機(jī)體能量消耗來(lái)抑制體重的增加[7-9]；對(duì)低密度脂蛋白(LDL)氧化的抑制[10]；通過(guò)下調(diào)大鼠肝臟細(xì)胞中PI3K/AKt和JNK信號(hào)通路來(lái)抑制脂肪酸合成酶(FAS)的表達(dá)來(lái)抑制大鼠體重，TC和TG的增加[11]；對(duì)HepG2細(xì)胞中膽固醇合成能力的抑制作用[12]。這些研究大部分以普洱茶的減肥效果為主，對(duì)抑制肥胖的研究不多，且都停留在數(shù)據(jù)推測(cè)或體外細(xì)胞試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，而對(duì)于利用普洱茶產(chǎn)品直接作為飼料作用于試驗(yàn)動(dòng)物研究其抑肥降脂作用的研究較為缺乏?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】本研究以造模成功的營(yíng)養(yǎng)性肥胖大鼠為試驗(yàn)對(duì)象，研究喂飼含有普洱生茶和普洱熟茶飼料后，與未喂飼含茶飼料的營(yíng)養(yǎng)肥胖性大鼠在體重增長(zhǎng)及血清、肝臟等指標(biāo)的變化趨勢(shì)對(duì)比，分析普洱生茶和熟茶抑制肥胖及降低血脂的作用。【擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題】比較普洱生茶與普洱熟茶的抑肥降脂作用，并簡(jiǎn)要分析其作用機(jī)理，對(duì)合理開(kāi)發(fā)具有保健功能的普洱茶新產(chǎn)品有重要的參考價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料與儀器設(shè)備

1.1.1 試驗(yàn)材料 試驗(yàn)材料為同一產(chǎn)地不同生產(chǎn)日期的普洱茶，包括2年普洱生茶(2015年生產(chǎn))、7年普洱生茶和7年普洱熟茶(2010年同一原料生產(chǎn))，3種茶樣均來(lái)源于云南省普洱市同一片茶園的鮮葉原料加工。干茶茶葉粉碎后過(guò)40目篩，與營(yíng)養(yǎng)飼料混合攪拌均勻制成含茶5 %的供試茶葉飼料。

1.1.2 試驗(yàn)設(shè)備及試劑 BECKMAN高速冷凍離心機(jī)，HH-6 數(shù)顯恒溫水浴鍋，DY 89-Ⅱ型電動(dòng)玻璃勻漿機(jī)，UV757CRT紫外分光光度計(jì)，DW-86-L596超低溫冰箱，電子分析天平、醫(yī)用解剖設(shè)備等。

甘油三酯、總膽固醇、高(低)密度脂蛋白指標(biāo)采用試劑盒測(cè)定。

1.2 動(dòng)物試驗(yàn)方法

1.2.1 試驗(yàn)動(dòng)物 50只清潔級(jí)SD(Sprague-Dawley) 雄性大鼠，實(shí)驗(yàn)前體重范圍(84±8)g。

1.2.2 飼料的配比 動(dòng)物基礎(chǔ)飼料主要成分：大麥粉20 %、脫水菜(苜蓿粉)20 %、麩皮16 %、玉米粉16 %、魚(yú)粉10 %、豆粉10 %、骨粉5 %、食鹽2 %、酵母1 %[4]。高脂營(yíng)養(yǎng)飼料配方：基礎(chǔ)飼料80 %、蛋黃粉10 %、豬油10 %。 試驗(yàn)用高脂營(yíng)養(yǎng)飼料按營(yíng)養(yǎng)飼料(95 %)，2年普洱生茶粉碎樣(5 %)、7年普洱生茶粉碎樣(5 %)、7年普洱熟茶(5 %)分別配制，攪拌機(jī)拌勻后冷藏備用(0～4 ℃)。

1.2.3 試驗(yàn)方法 供試SD大鼠造模，適應(yīng)試驗(yàn)環(huán)境1周后，將大鼠隨機(jī)分為2組，其中空白對(duì)照組(Normal group，NG)8只選用基礎(chǔ)飼料喂飼，其余用于造模組(Fat molding group，F(xiàn)MG)喂飼配好的高脂營(yíng)養(yǎng)飼料，以周?chē)鷨挝挥涗洿笫蟮捏w重變化。造模成功后，按大鼠體重隨機(jī)分成4組(每組8～10只)，分別為模型對(duì)照組(Modal group，MG)，7年普洱生茶組(7 year pu-er raw tea group，7PRG)，7年普洱熟茶組(7 year pu-er ripe tea group，7PEG)和2年普洱生茶組(2 year pu-er raw tea group，2PRG)等試驗(yàn)組。試驗(yàn)期間隔天記錄大鼠體重1次，計(jì)算每組動(dòng)物的食物消耗量及利用率。試驗(yàn)結(jié)束禁食12 h后斷頭取血，利用低溫高速冷凍離心機(jī)離心，條件為轉(zhuǎn)速2000 r/min，4 ℃下離心15 min，分離出的血清在超低溫冷凍冰箱中冷凍保存；用醫(yī)用剪刀小心剪取試驗(yàn)大鼠肝臟，睪丸及腎周脂肪，稱(chēng)重后冷凍保存，同時(shí)對(duì)比觀(guān)察各試驗(yàn)組大鼠體內(nèi)肝、腎、脾等主要臟器形態(tài)特征，分析不同試驗(yàn)條件下大鼠體能主要臟器的變化情況[13]。

1.3 相關(guān)指標(biāo)的測(cè)定

總膽固醇、甘油三酯、高、低密度脂蛋白等采用試劑盒法測(cè)定；肝臟指標(biāo)按文獻(xiàn)的方法測(cè)定；脂肪系數(shù))、動(dòng)脈粥樣硬化指數(shù)(AI)及食物利用率按常規(guī)方法測(cè)定[13-15]。

1.4 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果與分析

2.1 造模試驗(yàn)結(jié)果

試驗(yàn)結(jié)果表明，造模試驗(yàn)中大鼠體重增加明顯，造模組(FMG)大鼠平均體重與空白組(NG)大鼠平均體重差異達(dá)到了極顯著(P≤0.01)。雖然造模組大鼠總的攝食量有明顯下降，但食物利用率則顯著增加，表明所配置的高脂營(yíng)養(yǎng)飼料對(duì)促進(jìn)大鼠肥胖有明顯作用，造模成功(表1)。

2.2 大鼠體重、攝食量及食物利用率變化分析

判定一種物質(zhì)是否具有抑肥效果可以通過(guò)試驗(yàn)大鼠體重的減輕或其對(duì)體重增速的抑制來(lái)分析[4,16]。本試驗(yàn)中，2PRG、7PRG和7PEG大鼠體重的增重趨勢(shì)及最終體重與MG相比均有顯著性差異(圖1，表2)，其中7PEG大鼠最終體重最輕，增重趨勢(shì)最緩，且7PRG和7PEG大鼠體重與NG比較無(wú)顯著性差異。本試驗(yàn)的結(jié)果說(shuō)明3種普洱茶原料均有顯著抑肥降脂效果，其中貯藏時(shí)間較長(zhǎng)的普洱生(熟)茶(7PRG、7PEG)抑肥效果均優(yōu)于貯藏時(shí)間較短的普洱生茶(2PRG)。

表1 試驗(yàn)造模大鼠體重變化Table 1 Body weight of experiment molding rats

注：“**”表示在差異極顯著(P<0.01)。

Note: ** indicated a significant difference atP<0.01.

大鼠體重變化也可以從期攝食量和食物利用率等方面來(lái)分析。從試驗(yàn)的結(jié)果分析得出，在攝食量沒(méi)有顯著差異的情況下，不同處理大鼠在試驗(yàn)期間對(duì)食物的利用率有比較明顯的區(qū)別，模型組大鼠對(duì)食物的利用率最高達(dá)到了9.50 %，平均體重增加最多，而普洱生茶組(7PRG)和普洱熟茶組(7PEG)大鼠對(duì)食物的利用率則顯著下降，試驗(yàn)大鼠體重的減輕與是否減少攝食量并沒(méi)有直接的相關(guān)性，主要是受食物利用率的影響(表2)。

圖1 試驗(yàn)大鼠體重變化趨勢(shì) Fig.1 Body weight of experiment rats

表2 試驗(yàn)期間大鼠體重、攝食量和食物利用率比較 Table 2 Body weight, food intake and food utilizing rate of rats during experiment

注：“*”表示與模型組比差異顯著(P<0.05)，“**”表示差異極顯著(P<0.01)；“#”表示與空白組比較差異顯著(P<0.05)，“##”表示差異極顯著(P<0.01)。 下同。

Note:*P<0.05, **P<0.01 indicated a significant difference with modal group； #P<0.05,##P<0.01 indicated a significant difference with normal group. The same as below.

表3 試驗(yàn)大鼠脂肪重和脂肪系數(shù)分析Table 3 Analysis on fat weight and fat coefficient of experiment rats

表4 試驗(yàn)大鼠血脂指標(biāo)分析Table 4 Analysis on serum level index of experiment rats

表5 試驗(yàn)大鼠肝臟血脂指標(biāo)分析Table 5 Analysis on liver lipid level of experiment rats

2.3 大鼠脂肪相關(guān)指標(biāo)分析

模型組大鼠體內(nèi)總脂肪重與空白組有顯著性差異，表明喂飼高脂營(yíng)養(yǎng)飼料對(duì)大鼠體內(nèi)脂肪堆積有顯著作用，而在高脂營(yíng)養(yǎng)飼料中添加了一定比例的普洱茶粉后則能有效改善大鼠體內(nèi)的脂肪指標(biāo)。與模型組相比，7PRG和7PEG組大鼠體內(nèi)總脂肪重明顯減少，與空白組大鼠體內(nèi)總脂肪重?zé)o明顯差異，表明普洱生茶、熟茶均對(duì)大鼠有顯著的抑肥效果。另一方面，大鼠體內(nèi)脂肪的多少及大鼠肥胖程度也可以用脂肪系數(shù)來(lái)判定，表3的數(shù)據(jù)表明，喂飼含有普洱茶粉高脂飼料的大鼠脂肪系數(shù)都低于模型組大鼠，基本接近于空白組的水平，表明普洱茶能較好的調(diào)節(jié)脂肪指標(biāo)水平。

2.4 大鼠血清、肝臟指標(biāo)分析

一般情況下，血脂水平升高是肥胖癥患者的典型特征。表4的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，模型組大鼠TC總含量增加明顯，與空白組相比達(dá)到了極顯著差異，同時(shí)TG含量也有明顯的升高；而HDL-C含量則有一定的下降，表明大鼠營(yíng)養(yǎng)性肥胖與喂飼高脂營(yíng)養(yǎng)飼料有直接對(duì)應(yīng)關(guān)系。而在喂飼的高脂飼料中加入一定含量普洱茶粉之后，試驗(yàn)大鼠的TC、TG含量增長(zhǎng)趨勢(shì)均能得到有效控制并逐漸下降到正常水平，甚至其血脂指標(biāo)水平還好于空白組，而且從表中的數(shù)據(jù)可以看出，普洱茶減低大鼠體內(nèi)TG含量的效果要優(yōu)于TC。

高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)一種抗動(dòng)脈粥樣硬化的血漿脂蛋白，是冠心病的保護(hù)因子，被業(yè)內(nèi)人士稱(chēng)為人體內(nèi)的“好膽固醇”，它通過(guò)將血管中的膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)到肝臟中代謝并排除體外，從而防止血管壁上膽固醇的沉積，有效防止心臟病和其他心血管疾??；與之對(duì)應(yīng)的低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)則是致動(dòng)脈粥樣硬化的危險(xiǎn)因素，HDL-C 和LDL-C含量比例一般用致動(dòng)脈粥樣硬化指數(shù)(AI)來(lái)表示，可以用來(lái)判斷動(dòng)脈粥樣硬化的程度[4,6]。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)(表4)表明，與模型組相比，喂飼含普洱茶粉的大鼠HDL-C含量提高明顯，LDL-C含量則顯著下降，均達(dá)到了極顯著差異(P<0.01)，尤其是7PEG組大鼠LDL-C含量指標(biāo)已優(yōu)于空白組。此外，模型組大鼠的AI值(2.02)已超過(guò)正常組AI值(0.49)的4倍，說(shuō)明長(zhǎng)期喂飼高脂飼料會(huì)增加大鼠罹患動(dòng)脈粥樣硬化病的幾率；而喂飼添加普洱茶粉的試驗(yàn)大鼠AI值則明顯降低，表明普洱茶能提高大鼠HDL-C含量水平，改善AI指標(biāo)，從而降低動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生率。試驗(yàn)大鼠肝臟指標(biāo)(表5)的試驗(yàn)結(jié)果與血清指標(biāo)基本一致，表明普洱茶可以通過(guò)提高大鼠體內(nèi)HDL-C含量，同時(shí)降低TC、TG、LDL-C含量來(lái)改善大鼠的血清、肝臟血脂等指標(biāo)比例，達(dá)到抑制大鼠肥胖的目的。

3 討 論

隨著人類(lèi)生活水平的提高，肥胖已經(jīng)成為全球性的、普遍關(guān)注的健康問(wèn)題，目前市場(chǎng)流行的各類(lèi)減肥藥也由于其越來(lái)越多的副作用受到廣泛的質(zhì)疑，開(kāi)發(fā)新型無(wú)毒無(wú)副作用的減肥產(chǎn)品將是大勢(shì)所趨。普洱茶作為一種天然飲品，其獨(dú)特的抑肥減肥、降血脂、降血糖等功效及無(wú)毒無(wú)副作用的特點(diǎn)引起了社會(huì)各界的廣泛關(guān)注并開(kāi)展了相關(guān)的研究。Kuan-Li Kuo. et al(2005)[8]、Wang B. et al (2008)[9]、Hou Y. et al (2009)[10]等學(xué)者先后研究了普洱茶的降脂減肥效果，認(rèn)為普洱茶能通過(guò)調(diào)節(jié)機(jī)體的血脂水平，提高高密度脂蛋白膽固醇的含量，減低總膽固醇(含低密度脂蛋白膽固醇)和甘油三酯含量，從而有效預(yù)防高脂血癥和動(dòng)脈粥樣硬化、減低患心血管疾病的危險(xiǎn)，其中普洱熟茶的作用效果顯著優(yōu)于降血脂藥、烏龍茶和未發(fā)酵的綠茶。本研究的結(jié)果也表明，不同加工工藝和品質(zhì)特征的普洱茶中，人工發(fā)酵的普洱熟茶抑肥降脂、抗動(dòng)脈粥樣硬化效果要優(yōu)于同種原料加工的普洱生茶，普洱熟茶的作用效果要優(yōu)于普洱生茶，與前人的研究結(jié)果基本一致。關(guān)于茶葉的抑肥降脂作用機(jī)理研究中，Chiang C. et al在2006年的研究認(rèn)為普洱茶的降脂減肥作用主要是通過(guò)下調(diào)大鼠肝臟細(xì)胞中PI3K/AKt和JNK信號(hào)通路來(lái)抑制脂肪酸合成酶(FAS)的表達(dá)，從而有效抑制大鼠體重，TC和TG的增加[11]。Lu CH. et al 在2008年的研究則認(rèn)為普洱茶多酚類(lèi)物質(zhì)量對(duì)HepG2細(xì)胞中膽固醇合成能力有抑制作用，認(rèn)為在B環(huán)上有沒(méi)食子?；Y(jié)構(gòu)的兒茶素有更強(qiáng)的抑制膽固醇合成的能力[12]，普洱茶可以通過(guò)抑制膽固醇的合成來(lái)達(dá)到降脂減肥的目的。但這些研究大部分都停留在數(shù)據(jù)推測(cè)或體外細(xì)胞試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，關(guān)于普洱茶對(duì)動(dòng)物體內(nèi)脂肪代謝及其抑肥降脂作用機(jī)理還有待于進(jìn)一步的研究。

4 結(jié) 論

普洱茶生茶、熟茶均對(duì)營(yíng)養(yǎng)性肥胖大鼠有抑肥降脂作用，能顯著改善大鼠的各項(xiàng)肥胖指標(biāo)，其綜合作用效果順序?yàn)?年普洱熟茶>7年普洱生茶>2年普洱生茶。

參考文獻(xiàn)：

[1]Labib M. The investigation and management of obesity [J]. J Clin Pathol, 2003, 56(1): 17-25.

[2]熊昌云，彭遠(yuǎn)菊，王興華，等.普洱茶不同溶劑提取組分降脂減肥作用的比較研究[J].茶葉科學(xué),2012,32(6): 543-551.

[3]Grundy S M. Multifactorial causation of obesity: implications for prevention [J]. Am J Clin Nutr, 1998, 67 (suppl 3): 563S-572S.

[4]熊昌云.普洱茶降脂減肥功效及作用機(jī)理研究[D].浙江大學(xué)博士學(xué)位論文，2012: 1,48-51.

[5]中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局，中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì). GB/T22111-2008,地理標(biāo)志產(chǎn)品 普洱茶[S]. 北京，中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2008.

[6]秦廷發(fā),邵宛芳, 肖 蓉,等. 普洱茶對(duì)Wistar大鼠骨代謝化指標(biāo)的影響[J]. 西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2015,28(3): 1273-1277.

[7]Kao Y H, Chang H H, Lee M J, et al. Tea, obesity and diabetes [J]. Mol Nutr Food Res, 2006, 50(2): 188-210.

[8]Kuan L K, Meng S W, Chun T C, et al. Comparative studies on the hypolipidemic and growth suppressive effects of oolong, black, pu-er, and green tea leaves in rats[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2005, 53(2): 480-489.

[9]Wang B, Yu H M, Chang L, et al. Protective effects of pu-er tea on LDL oxidation and nitric oxide generation in macrophage cells [J]. LWT-Food Science and Technology, 2008, 102(1): 351-360.

[10]Hou Y, Shao W F, Xiao R, et al. Pu-er tea aqueous extracts lower atherosclerotic risk factors in a rat hyperlipidemia model [J]. Experimental Gerontology, 2009, 37(4): 429-434.

[11]Chiang C, Weng M, Lin S S, et al. Pu-er tea supplementation suppresses fatty acid syntheses expression in the rat liver through down regulating Akt and JNK signaling as demonstrated in human hepatoma HepG2 cells[J]. Oncology Research, 2006, 16(3): 119-128.

[12]Lu C H, Wang L S. Polyphenol contents of pu-er teas and their abilities to inhibit cholesterol biosynthesis in HepG2 cell line [J]. Food Chemistry, 2008, 1216(15): 3223-3231.

[13]曾 濤,謝克勤,張翠麗,等. 氯仿/甲醇勻漿測(cè)定肝臟甘油三酯含量[J]. 衛(wèi)生研究, 2008,5(37): 550-551.

[14]熊昌云,屠幼英,歐陽(yáng)梅,等.人工接種發(fā)酵茯磚茶降脂減肥作用研究[J]. 菌物學(xué)報(bào), 2011, 30(2): 349-354.

[15]馬向華,戈敏娟. 肥胖類(lèi)型與致動(dòng)脈粥樣硬化因素關(guān)系的臨床研究[J]. 南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版), 2004(2): 156-157.

[16]趙亞華,桑守強(qiáng),余 霜,等. 普洱茶水溶性茶色素降脂減肥作用研究[J]. 西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2014,27(3): 1256-1259.