• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    19份茶樹資源鮮葉中咖啡堿合成酶的活性

    2018-06-05 07:08:22段學(xué)藝高秀兵趙華富胡華健貴州省茶葉研究所貴州貴陽550006
    關(guān)鍵詞:保靖盤縣咖啡堿

    段學(xué)藝,高秀兵,曹 雨,趙華富,張 圓,何 萍,胡華健(貴州省茶葉研究所,貴州 貴陽 550006)

    【研究意義】咖啡堿(1,3,7-三甲基黃嘌呤)是茶葉中嘌呤堿的主體成分[1],約占茶葉干物質(zhì)的2 %~5 %[2]。茶葉咖啡堿具有興奮中樞神經(jīng),改良心臟機(jī)能,提神、醒腦,提高思維效率,增強(qiáng)肝代謝功能等作用,同時(shí)還有利尿、分解脂肪的功效[3-6]。但是過量攝入咖啡堿,會(huì)導(dǎo)致高血壓、心率不齊[7-8],引起鈣流失、骨質(zhì)疏松[9-10]和流產(chǎn)[11-12]等不良反應(yīng)。鑒于茶葉消費(fèi)的廣泛性和咖啡堿藥理作用的復(fù)雜性,GB 2760-2014規(guī)定可樂飲料中咖啡堿最高限量≤150 mg/kg[13],美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)規(guī)定可樂等飲料中咖啡堿≤200 mg/mL[14]。因此,選育低咖啡堿茶樹新品種具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。【前人研究進(jìn)展】自20世紀(jì)80年代開始,國(guó)內(nèi)外一直在進(jìn)行茶葉脫除咖啡堿的研究工作,主要有萃取法、超臨界CO2提取、熱水浸提法和色譜吸附法等方法[15-18]。但是有關(guān)脫除茶葉咖啡堿的系統(tǒng)研究和有效方法較少?!颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】要從根本上降低茶葉咖啡堿,還是要從茶樹育種和栽培學(xué)等研究途徑著手,通過常規(guī)的茶樹育種方法篩選低咖啡堿茶樹新品種[19-22]?!緮M解決的關(guān)鍵問題】選取貴州3種古茶樹資源與16個(gè)選育茶樹品種,提取茶樹嫩葉的咖啡堿合成酶[23];體外進(jìn)行咖啡堿合成的酶促反應(yīng)[24],HPLC測(cè)定反應(yīng)后各體系咖啡堿的含量[25],比較19份茶樹資源的咖啡堿合成酶(TCS)活性,以篩選出咖啡堿合成酶活性低的茶樹資源,為選育低咖啡堿茶樹新品種奠定基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1 茶樹資源

    19份茶樹資源分別為龍井長(zhǎng)葉、龍井、保靖黃金茶、烏牛早、丹桂、盤縣大茶樹、浙農(nóng)、黃金葉、福鼎大白茶、黔湄601、黃金芽、七舍大茶樹、金觀音、鐵觀音、中茶108、晴隆大茶樹、香山早、安吉白茶和梅占,其嫩葉均采摘自貴州省茶葉研究所的種質(zhì)資源圃。

    1.2 咖啡堿合成酶的提取

    將新鮮茶樹嫩葉剪成小片,并立即放入-20 ℃冰箱冷凍1 h。將冷凍嫩葉樣品2 g、聚乙烯吡咯烷酮1.2 g、石英砂0.6 g、100 mmol/L磷酸鉀鹽緩沖液(pH 7.3,含有5 mmol/L巰基乙醇,5 mmol/L EDTA,0.5 %抗壞血酸鈉)10 mL一起加入已冷凍的研缽中進(jìn)行勻漿。勻漿經(jīng)4層紗布過濾后離心(重力加速度為10 000 g,下同)20 min收集上清液,加入固體硫酸銨將上清液調(diào)至20 %(W/V)的飽和度,攪拌20 min后離心15 min繼續(xù)收集上層清液,再加入固體硫酸銨將上清液調(diào)至60 %(W/V)的飽和度,攪拌20 min后離心15 min棄上清液,將沉淀溶于上述磷酸鹽緩沖液中。最后將獲得的蛋白溶液進(jìn)行凝膠層析(葡聚糖凝膠G-25,層析柱規(guī)格為30 cm×2 cm),洗脫劑為10 mmol/L磷酸鉀鹽緩沖液(pH 7.3,含有10 mmol/L巰基乙醇,2 mmol/L EDTA)。以上所有步驟均在4 ℃條件下進(jìn)行。收集到的活性成分即為咖啡堿合成酶粗酶液,各取最先洗脫出的粗酶液1.5 mL,-20 ℃保存?zhèn)溆?,一般?周內(nèi)酶活力下降不顯著。

    1.3 咖啡堿合成酶的體外酶促反應(yīng)及活性檢測(cè)

    取400 μl咖啡堿合成酶粗酶液進(jìn)行體外酶促反應(yīng),反應(yīng)體系:咖啡堿合成酶粗酶液400 μl,1 μmol底物可可堿(theobromine)200 μl,1 μmol甲基供體S-腺苷蛋氨酸(S-adenosy-lL-metionine)50 μl。37 ℃反應(yīng)30 min后加入100 μl濃度為6 mol的HCl終止反應(yīng)。

    高效液相檢測(cè),色譜柱為Syncronis C18(4.6 mm×250 mm,5 μmol);流動(dòng)相為乙腈-水,等度洗脫,洗脫比例為12︰88,檢測(cè)波長(zhǎng)272 nm,流速1.0 mL/min,柱溫30 ℃,進(jìn)樣量均為20 μl。

    反應(yīng)產(chǎn)物用HPLC法進(jìn)行檢測(cè),取配制濃度為14.12 μg/mL的咖啡堿對(duì)照品溶液1、0.5、0.1 μl,進(jìn)行高效液相檢測(cè),制作咖啡堿標(biāo)準(zhǔn)曲線,對(duì)反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行定量。稱取咖啡堿標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(批號(hào):A20N6L6274,含量≥99 %)3.53 mg放入5 mL容量瓶中,用甲醇溶解定容作為儲(chǔ)備液,再取0.5 mL儲(chǔ)備液置于25 mL容量瓶,用甲醇定容,得到14.12 μg/mL 咖啡堿對(duì)照品溶液。

    圖1 咖啡堿標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 The standard curve of caffeine

    2 結(jié)果與分析

    2.1 咖啡堿標(biāo)準(zhǔn)曲線

    從圖1看出,咖啡堿進(jìn)樣質(zhì)量(x)與峰面積(y)的線性方程為y=3621.8x+1.8672,R2=1,表明其線性關(guān)系良好。

    2.2 19份茶樹資源嫩葉中咖啡堿的含量

    從表1看出,七舍大茶樹在體外酶促反應(yīng)終止后咖啡堿含量最高,為0.900 μg/mL;其次是保靖黃金茶,為0.376 μg/mL;第三是黃金葉,為0.210 μg/mL;烏牛早、晴隆大茶樹、龍井茶葉等15份茶樹資源的咖啡堿含量為0.101~0.164 μg/mL,差異不明顯;最低是盤縣大茶樹,為0.089 μg/mL。

    2.3 19份茶樹資源嫩葉中咖啡堿合成酶的活性

    從表2看出,七舍大茶樹嫩葉的咖啡堿合成酶活性最高,為0.386 U/mL;其次是保靖黃金茶,為0.161 U/mL;黃金葉、烏牛早分別為0.090和0.070 U/mL;晴隆大茶樹、龍井長(zhǎng)葉、浙濃為0.043~0.067 U/mL,差異較小;盤縣大茶樹最低,僅0.038 U/mL。

    3 討 論

    茶葉中咖啡堿的含量與茶樹種質(zhì)資源特性有關(guān),同時(shí)也與所處的自然環(huán)境和自身生長(zhǎng)期有關(guān)。不同品種茶葉中咖啡堿的含量差異很大;同一茶樹鮮葉中咖啡堿的合成較多,也是整個(gè)茶葉咖啡堿的主要來源。目前,關(guān)于不同氣候?qū)Σ枞~咖啡堿合成酶活性影響的研究較少,缺乏低咖啡堿茶樹資源適生分布區(qū)的調(diào)研,阻礙了低咖啡堿茶樹品種選育的進(jìn)程。

    表1 茶樹資源嫩葉中咖啡堿合成酶體外酶促反應(yīng)終止后HPLC檢測(cè)結(jié)果Table 1 Caffeine content in tender leaves of 19 tea germplasm resources detected by HPLC after in-vitro enzymatic reaction end of caffeine synthase

    表2 茶樹資源嫩葉中咖啡堿合成酶的酶活Table 2 Caffeine synthase activity in tender leaves of 19 tea germplasm resources

    如何有效降低茶葉中咖啡堿含量一直是茶葉研究的熱點(diǎn)。目前,多采用理化方法在茶葉加工階段進(jìn)行咖啡堿的萃取、吸附、浸提等。雖然理化方法應(yīng)用較早,但不能解決根本問題,且成本較高,不能有效保留茶葉中的香氣和滋味。利用基因工程對(duì)茶樹資源進(jìn)行改造,沉默咖啡堿合成酶中關(guān)鍵酶的基因,即抑制咖啡堿合成酶以及S-腺苷甲硫氨酸(SAM)合成酶基因的表達(dá),可降低茶葉中咖啡堿的含量。但是該法過程復(fù)雜、操作難度高,經(jīng)濟(jì)投入大,且降低咖啡堿的效果也不太理想。常規(guī)的茶樹育種或雜交方法篩選低咖啡堿茶樹新品種能有效降低茶葉的咖啡堿,是從本質(zhì)上降低咖啡堿的方法。但是該法選育低咖啡堿茶樹品種至少需要20 a左右,要耗費(fèi)大量的人力、物力和財(cái)力,且選育出的茶樹品種往往存在綜合性狀不良的缺點(diǎn)。通過收集低咖啡堿茶樹種質(zhì)資源,發(fā)掘品質(zhì)優(yōu)良的茶樹資源,再利用基因工程改造技術(shù)縮短茶樹品種選育時(shí)間,高效率達(dá)到茶葉品質(zhì)優(yōu)良與低咖啡堿的目的。

    在龍井長(zhǎng)葉、龍井、保靖黃金茶等19份茶樹資源中,采自貴州的3份大茶樹資源(七舍大茶樹、晴隆大茶樹、盤縣大茶樹)鮮葉的咖啡堿合成酶活性差異較大,可能主要與各茶樹的種質(zhì)資源特異性有關(guān),或與各自所處的氣候環(huán)境息息相關(guān);其余常見16份茶樹品種鮮葉的咖啡堿合成酶活性差異不大,在0.05 U/mL左右。

    4 結(jié) 論

    研究結(jié)果表明,在龍井長(zhǎng)葉、龍井、保靖黃金茶等19份茶樹資源中,龍井長(zhǎng)葉等其余15種的活性差異不大,在0.043~0.07 U/mL;七舍古茶的咖啡堿合成酶活性最高,為0.386 U/mL;其次是保靖黃金茶、黃金葉,分別為0.161和0.090 U/mL;盤縣古茶的咖啡堿合成酶活性最低,為0.038 U/mL。因此,盤縣古茶樹可作為低咖啡堿新品種的選育材料。

    參考文獻(xiàn):

    [1]FREDHOLM B B.Connection between caffeine,adenosine receptors and dopamine.Coffee reduces the risk of Parkinson disease[J].Lakartidningen,2004(34):2552-2555.

    [2]ASHIH ARA H,SHIMIZU H,TAKEDA Y,et al.Caffeine metabolism in high and low caf feine containing cultivars of Camellia scientist[J].Z Natur Forsch,1995(50):602-607.

    [3]楊 巍.咖啡堿的藥理作用與開發(fā)利用前景[J].茶葉科學(xué)技術(shù),2006(4):9-11.

    [4]SMITH A.Effects of caffeine on human behavior[J].Food and Chemical Toxicology,2002(9):1243-1255.

    [5]PEELING P,DAWSON B.Influence of caffeine ingestion on perceived mood states,concentration,and arousal levels during a 75-min university lecture[J].Advances in Physiology Education,2007(4):332-335.

    [6]BRUNYé T T,MAHONEY C R,LIEBERMAN H R,et al.Caffeine modulates attention network function[J].Brain and Cognition,2010(2):181-188.

    [7]ROBERTSON D,F(xiàn)ROLICH J C,CARR R K,et al.Effects of caffeine on plasma renin activity,catecholamines and blood pressure[J].New England Journal of Medicine,1978,22(6):548-549.

    [8]MONTES F R,CABRERA M,DELGADILLO A,et al.The role of potassium channels in the vasodilatory effect of caffeine in human internal mammol/Lary arteries[J].Vascular Pharmacology,2009(50):132-136.

    [9]TSUANG Y H,SUN J S,CHEN L T,et al.Direct effects of caffeine on osteoblastic cells metabolism:the possible causal effect of caffeine on the formation of osteoporosis[J].Journal of Orthopaedic Surgery and Research,2006(7):1-7.

    [10]HALLSTROM T,WOLK A,GLYNN A,et al.Coffee,tea and caffeine consumption in relation to osteoporotic fracture risk in a cohort of Swedish women[J].Osteoporosis International,2006(7):1055-1064.

    [11]SOELLNER D E,GRANDYS T,NUEZ J L.Chronic prenatal caffeine exposure impairs novel object recognition and radial arm maze behaviors in adult rats[J].Behavioural Brain Research,2009(1):191-199.

    [12]WENG X P,ODOULI R,LI D K.Maternal caffeine consumption during pregnancy and the risk of miscarriage:a prospective cohort study[J].Obstetric Anesthesia Digest,2008(4):229-230.

    [13]THOMASPN.Log-linear trees:models of market structure in rand switching data[J].Journal of Marketing Research,1993(3):267-287.

    [14]趙 卉,杜 曉.低咖啡堿茶的研究進(jìn)展[J].華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2008(4):564-568.

    [15]胡秋輝.茶葉中咖啡堿和茶多酚類提取技術(shù)研究初報(bào)[J].茶業(yè)通報(bào),1996(4):22-24.

    [16]岳鵬翔,吳守一.用超臨界CO2脫除綠茶中咖啡堿的試驗(yàn)研究[J].茶葉科學(xué),2002(2):131-134.

    [17]津志田騰二郎,村井教信.茶葉咖啡堿在熱水中的溶出特性[J].福建茶葉,1986(1):40-48.

    [18]胡秋輝.茶葉中咖啡堿和茶多酚類提取技術(shù)研究初報(bào)[J].茶業(yè)通報(bào),1996(4):22-24.

    [19]姚永宏.柴友榮.李中林,等.降低茶葉咖啡堿的研究進(jìn)展[J].西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2009(6):1799-1802.

    [20]ASHIHARA H,CROZIER A.Caffeine:awell known but little mentioned compound in plant science[J].Trends PlantSci,2001(9):407-413.

    [21]陳宗懋.日本在選育低咖啡堿含量茶樹品系上有新突破[J].中國(guó)茶葉,1998(3):27.

    [22]胡必強(qiáng).南京農(nóng)大育出低咖啡堿茶樹[N].中華合作時(shí)報(bào),2008-03-04.

    [23]TAKEO SUZUKI.EIICHI TAKAHASHI.Further Investigation of the Biosynthesis of Caffeine in Tea Plants[J].Biochem J,1976(160):181-184.

    [24]MIKIHIRO Ogawa,YUKA Herai,NOZOMU Koizumi,et al.7-Methylxanthine Methyltransferase of Coffee Plants[J].THE JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY,2001(11):8213-8218.

    [25]余有本,江昌俊,王朝霞,等.茶樹咖啡堿合酶cDNA在大腸桿菌中的表達(dá)[J].南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2004(4):105-109.

    猜你喜歡
    保靖盤縣咖啡堿
    安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)揭示茶樹咖啡堿合成調(diào)控機(jī)制
    保靖苗族龍紋飾的藝術(shù)特異性與文化基因
    玩具世界(2022年1期)2022-06-05 07:42:40
    茶樹體內(nèi)咖啡堿生物代謝研究進(jìn)展
    任弼時(shí)與盤縣會(huì)議
    大孔吸附樹脂富集速溶茶中咖啡堿的研究
    晚上喝茶頭遍要倒掉
    盤縣下屯水電站施工技術(shù)措施分析
    六盤水:盤縣1月份稅收實(shí)現(xiàn)高增長(zhǎng)
    盤縣老年門球隊(duì)在協(xié)作賽上獲第一名
    晚晴(2014年10期)2014-10-24 10:53:12
    基于主成分分析的保靖黃金茶加工過程中氨基酸動(dòng)態(tài)變化研究
    茶葉通訊(2014年3期)2014-02-27 07:55:44
    夜夜躁狠狠躁天天躁| 黑人欧美特级aaaaaa片| 国内精品久久久久久久电影| 日本 欧美在线| 99在线人妻在线中文字幕| 成人三级黄色视频| 人妻夜夜爽99麻豆av| 欧美不卡视频在线免费观看| 丁香六月欧美| 午夜福利成人在线免费观看| 欧美色视频一区免费| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 国产男靠女视频免费网站| 久久香蕉精品热| 亚洲一区二区三区不卡视频| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 国产97色在线日韩免费| 久久午夜亚洲精品久久| АⅤ资源中文在线天堂| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 一区二区三区激情视频| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 成人欧美大片| 欧美大码av| www.精华液| 成人鲁丝片一二三区免费| 亚洲精华国产精华精| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 国产爱豆传媒在线观看| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 日本成人三级电影网站| 欧美乱码精品一区二区三区| 欧美中文日本在线观看视频| 国产真实乱freesex| 夜夜爽天天搞| 久久久久久久午夜电影| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 天堂动漫精品| 国产欧美日韩精品亚洲av| 91字幕亚洲| 亚洲av五月六月丁香网| 成人一区二区视频在线观看| 欧美国产日韩亚洲一区| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 偷拍熟女少妇极品色| 男女床上黄色一级片免费看| av国产免费在线观看| 18禁观看日本| 麻豆成人av在线观看| 日韩欧美在线乱码| 精品久久久久久成人av| 久99久视频精品免费| 18美女黄网站色大片免费观看| 国产黄色小视频在线观看| 床上黄色一级片| 五月玫瑰六月丁香| 国产又色又爽无遮挡免费看| 国产高清视频在线播放一区| 国产精品99久久久久久久久| 波多野结衣巨乳人妻| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 免费看日本二区| 精品熟女少妇八av免费久了| 俺也久久电影网| 成人无遮挡网站| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 极品教师在线免费播放| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 久久人人精品亚洲av| 老熟妇仑乱视频hdxx| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 精品午夜福利视频在线观看一区| 99久久国产精品久久久| 中国美女看黄片| 两个人视频免费观看高清| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 国产精品免费一区二区三区在线| 村上凉子中文字幕在线| 国产一区二区三区视频了| 婷婷精品国产亚洲av| 久久久久免费精品人妻一区二区| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 99热这里只有精品一区 | 亚洲欧美精品综合久久99| 国内精品久久久久久久电影| 欧美色视频一区免费| 在线观看午夜福利视频| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 欧美一区二区国产精品久久精品| 深夜精品福利| 88av欧美| 1024香蕉在线观看| 午夜a级毛片| 国产成人系列免费观看| 好男人电影高清在线观看| 不卡一级毛片| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 国产乱人伦免费视频| 在线国产一区二区在线| 国产精品一区二区免费欧美| 亚洲国产中文字幕在线视频| 国产成人欧美在线观看| 老司机午夜十八禁免费视频| 真人一进一出gif抽搐免费| 成人性生交大片免费视频hd| 国产成人av教育| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 男人的好看免费观看在线视频| 亚洲精品色激情综合| 97碰自拍视频| 中文亚洲av片在线观看爽| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 最近最新中文字幕大全电影3| 久久国产精品人妻蜜桃| 国产精品一区二区免费欧美| 亚洲人成网站高清观看| 两个人看的免费小视频| 一本精品99久久精品77| 看免费av毛片| 免费在线观看日本一区| 欧美高清成人免费视频www| 一个人看视频在线观看www免费 | 亚洲欧美日韩东京热| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 精品一区二区三区视频在线观看免费| ponron亚洲| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 精品久久久久久,| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 黄色女人牲交| 露出奶头的视频| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 黄频高清免费视频| 亚洲国产欧美一区二区综合| 亚洲五月天丁香| 国产精华一区二区三区| 亚洲欧美激情综合另类| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 一级毛片女人18水好多| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 国产成+人综合+亚洲专区| 99国产精品一区二区三区| 老司机深夜福利视频在线观看| 一本综合久久免费| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 国产免费男女视频| 日韩精品中文字幕看吧| 国产乱人伦免费视频| 国产成人aa在线观看| 久久中文字幕人妻熟女| 最近视频中文字幕2019在线8| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 精品久久久久久久毛片微露脸| 嫩草影院精品99| 免费看美女性在线毛片视频| 日本免费a在线| 欧美在线一区亚洲| 精品久久久久久久末码| www.www免费av| 一本一本综合久久| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 亚洲人成电影免费在线| 欧美丝袜亚洲另类 | 亚洲国产精品成人综合色| 午夜免费激情av| 一进一出抽搐动态| 欧美丝袜亚洲另类 | 又爽又黄无遮挡网站| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 欧美中文综合在线视频| 免费人成视频x8x8入口观看| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 日本a在线网址| 母亲3免费完整高清在线观看| 夜夜爽天天搞| 国模一区二区三区四区视频 | 免费看光身美女| 亚洲色图av天堂| 国产视频一区二区在线看| 1000部很黄的大片| 欧美又色又爽又黄视频| 91av网一区二区| 色综合亚洲欧美另类图片| 亚洲18禁久久av| 久久久国产精品麻豆| 免费观看人在逋| 老鸭窝网址在线观看| 欧美成狂野欧美在线观看| 最近在线观看免费完整版| 国产麻豆成人av免费视频| 夜夜夜夜夜久久久久| 狂野欧美激情性xxxx| 亚洲国产精品久久男人天堂| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 丁香六月欧美| 无限看片的www在线观看| h日本视频在线播放| 亚洲熟女毛片儿| 动漫黄色视频在线观看| 久久精品人妻少妇| avwww免费| 美女黄网站色视频| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 一个人观看的视频www高清免费观看 | АⅤ资源中文在线天堂| 黄频高清免费视频| 嫁个100分男人电影在线观看| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 国产 一区 欧美 日韩| 色综合婷婷激情| 精品福利观看| 国产乱人视频| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 长腿黑丝高跟| 岛国在线免费视频观看| 免费观看的影片在线观看| 黄色片一级片一级黄色片| 老司机福利观看| 国产精品99久久久久久久久| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 波多野结衣高清作品| 久久中文字幕一级| 亚洲精华国产精华精| 很黄的视频免费| www.精华液| 国产伦在线观看视频一区| 亚洲电影在线观看av| 搡老岳熟女国产| www.999成人在线观看| 一个人免费在线观看电影 | 国产成人精品无人区| 成年免费大片在线观看| 日本一本二区三区精品| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 一区二区三区激情视频| 精品人妻1区二区| 99久久精品热视频| 老鸭窝网址在线观看| 女人被狂操c到高潮| 亚洲天堂国产精品一区在线| 国产精品亚洲美女久久久| 99国产极品粉嫩在线观看| www.999成人在线观看| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 免费观看的影片在线观看| 亚洲成av人片免费观看| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 国产精品永久免费网站| 麻豆一二三区av精品| 亚洲国产精品合色在线| 成年女人看的毛片在线观看| 亚洲精品一区av在线观看| 精品国产美女av久久久久小说| 90打野战视频偷拍视频| 天天躁日日操中文字幕| 欧美日韩福利视频一区二区| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 国产激情偷乱视频一区二区| 免费av不卡在线播放| 精品人妻1区二区| 中文字幕人妻丝袜一区二区| а√天堂www在线а√下载| 最近在线观看免费完整版| 成人亚洲精品av一区二区| 成人欧美大片| 手机成人av网站| 神马国产精品三级电影在线观看| 亚洲精品色激情综合| а√天堂www在线а√下载| 最近在线观看免费完整版| www.精华液| 欧美日韩国产亚洲二区| 国内精品美女久久久久久| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 国产成年人精品一区二区| 亚洲av熟女| x7x7x7水蜜桃| 午夜久久久久精精品| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 色哟哟哟哟哟哟| 国产精品av视频在线免费观看| 综合色av麻豆| 久久九九热精品免费| 亚洲av电影不卡..在线观看| 亚洲欧美激情综合另类| 国语自产精品视频在线第100页| 欧美午夜高清在线| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 亚洲欧美日韩高清专用| 女同久久另类99精品国产91| 99久久无色码亚洲精品果冻| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| av在线天堂中文字幕| 亚洲 欧美一区二区三区| 久久这里只有精品中国| 色av中文字幕| 亚洲国产精品999在线| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 一区二区三区高清视频在线| 好男人在线观看高清免费视频| av天堂中文字幕网| 欧美激情在线99| 久久久久免费精品人妻一区二区| 露出奶头的视频| 国产探花在线观看一区二区| 国产高清视频在线观看网站| 真实男女啪啪啪动态图| 在线永久观看黄色视频| 精品久久久久久成人av| 色噜噜av男人的天堂激情| 桃色一区二区三区在线观看| 日韩精品青青久久久久久| tocl精华| 欧美三级亚洲精品| 黄片大片在线免费观看| 亚洲中文字幕日韩| 一边摸一边抽搐一进一小说| h日本视频在线播放| а√天堂www在线а√下载| 香蕉久久夜色| 精品国产乱码久久久久久男人| 国产激情偷乱视频一区二区| 变态另类丝袜制服| 中文字幕久久专区| 亚洲熟妇熟女久久| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 国产91精品成人一区二区三区| 国产激情久久老熟女| av国产免费在线观看| 成人鲁丝片一二三区免费| 久久久久亚洲av毛片大全| 国产成人aa在线观看| 人妻夜夜爽99麻豆av| 国产亚洲av嫩草精品影院| 国产精品亚洲一级av第二区| 久久精品91无色码中文字幕| av福利片在线观看| 国模一区二区三区四区视频 | 婷婷精品国产亚洲av| 亚洲性夜色夜夜综合| 可以在线观看毛片的网站| 亚洲av成人av| 美女被艹到高潮喷水动态| 一二三四社区在线视频社区8| 日本一本二区三区精品| www.999成人在线观看| 男女那种视频在线观看| 久久这里只有精品中国| 亚洲男人的天堂狠狠| 一级a爱片免费观看的视频| 亚洲精品456在线播放app | 亚洲精品乱码久久久v下载方式 | 欧美成人一区二区免费高清观看 | 91av网站免费观看| 亚洲精品456在线播放app | 精品久久久久久成人av| 一本综合久久免费| 大型黄色视频在线免费观看| 综合色av麻豆| 天堂网av新在线| 88av欧美| 国产精品电影一区二区三区| 久久久久久国产a免费观看| 成人一区二区视频在线观看| 国产欧美日韩精品亚洲av| 天堂网av新在线| 天堂动漫精品| 成人一区二区视频在线观看| 亚洲无线在线观看| 亚洲午夜理论影院| 91av网站免费观看| 757午夜福利合集在线观看| 狠狠狠狠99中文字幕| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 日本免费a在线| 国产免费男女视频| 国产成人精品久久二区二区91| 亚洲最大成人中文| 嫩草影院入口| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 日本一二三区视频观看| 成人av一区二区三区在线看| 国产真实乱freesex| 午夜福利高清视频| xxxwww97欧美| 亚洲欧美日韩无卡精品| 欧美另类亚洲清纯唯美| 久久天堂一区二区三区四区| 国产高清三级在线| 99精品欧美一区二区三区四区| 天堂网av新在线| 天堂√8在线中文| 一级毛片女人18水好多| 午夜福利免费观看在线| 国产伦一二天堂av在线观看| 欧美激情在线99| 精品福利观看| 禁无遮挡网站| 999久久久国产精品视频| 黄色片一级片一级黄色片| 波多野结衣高清无吗| e午夜精品久久久久久久| 午夜福利18| 女人被狂操c到高潮| www日本黄色视频网| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 国产主播在线观看一区二区| 国产 一区 欧美 日韩| 五月玫瑰六月丁香| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 色综合婷婷激情| 国产精品女同一区二区软件 | 免费看十八禁软件| 三级国产精品欧美在线观看 | 国产一区二区在线观看日韩 | 看片在线看免费视频| 久久久精品欧美日韩精品| 亚洲专区字幕在线| 亚洲国产欧美一区二区综合| 国产极品精品免费视频能看的| av女优亚洲男人天堂 | 亚洲男人的天堂狠狠| 久久久成人免费电影| 男女那种视频在线观看| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 欧美日韩国产亚洲二区| 亚洲黑人精品在线| 亚洲熟女毛片儿| 精品一区二区三区视频在线 | 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 757午夜福利合集在线观看| 最近最新免费中文字幕在线| 色哟哟哟哟哟哟| 最近最新免费中文字幕在线| 成人欧美大片| 日韩欧美国产一区二区入口| 搡老妇女老女人老熟妇| 麻豆国产av国片精品| 久久久久国产一级毛片高清牌| 亚洲熟女毛片儿| 国产伦人伦偷精品视频| 国产成人av激情在线播放| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 久久午夜亚洲精品久久| 亚洲欧美日韩东京热| 亚洲精品粉嫩美女一区| 欧美极品一区二区三区四区| 日韩免费av在线播放| 18美女黄网站色大片免费观看| 国产亚洲精品av在线| 丰满人妻一区二区三区视频av | 真实男女啪啪啪动态图| 亚洲无线在线观看| 99国产精品一区二区三区| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 又爽又黄无遮挡网站| 国产精品av视频在线免费观看| 精品久久久久久久久久免费视频| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 岛国在线观看网站| 久久九九热精品免费| 此物有八面人人有两片| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 欧美黑人欧美精品刺激| 搡老熟女国产l中国老女人| 色播亚洲综合网| 国产一区二区三区视频了| 国产日本99.免费观看| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 亚洲在线自拍视频| 香蕉丝袜av| 又紧又爽又黄一区二区| 国产成人av教育| 国产真人三级小视频在线观看| 观看免费一级毛片| 成年女人永久免费观看视频| 国内精品一区二区在线观看| 久久久色成人| 无遮挡黄片免费观看| www.熟女人妻精品国产| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 成人精品一区二区免费| 久久久久久久精品吃奶| 亚洲成人久久性| 国产单亲对白刺激| 亚洲av美国av| 在线观看舔阴道视频| 亚洲五月天丁香| 国产高清视频在线播放一区| 久久草成人影院| 国产91精品成人一区二区三区| 一区二区三区国产精品乱码| 色播亚洲综合网| 黄色 视频免费看| 性欧美人与动物交配| 宅男免费午夜| 亚洲成av人片在线播放无| 嫩草影院入口| 亚洲 国产 在线| 精品日产1卡2卡| 国产高清视频在线观看网站| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 99riav亚洲国产免费| 国产精品影院久久| 在线播放国产精品三级| 色综合站精品国产| 网址你懂的国产日韩在线| 在线观看免费午夜福利视频| 99re在线观看精品视频| 久久久精品大字幕| 日韩欧美免费精品| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 人人妻,人人澡人人爽秒播| 欧美中文综合在线视频| 亚洲中文av在线| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 久久九九热精品免费| 久久国产乱子伦精品免费另类| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 天天添夜夜摸| 99视频精品全部免费 在线 | 九九久久精品国产亚洲av麻豆 | 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 欧美日韩国产亚洲二区| 老鸭窝网址在线观看| 精品电影一区二区在线| 亚洲国产精品久久男人天堂| 久久久国产精品麻豆| 国产精品1区2区在线观看.| bbb黄色大片| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 亚洲人成网站高清观看| 亚洲av第一区精品v没综合| 欧美日韩黄片免| 91麻豆av在线| 一二三四社区在线视频社区8| 天天一区二区日本电影三级| 99在线视频只有这里精品首页| 亚洲成人中文字幕在线播放| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 日日干狠狠操夜夜爽| 色哟哟哟哟哟哟| 成熟少妇高潮喷水视频| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 又黄又爽又免费观看的视频| 男人的好看免费观看在线视频| 久久久国产欧美日韩av| 最近最新中文字幕大全电影3| 我要搜黄色片| 老汉色∧v一级毛片| 欧美极品一区二区三区四区| 国产三级黄色录像| 免费av不卡在线播放| 很黄的视频免费| 美女黄网站色视频| 国产亚洲精品一区二区www| 午夜福利视频1000在线观看| 国产成人系列免费观看| 国产探花在线观看一区二区| 老鸭窝网址在线观看| 男人舔奶头视频| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 午夜亚洲福利在线播放| 悠悠久久av| 欧美中文综合在线视频| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 成人特级黄色片久久久久久久| 狂野欧美激情性xxxx| 哪里可以看免费的av片| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 一进一出抽搐动态| 色吧在线观看| 日韩国内少妇激情av| 最近在线观看免费完整版| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 一区二区三区国产精品乱码| 一边摸一边抽搐一进一小说| 欧美av亚洲av综合av国产av| 国产激情欧美一区二区| 国模一区二区三区四区视频 | 国产人伦9x9x在线观看| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 色av中文字幕| 一个人免费在线观看的高清视频| 久久精品91蜜桃| 成人三级做爰电影| 久久久久久国产a免费观看| 麻豆成人av在线观看| 狂野欧美激情性xxxx| 久久香蕉国产精品| 国产亚洲av高清不卡| 成年女人毛片免费观看观看9| 成年女人永久免费观看视频| 国产视频一区二区在线看| 老司机午夜福利在线观看视频| 久久香蕉国产精品| 中文亚洲av片在线观看爽| 精品日产1卡2卡| 精品久久久久久久毛片微露脸| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | av在线蜜桃| 亚洲第一电影网av| 我要搜黄色片| 日韩人妻高清精品专区| 真实男女啪啪啪动态图| 99国产精品一区二区蜜桃av| 亚洲真实伦在线观看|