多種植物活性物質(zhì)混配劑對(duì)瓜類白粉病病菌毒力測(cè)定和藥效試驗(yàn)

吾建祥，周小軍，凌士鵬，楊德毅，萬梨芳

（1.金華市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量綜合監(jiān)督檢測(cè)中心，浙江 金華 321000；2.金華市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，浙江 金華 321017；3.浙江華京生物科技有限公司，浙江 金華 321000）

目前人們已經(jīng)在野生植物資源中發(fā)現(xiàn)了很多具有殺蟲、殺菌、抗病毒和除草作用的天然活性物質(zhì)，其有效成分是植物體中的次生代謝產(chǎn)物，如生物堿類、黃酮類、萜烯類、酚類等。因其具有不破壞生態(tài)環(huán)境、靶標(biāo)有害生物不易對(duì)其產(chǎn)生抗藥性、對(duì)非靶標(biāo)生物安全、活性成分的作用方式特異等特點(diǎn)，在綠色農(nóng)業(yè)領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用[1]。我國(guó)植物資源極為豐富，也是研究和應(yīng)用植物源農(nóng)藥較早的國(guó)家。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，全世界已報(bào)道的抗細(xì)菌植物有11種，抗真菌的有94種，抗病毒的有17種，主要集中于楝科、菊科、豆科、衛(wèi)矛科、大戟科植物。已有研究表明，厚樸葉粗提物對(duì)10種植物病原真菌有很強(qiáng)的抑制作用，在盆栽和大田試驗(yàn)中也表現(xiàn)出較好的防治效果；從黃連提取物中分離到的生物堿可抑制5種病原真菌，包括番茄灰霉病原和油菜菌核病原，其菌絲生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)的抑制率達(dá)到100%、91.22%[1]。

白粉病是瓜類種植中較為普遍的真菌性病害之一[2-3]。白粉病在露地和設(shè)施栽培的瓜類中均有發(fā)生，潛伏期短、再侵染速度快、流行性強(qiáng)，可導(dǎo)致瓜類減產(chǎn)20%～40%。目前生產(chǎn)上對(duì)瓜類病害的防治以化學(xué)防治為主[4]，但使用化學(xué)藥劑后，瓜類產(chǎn)品質(zhì)量存在安全隱患。很多植物提取液對(duì)白粉病有很好的抑制作用。張珍等[5]研究表明0.5%小檗堿水劑是從多種植物中提取制成的植物源殺菌劑，能有效防治多種病害，并且對(duì)人畜極為安全，是綠色農(nóng)業(yè)的理想藥劑。郭志剛[6]采用0.3%苦參堿水劑可以有效地防治小麥白粉病，防效相當(dāng)或優(yōu)于對(duì)照藥劑15%三唑酮可濕性粉劑。唐蕊等[7]用80%乙醇作溶劑對(duì)9 種中草藥進(jìn)行提取，9種提取液對(duì)黃瓜白粉病防效差異很大，有的表現(xiàn)出單方面的作用，其中Ts-37、Ts-24 兩種提取液則表現(xiàn)出良好的保護(hù)和治療雙重作用，與化學(xué)藥劑防效相當(dāng)。周小軍等[8]研究了植物源殺菌劑0.5%小檗堿水劑對(duì)南瓜白粉病的防治效果，發(fā)現(xiàn)0.5%小檗堿水劑400倍液對(duì)南瓜白粉病的防效達(dá)到76.7%，極顯著優(yōu)于對(duì)照藥劑20%三唑酮乳油1 500倍的效果，并且對(duì)南瓜安全。

本研究將多種植物中提取的活性物質(zhì)進(jìn)行混配，加工成混配水劑，對(duì)黃瓜白粉病病菌進(jìn)行毒力測(cè)定，并研究了其對(duì)黃瓜、南瓜、西瓜白粉病的田間藥效試驗(yàn)及安全性評(píng)價(jià)。

1 材料和方法

1.1 混配藥劑工藝流程

對(duì)各提取液進(jìn)行相關(guān)有效成分含量分析后，按照一定比例在調(diào)制釜內(nèi)利用凈化水進(jìn)行混配。

基本工藝流程為：原料—提取—過濾—含量分析—混配—調(diào)整pH—靜置—成品。

混配劑經(jīng)浙江省經(jīng)濟(jì)和信息委員會(huì)醫(yī)藥石化行業(yè)辦公室提供檢測(cè)結(jié)果，生物總堿含量為0.82%，小檗堿質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.52%，水不溶物質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)小于1%，pH為8.0?；炫渌畡┫♂?0倍后其低溫、熱貯穩(wěn)定性好。黃柏皮、大黃、松脂、蘆薈、皂角、苦楝根為常見中草藥，經(jīng)浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究院、浙江大學(xué)農(nóng)藥與毒理研究所等單位進(jìn)行毒性測(cè)定及環(huán)境生物毒性試驗(yàn)，混配水劑對(duì)人畜微毒、對(duì)環(huán)境為中等毒性或低毒。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 混配劑對(duì)黃瓜白粉病病菌毒力測(cè)試

試驗(yàn)設(shè)6個(gè)處理，以混配劑中小檗堿的不同含量為濃度梯度配制藥液（分別為100、50、25、12.5、6.25 mg/L），以清水為對(duì)照。測(cè)試方法采用黃瓜葉片（離體）法：將未染病的黃瓜幼苗真葉摘下，每3片（大小一致）為1組，浸漬于系列濃度梯度的供試藥液中數(shù)十秒鐘，撈出后瀝去多余藥液，晾干，24 h后將新采集的黃瓜白粉病葉上的白粉病分生孢子充分抖撒接種，接種后葉片置于培養(yǎng)皿中（保濕），放入25 ℃人工智能箱中培養(yǎng)，保持葉片處于新鮮不腐狀態(tài)，以觀察各處理葉片的被侵染狀態(tài)（侵染斑點(diǎn)）。1周后，根據(jù)葉片上侵染病斑（點(diǎn)）數(shù)求出抑制侵染率，經(jīng)查機(jī)率值換算表得出抑制侵染率的機(jī)率值，得到毒力回歸方程，并計(jì)算出EC50值[4-5]。抑制侵染率的計(jì)算公式為：

1.2.2 混配劑防治黃瓜白粉病田間藥效試驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)：浙江金華蘭溪市蘭江街道辦事處春黃瓜大棚內(nèi)。

職業(yè)教育是我國(guó)教育領(lǐng)域的主要構(gòu)成部分，對(duì)推動(dòng)經(jīng)濟(jì)增長(zhǎng)有著十分重要的作用。學(xué)?；鶎有姓ぷ髡呤枪芾斫逃闹饕獦?gòu)成部分，在培育人才的過程中承擔(dān)著十分關(guān)鍵的責(zé)任。不過，在職業(yè)教育發(fā)展中，高校始終傾向于教師文化素養(yǎng)與教育能力的提升，普遍忽略了行政工作者的職業(yè)特征與心理活動(dòng)，進(jìn)而導(dǎo)致學(xué)校的行政管理者出現(xiàn)普遍性的職業(yè)倦怠現(xiàn)象。

試驗(yàn)共設(shè)5個(gè)不同濃度的混配水劑，分別為：混配劑稀釋400、600、800倍液，3%多氧清稀釋600倍液及清水空白對(duì)照，每處理重復(fù)4次，小區(qū)面積8 m2，區(qū)組隨機(jī)排列，四周不設(shè)保護(hù)行，施藥采用圍膜保護(hù)。噴霧量以植株全葉濕潤(rùn)，不致滴液為準(zhǔn)。

試驗(yàn)期間正值黃瓜旺果末期，全田并未發(fā)生白粉病，于6月2日施藥1次，施藥后7 d，每小區(qū)隨機(jī)取樣4點(diǎn)，每點(diǎn)調(diào)查相鄰2株，共8株，分級(jí)調(diào)查每株全部葉片，計(jì)算病情指數(shù)和防效，分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)和計(jì)算方法按照GB/T17980.30—2000規(guī)定執(zhí)行，防治效果=（空白對(duì)照區(qū)病情指數(shù)-藥劑處理區(qū)病情指數(shù)）/空白對(duì)照區(qū)病情指數(shù)×100%，并對(duì)防效進(jìn)行鄧肯氏新復(fù)極差（DMRT）顯著性分析。

施藥后1、3、7 d目測(cè)施藥對(duì)黃瓜生長(zhǎng)的影響情況，對(duì)安全性進(jìn)行考察。

1.2.3 混配劑防治南瓜白粉病田間藥效試驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)：浙江省金華市農(nóng)科院試驗(yàn)場(chǎng)。

試驗(yàn)共設(shè)5個(gè)不同濃度的混配水劑，分別為：混配劑稀釋400、600、800倍液，20%三唑酮乳油稀釋1 500倍液及清水空白對(duì)照，每處理重復(fù)3次，小區(qū)面積30 m2，區(qū)組隨機(jī)排列，試驗(yàn)期間施藥3次（5月22日、25日、28日）。噴霧量以植株全葉濕潤(rùn)，不致滴液為準(zhǔn)。

第1次施藥前及第3次施藥后7 d，調(diào)查藥效。每小區(qū)隨機(jī)取樣3點(diǎn)，每點(diǎn)調(diào)查1株，分級(jí)調(diào)查每株全部葉片，計(jì)算病情指數(shù)和防效，并進(jìn)行鄧肯氏新復(fù)極差（DMRT）顯著性分析，分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)和計(jì)算方法按照GB/T17980.30 —2000規(guī)定執(zhí)行，防治效果=1-{[（藥劑處理區(qū)藥后病情指數(shù)-藥劑處理區(qū)藥前病情指數(shù)）/藥劑處理區(qū)藥前病情指數(shù)）]/[空白對(duì)照區(qū)藥后病情指數(shù)-空白對(duì)照區(qū)藥前病情指數(shù)）/空白對(duì)照區(qū)藥前病情指數(shù)）]}。

施藥后1、3、5 d觀察施藥對(duì)南瓜生長(zhǎng)的影響情況，對(duì)安全性進(jìn)行考察。

1.2.4 混配劑防治大棚西瓜白粉病田間藥效試驗(yàn)

試驗(yàn)地點(diǎn)：浙江金華市農(nóng)科院試驗(yàn)場(chǎng)。

試驗(yàn)共設(shè)5個(gè)不同濃度的混配水劑，分別為：混配劑稀釋400、600、800倍液，10%世高（苯醚甲環(huán)唑）稀釋1 500倍液及清水空白對(duì)照，每處理重復(fù)3次，小區(qū)面積15 m2，區(qū)組隨機(jī)排列，試驗(yàn)期間施藥2次（5月28日、6月4日）。噴霧量以植株全葉濕潤(rùn)，不致滴液為準(zhǔn)。

第1次施藥前及第2次施藥后7 d，調(diào)查藥效。采用5點(diǎn)取樣法，每小區(qū)調(diào)查1 m2，調(diào)查病葉數(shù)，計(jì)算病情指數(shù)和防效，并進(jìn)行鄧肯氏新復(fù)極差（DMRT）顯著性分析，分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)和計(jì)算方法按照GB/T17980.30—2000規(guī)定執(zhí)行，防治效果計(jì)算公式同1.2.3。施藥后1、3、5 d觀察施藥對(duì)西瓜生長(zhǎng)的影響情況，對(duì)安全性進(jìn)行考察。

2 結(jié)果與分析

2.1 混配劑對(duì)黃瓜白粉病病菌的毒力測(cè)試

表1 混配劑對(duì)黃瓜白粉病病菌侵染抑制作用測(cè)定結(jié)果

表1可以看出，混配制劑的濃度越高，抑制侵染效果越好，當(dāng)混配液中小檗堿的有效含量為100 mg/L時(shí)，對(duì)白粉病的抑制侵染率最高，達(dá)88%。

根據(jù)混配劑對(duì)瓜類白粉病病菌侵染抑制作用測(cè)定結(jié)果（表1）求出其毒力回歸方程為：Y=4.2035+1.0253X，相關(guān)系數(shù)r=0.99，EC50=5.981 7。方程中Y為抑制侵染率機(jī)率值，X為濃度對(duì)數(shù)值。結(jié)果表明：混配劑對(duì)瓜類白粉病的侵染有較強(qiáng)的抑制作用，藥劑處理較空白對(duì)照侵染病斑（點(diǎn)）數(shù)明顯減少。抑制或殺死50%瓜類白粉病菌所需要的混配劑濃度為5.981 7 mg/L。

2.2 混配劑對(duì)黃瓜白粉病的防效和安全性

從混配劑對(duì)黃瓜白粉病的防效結(jié)果（表2）可知，混配劑稀釋400、600、800倍液，藥后7 d對(duì)黃瓜白粉病的平均防效分別為75.8%、69.2%、63.7%，防治效果隨著使用濃度的增加而增強(qiáng)。對(duì)照藥劑3%多氧清600倍液的防效為76.9%，經(jīng)鄧肯氏新復(fù)極差（DMRT）顯著性分析，混配劑稀釋400倍液的防效與3%多氧清600倍液無顯著性差異；混配劑稀釋600、800倍液防效極顯著差于3%多氧清的防效。

表2 混配劑對(duì)黃瓜白粉病的防效

在施藥過程中，混配劑各濃度處理對(duì)黃瓜植株生長(zhǎng)無不良影響，施藥后植株生長(zhǎng)正常。

2.3 混配劑對(duì)南瓜白粉病的防效和安全性

從混配劑對(duì)南瓜白粉病的防效（表3）可以看出，混配劑稀釋400、600、800倍液，第3次藥后7 d對(duì)南瓜白粉病的平均防效分別為76.7%、64.5%、45.9%，防治效果隨著使用濃度的增加而增強(qiáng)。對(duì)照藥劑20%三唑酮1 500倍液防效為50.0%，經(jīng)鄧肯氏新復(fù)極差（DMRT）顯著性分析，混配劑稀釋400倍液的防效極顯著優(yōu)于20%三唑酮1 500倍液；混配劑600倍液處理防效顯著優(yōu)于20%三唑酮1 500倍液；混配劑800倍液處理防效與20%三唑酮1 500倍液差異不顯著。

在施藥過程中，混配劑各濃度處理對(duì)南瓜植株生長(zhǎng)無不良影響，施藥后植株生長(zhǎng)正常、葉色正常，表明對(duì)南瓜生長(zhǎng)是安全的。

表3 混配劑對(duì)南瓜白粉病的防效

2.4 混配劑對(duì)西瓜白粉病的防效和安全性

表4 混配劑對(duì)西瓜白粉病的防效

通過混配劑對(duì)西瓜白粉病的防效（表4）結(jié)果分析可知，混配劑稀釋400、600、800倍液第2次藥后7 d對(duì)大棚西瓜白粉病的平均防效分別為78.1%、74.8%、58.5%，防治效果隨著使用濃度的增加而增強(qiáng)。對(duì)照藥劑10%世高1 500倍液防效為78.2%，經(jīng)鄧肯氏新復(fù)極差（DMRT）顯著性分析，混配劑400倍液的防效與10%世高1 500倍液差異不顯著，防效相當(dāng)；混配劑600倍液處理防效與10%世高1 500倍液差異極顯著；混配劑800倍液處理防效極顯著差于混配劑稀釋400倍液、600倍液和10%世高1 500倍液的防效。

在施藥過程中，混配劑各濃度處理對(duì)西瓜植株生長(zhǎng)和葉色無不良影響，施藥后無藥害發(fā)生，表明對(duì)西瓜生長(zhǎng)是安全的。

3 結(jié)論與討論

試驗(yàn)結(jié)果表明：多種植物活性物質(zhì)混配劑對(duì)黃瓜白粉病的侵染有較強(qiáng)抑制作用?；炫鋭?duì)黃瓜、南瓜、西瓜白粉病的防效隨著使用濃度的增加而增強(qiáng)。實(shí)驗(yàn)表明在黃瓜上使用混配劑400倍液的防效與3%多氧清600倍液相當(dāng)；在南瓜上使用混配劑400倍液的防效極顯著優(yōu)于20%三唑酮1 500倍液；在西瓜上使用混配劑400倍液的防效與10%世高1 500倍液相當(dāng)。經(jīng)觀察，施用植物混配劑后對(duì)黃瓜、南瓜、西瓜生長(zhǎng)無不良影響，對(duì)以上瓜類生長(zhǎng)安全。

因此，多種植物活性物質(zhì)混配劑稀釋400倍液對(duì)黃瓜、南瓜、西瓜白粉病有效好的防效，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上推廣使用，可減少化學(xué)農(nóng)藥的使用；對(duì)降低農(nóng)產(chǎn)品化學(xué)農(nóng)藥殘留，提高農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全水平有現(xiàn)實(shí)意義。

黃柏皮、大黃、松脂、蘆薈、皂角、苦楝根等中藥材具有殺菌的功效，為常見的殺菌祛濕中藥，研究成果為利用多種植物活性物質(zhì)防治植物病害提供了一定的思路，為進(jìn)一步研究植物源殺菌劑提供了科學(xué)依據(jù)。對(duì)植物源農(nóng)藥的研究、開發(fā)及在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)實(shí)踐中的綜合利用是一項(xiàng)涉及生態(tài)環(huán)境友好和食品安全的系統(tǒng)工作，必將有力地推動(dòng)我國(guó)綠色農(nóng)業(yè)的發(fā)展。

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