植物乳桿菌Sc52對(duì)脂多糖誘導(dǎo)小鼠腸道屏障損傷的保護(hù)作用

何忠梅，李婷婷，趙玉娟，段翠翠，高 磊，牛春華，欒 暢，黃 城，李盛鈺,*

腸道是人體最大的消化器官，完整的腸黏膜屏障能夠阻止微生物及內(nèi)毒素進(jìn)入體循環(huán)，維持腸道正常功能，保證機(jī)體健康[1]。腸黏膜屏障功能一旦受損，腸道通透性升高，腸腔內(nèi)內(nèi)毒素突破腸道屏障進(jìn)入機(jī)體循環(huán)，促使大量炎性細(xì)胞因子釋放，引起機(jī)體炎癥，進(jìn)而誘發(fā)異常的黏膜免疫反應(yīng)[2]。近年來研究發(fā)現(xiàn)腸黏膜屏障損傷與腸道炎癥、機(jī)體免疫、肥胖、胰島素抵抗及糖尿病等多種疾病相關(guān)[3-4]。因此，維持腸黏膜屏障功能的完整性將為臨床疾病干預(yù)提供新思路。

益生菌是一類對(duì)宿主機(jī)體有益的微生物[5]。研究表明，益生菌能夠減輕或阻止腹瀉、腸易激綜合征、炎癥性腸病等疾病的發(fā)生[6-7]。它對(duì)腸道屏障的作用機(jī)制包括維持正常菌群結(jié)構(gòu)；調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)平衡；降低腸黏膜通透性；增加緊密連接蛋白的表達(dá)，修復(fù)機(jī)械屏障；抑制促炎因子分泌，保護(hù)腸道屏障。研究發(fā)現(xiàn)，益生菌可通過提高細(xì)胞間緊密連接蛋白分泌，修復(fù)侵襲性大腸桿菌引起的腸黏膜損傷[8]。Mennigen等[9]對(duì)小鼠誘導(dǎo)結(jié)腸炎的同時(shí)補(bǔ)充益生菌VSL＃3，結(jié)果表明小鼠炎癥反應(yīng)減輕，腸道通透性及緊密連接蛋白表達(dá)水平均得到改善。益生菌還可抑制細(xì)胞因子介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，減少TNF-α、IL-6等炎癥因子的產(chǎn)生，增加上皮緊密連接蛋白分泌并促進(jìn)損傷上皮細(xì)胞修復(fù)，加強(qiáng)腸黏膜屏障的保護(hù)作用[10]。

植物乳桿菌Sc52菌株是從東北發(fā)酵酸菜中分離鑒定的一株乳酸菌菌株。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，植物乳桿菌Sc52具有輔助降血糖功效。該菌株通過調(diào)節(jié)脂類代謝、降低炎癥水平、促進(jìn)腸道有益菌生長(zhǎng)等途徑降低高脂飼料和STZ誘導(dǎo)糖尿病模型小鼠的血糖，同時(shí)上調(diào)IRS-2、GCK、GLUT2等相關(guān)蛋白的表達(dá)，恢復(fù)胰島素的敏感性，有效調(diào)節(jié)血糖代謝[11]。為了進(jìn)一步探討植物乳桿菌Sc52降血糖的作用機(jī)制，本研究分析了植物乳桿菌Sc52對(duì)脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）誘導(dǎo)小鼠腸道屏障損傷的保護(hù)作用，為菌株的應(yīng)用開發(fā)提供參考。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物、材料與試劑

清潔級(jí)ICR雄性小鼠（體質(zhì)量18～22 g），購(gòu)自長(zhǎng)春市億斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限責(zé)任公司，基礎(chǔ)飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周。

菌株Sc52分離自中國(guó)東北傳統(tǒng)發(fā)酵酸菜，菌株經(jīng)表型、APICHL生化分析及16S rDNA序列分析鑒定為乳酸菌屬植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum）。2015年6月29日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，其保藏編號(hào)為CGMCC No：11027。菌株在添加20%（體積分?jǐn)?shù)）甘油的MRS（deMan Rogosa and Sharpe）培養(yǎng)基中凍存（-80 ℃）。使用前菌株按體積分?jǐn)?shù)3%接種量接種于MRS液體培養(yǎng)基，連續(xù)活化3 代?；罨蟮木杲臃N于MRS液體培養(yǎng)基，37 ℃靜置培養(yǎng)16 h，4 ℃、6 000 r/min離心10 min，去上清液。菌體用無菌生理鹽水洗滌離心后，配成菌懸液，根據(jù)OD600nm檢測(cè)和平皿計(jì)數(shù)結(jié)果，調(diào)整菌液濃度為1×1010CFU/mL，備用。

MRS基礎(chǔ)培養(yǎng)基、LBS（Lactobacillus selection）瓊脂培養(yǎng)基、雙歧桿菌瓊脂（MRS、萘啶酸、硫酸新霉素、氯化鋰和硫酸巴龍霉素）培養(yǎng)基、胰胨-亞硫酸鹽-環(huán)絲氨酸瓊脂（tryptose sulfite cycloserine agar base，TSC）培養(yǎng)基、腸道菌計(jì)數(shù)瓊脂（violet red bile dextrose agar，VRBDA）培養(yǎng)基、膽鹽-七葉苷-疊氮鈉瓊脂（bile esculin azide agar，BEA）培養(yǎng)基 青島高科技工業(yè)園海博生物技術(shù)有限公司。

大腸桿菌脂多糖055:B5 美國(guó)Sigma公司；乙酸、丙酸、丁酸標(biāo)準(zhǔn)品（均為色譜純） 上海晶純生化科技股份有限公司；小鼠血清腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（interleukin-6，IL-6）、IL-12、D-乳酸（D-lactic acid，D-Lac）、二胺氧化酶（diamine oxidase，DAO）、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）試劑盒上海朗頓生物技術(shù)公司；RIPA蛋白提取試劑盒、BCA蛋白定量試劑盒 北京鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)有限公司；GAPDH抗體、兔抗ZO-1單克隆抗體、兔抗Occludin單克隆抗體、兔抗Claudin-1單克隆抗體 英國(guó)Abcam公司；山羊抗兔二抗 北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

Sorvall Evolotion RC高速冷凍離心機(jī) 美國(guó)Thermo公司；HZQ-Q電熱恒溫培養(yǎng)箱 上海一恒實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；Cary300紫外-可見分光光度計(jì) 美國(guó)Varian公司；ELx800全自動(dòng)酶標(biāo)儀 美國(guó)BioTek公司；BX50光學(xué)顯微鏡 日本Olympus公司；電泳和轉(zhuǎn)印系統(tǒng)美國(guó)Bio-Rad公司；ChemiScope 5600化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)上海勤翔科學(xué)儀器有限公司；GC 7890A型氣相色譜儀美國(guó)Agilent技術(shù)有限公司。

1.3 方法

1.3.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組處理

小鼠隨機(jī)分為3 組，每組21 只。Sc52組灌胃植物乳桿菌Sc52 1010CFU/d，空白組和模型組小鼠灌胃等量生理鹽水，連續(xù)14 d。末次灌胃12 h后，模型組與Sc52組一次性腹腔注射15 mg/kg LPS，空白組注射等量生理鹽水。各組小鼠經(jīng)眼球取血，4 ℃、2 800 r/min離心10 min，收集上清液，-80 ℃凍存，待用。小鼠取血后經(jīng)脫頸處死，取肝臟、脾臟、腎臟稱質(zhì)量。收集回腸組織，預(yù)冷生理鹽水沖洗，部分用于蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosin）染色，部分迅速放入-80 ℃冰箱凍存，用于Western blot分析。

1.3.2 一般體征觀察與小鼠臟器指數(shù)的測(cè)定

實(shí)驗(yàn)期間每日稱量小鼠體質(zhì)量，觀察小鼠的精神、運(yùn)動(dòng)和呼吸等狀況。小鼠腹腔注射LPS后，觀察小鼠精神狀態(tài)、腹瀉及死亡狀況。各組小鼠肝臟、脾臟、腎臟稱質(zhì)量，各臟器質(zhì)量與小鼠終體質(zhì)量的比值即為臟器指數(shù)。

1.3.3 血清生化指標(biāo)測(cè)定

按照ELISA試劑盒說明書，檢測(cè)小鼠血清中TNF-α、IL-6、IL-12、NO、DAO與D-Lac水平。1.3.4 小鼠回腸組織病理學(xué)檢測(cè)

小鼠回腸組織（距小腸回盲部1 cm處）1 cm，經(jīng)體積分?jǐn)?shù)4%甲醛溶液固定，不同體積分?jǐn)?shù)梯度乙醇處理后固定于石蠟中，切片后進(jìn)行HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察小鼠回腸組織病理學(xué)變化。

1.3.5 小鼠腸道短鏈脂肪酸質(zhì)量濃度的測(cè)定

取小鼠結(jié)腸內(nèi)容物0.1 g，加蒸餾水5 mL溶解并振蕩2 h，12 000 r/min離心10 min。取上清液2 mL采用0.45 μm濾膜過濾，依次加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為50%的H2SO40.4 mL，乙醚2.0 mL，振蕩30 次后12 000 r/min離心5 min，置于4 ℃冰箱中30 min，取上層乙醚溶液進(jìn)行氣相分析[12]。測(cè)定采用外標(biāo)法，用乙酸、丙酸和丁酸作標(biāo)準(zhǔn)曲線。氣相色譜測(cè)定條件：DB-FFAP色譜柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）。升溫程序：初溫120 ℃，維持5 min，以15 ℃/min升溫到250 ℃，保持1 min。FID溫度：280 ℃；載氣：氮?dú)?；分流比?0∶1；流速：2.0 mL/min；待測(cè)樣品進(jìn)樣體積：2 μL[13]。

1.3.6 小鼠腸道菌群計(jì)數(shù)

分別于第0、7、14天（注射LPS 6 h后），每組取3 只小鼠，無菌條件下取小鼠成形腸內(nèi)容物于試管內(nèi)，無菌生理鹽水梯度稀釋，分別涂布于LBS、雙歧桿菌瓊脂培養(yǎng)基、VRBDA、BEA和TSC瓊脂平板，每個(gè)稀釋度做3 個(gè)平行，37 ℃厭氧或需氧培養(yǎng)24～48 h，檢測(cè)乳桿菌、雙歧桿菌、腸桿菌、腸球菌和產(chǎn)氣莢膜梭菌數(shù)量。以顯微鏡鏡檢、革蘭氏染色鑒定目標(biāo)菌落，并進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。

1.3.7 Western blot檢測(cè)回腸組織緊密連接蛋白表達(dá)

取-80 ℃冰箱中凍存的小鼠回腸組織，參照蛋白抽提試劑盒說明書提取蛋白，Western blot法檢測(cè)小鼠回腸組織中ZO-1、Occludin和Claudin-1蛋白的表達(dá)。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果以 ±s表示，各實(shí)驗(yàn)組間數(shù)據(jù)采用方差比較分析。以P值表示統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＜0.05為差異顯著，P＜0.01為差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 小鼠一般體征觀察與臟器指數(shù)

表1 植物乳桿菌Sc52對(duì)小鼠臟器指數(shù)的影響Table 1 Effect of L. plantarum Sc52 on organ indexes of mice

由表1可知，灌胃植物乳桿菌Sc52期間小鼠生長(zhǎng)和精神狀況良好，攝食、飲水、呼吸和排泄等方面正常。LPS誘導(dǎo)后，模型組小鼠30 min后開始出現(xiàn)立毛、發(fā)抖、呼吸急促的現(xiàn)象。2 h后小鼠精神萎靡，活動(dòng)能力減弱，伴有腹瀉等癥狀；而Sc52組小鼠精神狀態(tài)、活動(dòng)能力與對(duì)照組相比差異明顯，但腹瀉癥狀較模型組減輕。至實(shí)驗(yàn)結(jié)束（第14天），無小鼠死亡。如表1所示，模型組小鼠經(jīng)LPS誘導(dǎo)后，肝臟、脾臟、腎臟的臟器指數(shù)均有不同程度的增加，與空白組相比差異顯著，而灌胃植物乳桿菌Sc52的小鼠肝臟、脾臟、腎臟的臟器指數(shù)均低于模型組。

2.2 植物乳桿菌Sc52對(duì)小鼠血清中炎癥因子水平的影響

表2 植物乳桿菌Sc52對(duì)小鼠血清中炎癥因子的影響Table 2 Effect of L. plantarum Sc52 on serum inflammatory cytokines in mice

由表2可知，LPS誘導(dǎo)小鼠腸屏障損傷后，模型組小鼠血清中TNF-α、IL-6、IL-12、NO水平明顯升高，與

空白組相比差異極顯著（P＜0.01），由于內(nèi)毒素進(jìn)入血液循環(huán)后激發(fā)機(jī)體的炎癥反應(yīng)，使機(jī)體炎癥水平迅速升高，而灌胃植物乳桿菌Sc52菌液后的小鼠炎癥反應(yīng)減輕，小鼠血清中TNF-α、IL-6、IL-12水平和NO水平均呈不同程度降低。提示植物乳桿菌Sc52能明顯緩解LPS誘導(dǎo)的小鼠炎癥反應(yīng)，降低小鼠血清中炎癥因子水平。

2.3 植物乳桿菌Sc52對(duì)小鼠血清中D-Lac和DAO水平的影響

圖1 植物乳桿菌Sc52對(duì)小鼠血清中D-Lac的影響Fig. 1 Effect of L. plantarum Sc52 on serum D-Lac in mice

圖2 植物乳桿菌Sc52對(duì)小鼠血清中DAO的影響Fig. 2 Effect of L. plantarum Sc52 on serum DAO in mice

由圖1、2可知，注射LPS 6 h后，小鼠血清中D-Lac和DAO水平迅速升高。模型組D-Lac與DAO水平分別升高到3.65 μmol/mL、74.36 ng/mL，而灌胃植物乳桿菌Sc52的小鼠血清中D-Lac與DAO水平分別為3.23 μmol/mL、62.82 ng/mL，與模型組相比差異性極顯著（P＜0.01）。表明LPS誘導(dǎo)后小鼠腸屏障受損，腸道通透性增加，導(dǎo)致通透性相關(guān)的指標(biāo)水平迅速升高。提示植物乳桿菌Sc52通過改善腸道通透性水平，緩解LPS對(duì)腸道屏障造成的損傷。

2.4 植物乳桿菌Sc52對(duì)小鼠回腸病理學(xué)的影響

圖3 植物乳桿菌Sc52對(duì)小鼠回腸組織病理學(xué)變化的影響（1 000×）Fig. 3 Effect of L. plantarum Sc52 on histopathological changes in the ileum of mice (1 000 ×)

由圖3可知，空白組小鼠的回腸絨毛結(jié)構(gòu)完整，上皮細(xì)胞排列整齊，無明顯的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及腸黏膜上皮細(xì)胞脫落現(xiàn)象（圖3A）；模型組小鼠的回腸上皮細(xì)胞排列紊亂，腸黏膜絨毛出現(xiàn)破損，炎細(xì)胞浸潤(rùn)出現(xiàn)血灶，這是由于LPS的破壞作用所引起（圖3B）；灌胃植物乳桿菌Sc52的小鼠回腸上皮細(xì)胞排列未見明顯異常，腸組織中偶見炎性細(xì)胞浸潤(rùn)伴有充血，但與模型組相比，癥狀明顯減輕（圖3C）。提示植物乳桿菌Sc52能夠減輕LPS對(duì)回腸黏膜組織所造成的損傷。

2.5 植物乳桿菌Sc52對(duì)小鼠腸道短鏈脂肪酸的影響

表3 植物乳桿菌Sc52對(duì)小鼠腸道短鏈脂肪酸質(zhì)量濃度的影響Fig. 3 Effect of L. plantarumSc52 on intestinal short-chain fatty acids in mice mg/mL

如表3所示，模型組小鼠腸道中短鏈脂肪酸總量明顯下降，表明模型組小鼠腸道平衡被破壞，預(yù)先灌服植物乳桿菌Sc52菌液的小鼠腸道中短鏈脂肪酸總量升高，為2.39 mg/mL，其中乙酸質(zhì)量濃度1.86 mg/mL，丁酸質(zhì)量濃度0.32 mg/mL，與模型組相比具有顯著差異（P＜0.05）。以上結(jié)果表明，植物乳桿菌Sc52能夠升高小鼠腸道中短鏈脂肪酸水平。

2.6 植物乳桿菌Sc52對(duì)小鼠腸道菌群的影響

表4 植物乳桿菌Sc52對(duì)小鼠腸道菌群的影響Fig. 4 Effect of L. plantarum Sc52 on the intestinal microflora in mice lg（CFU/g）

由表4可知，灌服植物乳桿菌Sc52菌液至第7天時(shí)，小鼠腸道中乳桿菌、雙歧桿菌的數(shù)量增加，腸桿菌數(shù)量降低，與模型組相比，具有顯著性差異（P＜0.05）。隨著灌胃時(shí)間的延長(zhǎng)，第14天，LPS的破壞作用致使腸道菌群失調(diào)，模型組小鼠腸道中乳桿菌與雙歧桿菌數(shù)量有所減少，腸桿菌、腸球菌及產(chǎn)氣莢膜梭菌數(shù)量均有不同程度增多，而灌服植物乳桿菌Sc52菌液的小鼠腸道中乳桿菌與雙歧桿菌數(shù)量高于模型組，腸桿菌數(shù)量低于模型組，差異性極顯著（P＜0.01），腸球菌和產(chǎn)氣莢膜梭菌數(shù)量均低于模型組，差異顯著（P＜0.05）。表明植物乳桿菌Sc52能夠促進(jìn)腸道中有益菌的生長(zhǎng)，抑制有害菌的繁殖，調(diào)節(jié)機(jī)體腸道微生態(tài)平衡，改善LPS引起的小鼠腸道菌群失調(diào)，保護(hù)腸黏膜生物屏障。

2.7 植物乳桿菌Sc52對(duì)小鼠回腸緊密連接蛋白表達(dá)的影響

小鼠回腸上皮細(xì)胞間緊密連接蛋白表達(dá)如圖4所示，LPS能夠直接作用于腸上皮細(xì)胞，破壞緊密連接蛋白結(jié)構(gòu)，降低緊密連接蛋白ZO-1、Occludin與Claudin-1的表達(dá)。與模型組相比，植物乳桿菌Sc52預(yù)防組小鼠回腸Occludin與Claudin-1蛋白的表達(dá)量分別增加了83.78%、143.24%，差異呈極顯著性（P＜0.01），Sc52組小鼠回腸ZO-1蛋白表達(dá)量增加了33.33%，表明植物乳桿菌Sc52能夠通過上調(diào)腸上皮細(xì)胞間緊密連接蛋白表達(dá)量，對(duì)LPS引起的腸道屏障損傷發(fā)揮保護(hù)作用。

3 討 論

炎癥反應(yīng)是決定腸道屏障功能損傷及其相關(guān)疾病發(fā)展的關(guān)鍵因素，脂多糖是革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁的主要成分，進(jìn)入機(jī)體循環(huán)后作用于細(xì)胞膜受體，激活細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)，啟動(dòng)宿主防御反應(yīng)，釋放多種炎性因子誘發(fā)全身性炎癥反應(yīng)，損傷腸黏膜屏障[14]。有文獻(xiàn)報(bào)道，外源性攝入益生菌能夠減輕機(jī)體炎癥反應(yīng)，主要通過調(diào)節(jié)多條信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，抑制多種促炎細(xì)胞因子產(chǎn)生從而降低促炎細(xì)胞因子對(duì)腸黏膜屏障完整性的破壞[15-16]。本研究中，與空白組相比，小鼠注射LPS 30 min后，開始出現(xiàn)倦怠少動(dòng)，呼吸加快，并伴有腹瀉癥狀。模型組小鼠臟器指數(shù)及血清中TNF-α、IL-6、IL-12、NO等炎癥因子表達(dá)顯著升高，而預(yù)先灌胃植物乳桿菌Sc52的小鼠臟器指數(shù)及血清中炎癥因子含量與模型組相比顯著降低，提示植物乳桿菌Sc52能夠抑制多種炎癥因子產(chǎn)生。這與Chen等[17]的報(bào)道相一致，益生菌可通過抑制TNF-α、IL-6等炎性細(xì)胞因子分泌，調(diào)節(jié)腸黏膜免疫功能，保護(hù)腸道屏障。

越來越多的證據(jù)表明，腸黏膜屏障的完整性對(duì)腸道正常功能的維持具有非常重要的作用[18]。腸黏膜屏障一旦受損，腸道通透性發(fā)生改變，檢測(cè)血清中D-Lac水平變化能夠及時(shí)反映腸黏膜通透性的變化和損害程度[19]。DAO大部分存在于小腸黏膜絨毛，因其在外周血中活性穩(wěn)定，故檢測(cè)血中DAO水平高低，能夠反應(yīng)腸黏膜損傷與修復(fù)程度[20]。觀察小鼠回腸病理切片可知，由于LPS的破壞作用，模型組小鼠回腸黏膜嚴(yán)重受損，而預(yù)先灌服植物乳桿菌Sc52菌液的小鼠與模型組相比損傷程度較輕。注射LPS 6 h后，模型組小鼠血清中D-Lac與DAO水平明顯升高，而預(yù)先灌胃植物乳桿菌Sc52能夠降低小鼠血清中D-Lac與DAO水平，提示植物乳桿菌Sc52可抑制由LPS引起的小鼠腸道通透性升高。研究發(fā)現(xiàn)，血清D-Lac水平升高，腸道通透性增加，回腸黏膜組織緊密連接蛋白水平顯著降低，表明腸道通透性的改變與腸上皮細(xì)胞間緊密連接蛋白的表達(dá)密切相關(guān)[21]。腸上皮細(xì)胞間緊密連接蛋白對(duì)維持腸黏膜上皮細(xì)胞屏障功能、調(diào)節(jié)腸道通透性及維持細(xì)胞骨架完整性具有重要作用，其中Claudin-1、Occludin、ZO-1是反映緊密連接蛋白完整性的敏感性指標(biāo)[22]。本研究發(fā)現(xiàn)，注射LPS后，模型組小鼠回腸組織Occludin、Claudin-1和ZO-1的表達(dá)量減少，該結(jié)果與Anderson等[23]的研究結(jié)果一致，據(jù)報(bào)道，LPS可直接作用于腸黏膜，破壞緊密連接蛋白磷酸化與去磷酸化過程，損害腸黏膜屏障功能，增加腸黏膜通透性，削弱屏障作用[24-25]。既往多項(xiàng)研究表明多種益生菌可通過調(diào)節(jié)緊密連接蛋白表達(dá)改善腸道的通透性，體外研究表明，益生菌VSL＃3通過調(diào)節(jié)緊密連接蛋白表達(dá)水平，能夠修復(fù)TNF-α引起的HT-29單層細(xì)胞損傷[26]。體內(nèi)研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)EcN飼喂后的小鼠回腸組織ZO-1的mRNA和蛋白的表達(dá)量都有不同程度的增加，腸上皮屏障功能并得以改善和修復(fù)[27]。本研究結(jié)果也同樣表明，灌胃植物乳桿菌Sc52的小鼠回腸組織Occludin、Claudin-1和ZO-1蛋白的表達(dá)水平均有不同程度的增加，推測(cè)其作用機(jī)制可能是通過上調(diào)腸上皮細(xì)胞緊密連接蛋白的表達(dá)，降低血清中炎癥因子和D-Lac及DAO水平，減輕腸上皮的損傷，降低腸道通透性，保護(hù)腸黏膜上皮間的緊密連接結(jié)構(gòu)，改善腸黏膜屏障功能，從而達(dá)到抗炎作用并維持屏障功能完整性。

腸道菌群組成的微生態(tài)系統(tǒng)作為生物屏障抵御病原體的入侵，保證機(jī)體健康。攝入外源性的益生菌可通過消耗腸道內(nèi)氧氣調(diào)節(jié)腸道有益菌與有害菌的數(shù)量，維持機(jī)體腸道菌群平衡，并對(duì)失調(diào)的腸道菌群具有修復(fù)作用[28]。研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)正常小白鼠給予雙歧桿菌菌液灌胃，與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組雙歧桿菌數(shù)量顯著增加，腸桿菌數(shù)量顯著下降[29]。用雙歧桿菌BBMN01菌液給予小鼠連續(xù)灌胃14 d后，小鼠腸道中乳桿菌與雙歧桿菌數(shù)量顯著增多，腸桿菌數(shù)量顯著降低。表明雙歧桿菌的攝入對(duì)機(jī)體腸道菌群具有一定的調(diào)節(jié)作用[30]。本研究中，植物乳桿菌Sc52能夠顯著提高小鼠腸道中乳桿菌、雙歧桿菌兩種主要益生菌數(shù)量，顯著降低腸桿菌與產(chǎn)氣莢膜梭菌數(shù)量。其機(jī)理為植物乳桿菌Sc52在腸道繁殖，消耗大量氧氣，腸道內(nèi)氧濃度降低，改善了雙歧桿菌等厭氧菌的生長(zhǎng)環(huán)境，同時(shí)也使腸道中腸桿菌和腸球菌等需氧菌的生長(zhǎng)因缺氧而受到抑制。提示植物乳桿菌Sc52具有增加腸道有益菌數(shù)量、降低有害菌數(shù)量，調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)平衡，改善腸黏膜生物屏障損傷的作用。

綜上所述，植物乳桿菌Sc52可通過降低機(jī)體血清中炎癥因子水平、改善腸黏膜通透性、調(diào)節(jié)腸道微生物平衡、上調(diào)腸上皮細(xì)胞間緊密連接蛋白的表達(dá)，維持腸道屏障結(jié)構(gòu)和功能的完整性。

參考文獻(xiàn)：

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