熒光分光光度法測(cè)定斯達(dá)舒中鋁的含量

山西中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，山西 晉中 030619

鋁是地殼中含量最豐富的金屬元素，約占地殼的70%，在許多藥物、食品添加劑、混凝劑等中都含有鋁。鋁是一種對(duì)人體和生態(tài)都有害的物質(zhì)，雖然快速進(jìn)入人體不會(huì)導(dǎo)致急性中毒，但是長(zhǎng)期過(guò)量的攝入鋁會(huì)對(duì)中樞神經(jīng)、肝、腎、骨、造血細(xì)胞都有損壞，導(dǎo)致癡呆，引起貧血、骨質(zhì)疏松等疾病[1]。所以，建立一種靈敏、快速的分析方法用來(lái)檢測(cè)鋁的含量具有一定的實(shí)際意義。目前，測(cè)定鋁的方法有原子吸收光度法[2]、化學(xué)法[3]、紫外分光光度法[4]等。而熒光光度法因具有操作簡(jiǎn)單快速、樣品用量少、靈敏度高、選擇性好等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛地應(yīng)用于鋁的含量測(cè)定[5]。在前期研究中，以2-氨基苯酚和2-羥基萘甲醛為原料，合成了萘甲醛席夫堿(HPIN)，并通過(guò)熒光分光光度法測(cè)定了白術(shù)、防風(fēng)、黃芪、連翹等中藥中鋁的含量[6-7]。本文探索以HPIN為絡(luò)合劑，采用熒光分光光度法測(cè)定胃藥斯達(dá)舒中鋁的含量，為復(fù)方制劑中鋁含量的測(cè)定提供了一種新的方法，為斯達(dá)舒質(zhì)量控制的檢測(cè)方法提供參考。

1 儀器與材料

1.1 材料 斯達(dá)舒片(批號(hào)：160808、161104、161110、160113，修正藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司)，HPIN由山西中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)化學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供。甲醇、乙酸、乙酸銨、氯化銨、氨水、硝酸鋁、乙酸鈉、鹽酸等試劑都是分析純。

1.2 儀器 CP214萬(wàn)分之一天平(奧豪斯儀器有限公司)，UV-6100S型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(上海元析儀器有限公司)，F(xiàn)97pro型熒光光譜儀(上海棱光技術(shù)有限公司)，pHS-3C pH計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品溶液的制備

2.1.1 鋁標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 精密稱取0.0188 g Al(NO3)3·9H2O，用適量蒸餾水溶解，定容至50 mL容量瓶，配制成1 mmol/L的鋁儲(chǔ)備液。精密移取該溶液1.0 mL于100 mL容量瓶中，加蒸餾水稀釋至刻度，配制為10 μmol/L的標(biāo)準(zhǔn)鋁溶液，備用。

2.1.2 HPIN標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 精密稱取HPIN固體0.0132 g，用適量甲醇溶解，定容至50 mL容量瓶中，配制成1 mmol/ L的HPIN儲(chǔ)備液。精密移取該溶液1.0 mL于100 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，配制成10 μmol/L的標(biāo)準(zhǔn)HPIN溶液，備用。

2.1.3 緩沖溶液的制備 pH為3、4、5、6的標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液由NaAc與HAc配制， pH為7的標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液由NH4Ac和HAc配制，pH為8、9、10的標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液由NH4Cl與NH3·H2O配制，并經(jīng)pH計(jì)校準(zhǔn)。

2.2 紫外吸收光譜 在10 mL比色管中，依次加入1.0 mL 10 μmol/L標(biāo)準(zhǔn)鋁溶液，HAc-NH4Ac標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液(pH=7)3.0 mL，10 μmol/L標(biāo)準(zhǔn)HPIN溶液1.0 mL，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，靜置40 min，以試劑空白作參比，在300～600 nm范圍進(jìn)行吸收光譜掃描。結(jié)果顯示，HPIN與鋁離子的絡(luò)合物在437 nm處有最大吸收。所以，選擇437 nm作為熒光測(cè)定的激發(fā)波長(zhǎng)。

2.3 熒光發(fā)射光譜 準(zhǔn)確移取1.0 mL的標(biāo)準(zhǔn)HPIN溶液，置于10 mL比色管中，依次加入3.0 mL 的HAc-NH4Ac標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液(pH=7)、1.0 mL 的10 μmol/L的標(biāo)準(zhǔn)鋁溶液，加水稀釋至刻度，搖勻，靜置40 min，以437 nm為激發(fā)波長(zhǎng)，在470～680 nm范圍進(jìn)行熒光光譜掃描。結(jié)果顯示，在525 nm處有最大的熒光強(qiáng)度。所以選擇525 nm作為熒光測(cè)定的發(fā)射波長(zhǎng)。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 取7個(gè)10 mL比色管，分別加入1.0 mL的標(biāo)準(zhǔn)HPIN溶液和3.0 mL pH=7的HAc-NH4Ac標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液，依次加入0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL的標(biāo)準(zhǔn)鋁溶液，用蒸餾水稀釋至刻度，靜置40 min，固定437 nm為激發(fā)波長(zhǎng)， 525 nm為發(fā)射波長(zhǎng)，測(cè)定熒光強(qiáng)度F。以F與標(biāo)準(zhǔn)鋁溶液的濃度作回歸分析，可得回歸方程：F=23.39C+11.444，r=0.9985，說(shuō)明鋁離子在0～6μmol/L濃度范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.5 緩沖溶液的選擇 按“2.4”項(xiàng)方法操作，分別測(cè)定pH為3、4、5、6、7、8、9、10的標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液中的熒光值，結(jié)果顯示pH為7的HAc-NH4Ac標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液中熒光強(qiáng)度最大。同時(shí)分別測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液為1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL中的熒光值，發(fā)現(xiàn)用量為3.0 mL時(shí)，熒光最強(qiáng)。因此實(shí)驗(yàn)采用3.0 mL pH為7的HAc-NH4Ac標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液進(jìn)行測(cè)定。

2.6 絡(luò)合時(shí)間的選擇和穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 在10 mL的比色管中，依次加入1.0 mL的標(biāo)準(zhǔn)HPIN溶液、3.0 mL的HAc-NH4Ac標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液、1.0 mL的標(biāo)準(zhǔn)鋁溶液，按“2.4”項(xiàng)方法操作，每隔5 min測(cè)定熒光強(qiáng)度，結(jié)果表明在40 min內(nèi)絡(luò)合反應(yīng)基本完成，熒光強(qiáng)度達(dá)到最大值，并在1 h內(nèi)基本穩(wěn)定。因此絡(luò)合時(shí)間選取40 min。

2.7 精密度實(shí)驗(yàn) 精密移取標(biāo)準(zhǔn)鋁溶液1.0 mL，按“2.4”項(xiàng)方法操作，連續(xù)重復(fù)測(cè)定6次，計(jì)算出RSD為0.98%，表明該儀器精密度良好。

2.8 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 選擇斯達(dá)舒片(批號(hào)1601104)粉末6份，每份1.0 g，制備貯備液，分別精密移取10 μL，按“2.4”項(xiàng)方法測(cè)定熒光值，計(jì)算出RSD 為0.76 %，表明該方法重復(fù)性良好。

2.9 加樣回收率 選擇已知含量的斯達(dá)舒片(批號(hào)1601104)粉末9份，每份0.5 g，精密稱定，制備貯備液，分別精密移取10 μL，每三份分別按照樣品中鋁含量的50%，100%和150%加入標(biāo)準(zhǔn)鋁溶液，按2.4項(xiàng)方法測(cè)定熒光值，計(jì)算出平均加樣回收率為99.02%～102.03%，RSD為1.08%～1.89 %。

2.10 共存離子的影響 1 μmol/L鋁離子溶液作為測(cè)試對(duì)象，在測(cè)量的過(guò)程中加入共存的離子，測(cè)定值的相對(duì)誤差小于或等于±5%，進(jìn)行離子干擾試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表1。大量NO3-、Na+、K+、SO42-離子(共存倍數(shù)超過(guò)10000倍)存在下不影響鋁離子含量的測(cè)定，F(xiàn)e3+在鄰菲羅啉作為掩蔽劑的情況下最大共存量為600 μmol/L，其他離子(共存倍數(shù)超過(guò)200倍)也不影響鋁離子含量的測(cè)定。

表1 共存離子的影響

2.11 樣品含量測(cè)定 取斯達(dá)舒片，研磨，準(zhǔn)確稱取0.0150 g置于燒杯中，加入2 mol/L鹽酸，溶解，過(guò)濾，洗滌，合并濾液置于100 mL容量瓶中，蒸餾水定容至刻度，即得樣品貯備液。取10 μL樣品貯備液置于10 mL比色管中，按“2.4”項(xiàng)方法連續(xù)測(cè)定其熒光值3次，然后根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中鋁離子含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 不同批號(hào)樣品中鋁離子的含量 (n=3)

3 討論

鋁是一種慢性神經(jīng)性毒性物質(zhì)，長(zhǎng)期攝入過(guò)量會(huì)使神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)生緩慢改變，從而誘發(fā)老年癡呆等疾病。斯達(dá)舒的主要成分為氫氧化鋁、維生素U、顛茄提取物，同時(shí)含有淀粉、硬脂酸鎂等輔料。用于緩解胃酸過(guò)多引起的胃痛、胃灼熱感(燒心)、反酸，也可用于慢性胃炎。其中，氫氧化鋁對(duì)胃部已經(jīng)存在的胃酸起中和或緩沖作用，既是藥物的有效成分，又不能過(guò)量攝取，測(cè)定斯達(dá)舒中鋁離子的含量具有一定的實(shí)際意義。2015版《中國(guó)藥典》[8]中氫氧化鋁的含量測(cè)定方法是采用過(guò)量的EDTA與鋁離子發(fā)生反應(yīng)，再用鋅滴定液滴定剩余的EDTA，根據(jù)鋅滴定液的消耗量，確定氫氧化鋁的含量，操作過(guò)程相對(duì)繁瑣。研究采用的萘甲醛席夫堿熒光分光度法，取樣量少，選擇性好，靈敏度高，其它離子的干擾少，可以直接測(cè)定，操作簡(jiǎn)單。斯達(dá)舒每片含氫氧化鋁140 mg，即標(biāo)準(zhǔn)含鋁量應(yīng)為48 mg。實(shí)驗(yàn)以萘甲醛席夫堿為絡(luò)合劑，采用熒光分光光度法測(cè)定斯達(dá)舒中鋁含量的平均值在48 mg以上，達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)，說(shuō)明該方法可靠、準(zhǔn)確。同時(shí)對(duì)四批樣品中鋁含量的平均值進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析，得出斯達(dá)舒中含鋁量的范圍為(49.51±0.93)mg/片，即48.58～50.44 mg/片。綜上，本文所建立的熒光分光光度法可以用于檢測(cè)斯達(dá)舒中鋁的含量，可為含鋁藥物的質(zhì)量控制檢測(cè)方法和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供參考。

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