低咖啡因普洱茶提取物的通便功能實(shí)驗(yàn)研究

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1.廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，廣東 佛山 528248； 2.天士力研究院，天津 300410

便秘是一種常見的消化系統(tǒng)疾病，雖然理論上不會(huì)增加病死率，但卻可直接降低人們的生活質(zhì)量。當(dāng)慢性便秘引起高血壓或者排便用力誘發(fā)急性心腦血管疾病等并發(fā)癥時(shí)，可嚴(yán)重危害患者的健康[1]。據(jù)流行病學(xué)調(diào)查，隨著人們生活方式和飲食結(jié)構(gòu)的改變，伴隨精神、心理等社會(huì)因素的影響，全球便秘的發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，我國功能性便秘的發(fā)病率約為10%～15%[2]。

普洱茶為山茶科植物普洱茶的嫩葉，味苦、甘，性寒，歸胃、肝、大腸經(jīng)。普洱茶作為一種傳統(tǒng)歷史名茶，因其獨(dú)特的口感和多種保健功能深受人們喜愛。清朝藥學(xué)家趙學(xué)敏在《本草綱目拾遺》中記載：“普洱茶膏黑如漆，醒酒第一。綠色者更佳，消食化痰，清胃生津，功力尤大也”；卷六《木部》又寫道：“普洱茶膏能治百病，如肚脹，受寒，用姜湯發(fā)散，出汗即可愈?？谄坪眍?，受熱疼痛，用五分茶膏噙口內(nèi)，過夜即愈”[3]?，F(xiàn)代文獻(xiàn)記載，普洱茶具有降脂、減肥、抗腫瘤、殺菌、抗疲勞、抗氧化和預(yù)防心血管疾病等功能[4]。

本實(shí)驗(yàn)的普洱茶產(chǎn)地是云南普洱，通過優(yōu)化普洱茶的提取工藝得到低咖啡因普洱茶提取物，主要成分組成有茶多酚、茶褐素和茶多糖等。本普洱茶提取物的特點(diǎn)是咖啡因含量低，普通普洱茶提取物中咖啡因的含量為7%～9%，本普洱茶提取物中咖啡因的含量為2%～4%，安全性更高[5]。實(shí)驗(yàn)中，通過小鼠的小腸運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)和排便實(shí)驗(yàn)，研究此低咖啡因普洱茶提取物對(duì)實(shí)驗(yàn)性便秘小鼠的通便作用，評(píng)價(jià)其作為通便保健產(chǎn)品的開發(fā)價(jià)值。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及實(shí)驗(yàn)環(huán)境 SPF級(jí)BALB/c小鼠100只(小腸運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)50只，排便實(shí)驗(yàn)50只)，均為雄性，體重18～22 g，均購于廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心〔SCXK(粵)2013-0002〕，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證編號(hào)44007200017304、44007200017388。所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作均在廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心實(shí)驗(yàn)設(shè)施內(nèi)進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK(粵)2013-0002。

1.2 藥品與試劑 低咖啡因普洱茶提取物粉末(批號(hào)：20130926，云南天士力帝泊洱生物茶集團(tuán)有限公司)；復(fù)方地芬諾酯片(批號(hào)：12030401，河南鼎昌藥業(yè)有限公司)；阿拉伯樹膠(批號(hào)：20101119，天津市大茂化學(xué)試劑廠)；活性炭(批號(hào)：20100611，茂名市鴻生活性炭廠)；屈臣氏蒸餾水(批號(hào)20150104，廣州屈臣氏食品飲料有限公司)。

1.3 儀器 JEA3001型電子天平(精度：0.1 g，上海浦春計(jì)器有限公司)；BS223S電子天平(精度：0.001 g，德國sartorius公司)；YP3001N電子天平(精度0.1 g，上海精密科學(xué)儀器有限公司)。

1.4 低咖啡因普洱茶提取物的提取工藝[5]取適量的普洱熟茶和生茶，分別加10倍水80 ℃提取2次，每次1 h，過濾，茶渣再加入8倍量的水，80 ℃提取0.5 h，過濾，合并提取液，過300目濾布，濾液減壓真空濃縮，離心，分別得到熟茶上清液和生茶上清液。取熟茶上清液，加入95%乙醇，醇沉，過夜離心，加水復(fù)溶，離心，得上清，噴霧干燥，得到熟茶提取物；取生茶上清液，噴霧干燥得到生茶提取物。熟茶提取物和生茶提取物以4∶1比例混合均勻，得到本次實(shí)驗(yàn)所用普洱茶終提取物。

1.5 分組和干預(yù)方法 將小腸運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)和排便實(shí)驗(yàn)的各50只小鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、普洱茶提取物低、中、高劑量組，各5組，10只/組。以人體推薦量的10倍、20倍和30倍作為普洱茶提取物低(0.5 g/kg BW)、中(1.0 g/kg BW)、高(1.5 g/kg BW)劑量組，正常對(duì)照組和模型對(duì)照組給予蒸餾水。各組動(dòng)物分別給予相應(yīng)的藥物，按照0.2 mL/10 g的劑量灌胃給藥，連續(xù)14 d。本實(shí)驗(yàn)所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作均經(jīng)過廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.6 模型建立和墨汁給予方法[6]各組動(dòng)物灌胃14 d 后禁食16 h，除正常對(duì)照組給蒸餾水外，其余各組均灌胃給予復(fù)方地芬諾酯(小腸運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)劑量為5 mg/kg BW，排便實(shí)驗(yàn)劑量為10 mg/kg BW)建立實(shí)驗(yàn)性便秘小鼠模型。給予復(fù)方地芬諾酯0.5 h后，各劑量組分別給予含相應(yīng)樣品的墨汁(以墨汁作溶劑)，動(dòng)物均單籠飼養(yǎng)，正常飲水進(jìn)食。正常對(duì)照組和模型對(duì)照組給予墨汁灌胃，墨汁按照0.2 mL/10 g BW給予。

1.7 指標(biāo)檢測(cè)方法

1.7.1 小腸運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn) 給予墨汁25 min 后頸椎脫臼處死動(dòng)物，測(cè)量小腸總長度，計(jì)算墨汁推進(jìn)率。

墨汁推進(jìn)率(%)= 墨汁推進(jìn)長度(從幽門至墨汁前沿)/小腸總長度(幽門至回盲部)×100%。

1.7.2 排便實(shí)驗(yàn) 從灌墨汁開始，記錄每只動(dòng)物首粒排黑便時(shí)間，5 h內(nèi)排黑便粒數(shù)及重量。

2 結(jié)果

2.1 墨汁推進(jìn)率(數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)) 與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組小鼠的墨汁推進(jìn)率轉(zhuǎn)換值降低(P<0.01)，提示模型建立成功。與模型對(duì)照組比較，普洱茶提取物低、中劑量組小鼠的墨汁推進(jìn)率轉(zhuǎn)換值未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，普洱茶提取物高劑量組小鼠的墨汁推進(jìn)率轉(zhuǎn)換值升高(P<0.01)。見表1。

組別墨汁推進(jìn)率/%墨汁推進(jìn)率轉(zhuǎn)換值(X)正常對(duì)照組87 10±10 061 13±0 28模型對(duì)照組51 70±8 220 55±0 10△△普洱茶提取物低劑量組59 20±12 160 64±0 17普洱茶提取物中劑量組65 60±12 870 74±0 22普洱茶提取物高劑量組80 10±14 321 01±0 34??

注：與正常對(duì)照組比較，△△P<0.01；與模型對(duì)照組比較，**P<0.01。

2.2 首次排黑便所需時(shí)間、5 h內(nèi)排黑便粒數(shù)和5 h內(nèi)排黑便重量 與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組小鼠的首次排黑便時(shí)間延長、5 h內(nèi)排黑便粒數(shù)和重量均減少(P<0.01)；與模型對(duì)照組比較，普洱茶提取物低、中、高劑量組小鼠的首次排便時(shí)間縮短、5 h內(nèi)排黑便粒數(shù)增多和黑便重量加重(P<0.05或P<0.01)。見表2。

3 討論

從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，本實(shí)驗(yàn)的低咖啡因普洱茶提取物可以增加小鼠小腸運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)中的墨汁推進(jìn)率、縮短小鼠排便實(shí)驗(yàn)中的首次排便時(shí)間、增多5h內(nèi)排黑便粒數(shù)和增加5 h內(nèi)排黑便重量，具有促進(jìn)小鼠通便的功能。

組別首次排黑便時(shí)間/s5h內(nèi)排黑便粒數(shù)/粒5h內(nèi)排黑便重量/g正常對(duì)照組64 2±30 526 6±5 70 38±0 11模型對(duì)照組230 5±34 5△△10 0±8 4△△0 15±0 15△△普洱茶提取物低劑量組180 7±33 6??16 9±7 9?0 29±0 14?普洱茶提取物中劑量組191 2±40 4?18 6±7 4??0 30±0 13?普洱茶提取物高劑量組119 5±39 4??20 5±3 8??0 34±0 07??

注：與正常對(duì)照組比較，△△P<0.01；與模型對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01。

對(duì)于便秘的治療，西醫(yī)學(xué)主要有灌腸、口服和外用西藥等的方法，中醫(yī)學(xué)主要有口服中藥、針灸治療、推拿按摩等方法[7]。美國結(jié)腸和直腸外科醫(yī)師學(xué)會(huì)(ASCRS)在2016年《臨床實(shí)踐指南：便秘的評(píng)估和管理》中提出：便秘最初的治療是飲食調(diào)整，包括水和膳食纖維的補(bǔ)充[8-9]。所以預(yù)防和治療慢性便秘除了飲食調(diào)配和常用的藥物治療外，飲用具有通便功能的茶類保健品，也是一種較好的選擇，日常調(diào)理方便且易于堅(jiān)持。

本普洱茶提取物具有低咖啡因的特點(diǎn)。茶中含有的咖啡因?qū)Υ竽X有興奮作用，對(duì)心臟有一定的刺激作用，它可以導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞活動(dòng)增高，引起心跳加快、血壓增高等副作用[5]。本普洱茶提取物通過優(yōu)化提取工藝，有效地降低了咖啡因的含量，具有輔助小鼠通便的功能，具有一定的開發(fā)價(jià)值。對(duì)于通便的作用機(jī)理，還需后續(xù)進(jìn)一步研究。

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