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    12C6+輻射后兵豆根尖細(xì)胞染色體形態(tài)變異分析

    2018-05-18 05:49:57強(qiáng)曉霞張改相張志國
    甘肅農(nóng)業(yè)科技 2018年3期
    關(guān)鍵詞:核率微核重離子

    強(qiáng)曉霞,張改相,張志國

    (蘭州市第四中學(xué),甘肅 蘭州 730050)

    兵豆(Lens culinaris Medic.)俗稱小扁豆,染色體數(shù)目2n=14,豆科蝶型花亞科野豌豆族(Vicieae)兵豆屬(Lens)雙子葉一年生草本植物。兵豆含多種天然活性物質(zhì)及維生素A、E、K等,營養(yǎng)豐富,食用價值高[1]。兵豆產(chǎn)量較低,輻射育種是選育高產(chǎn)新品種的有效途徑[2]。我們使用不同劑量的12C6+離子輻射兵豆干種子,并觀察輻射后M1代、M2代根尖細(xì)胞染色體形態(tài)差異。

    1 材料與方法

    1.1 供試材料

    供試兵豆種子由甘肅省農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物研究所提供。

    1.2 試驗方法

    1.2.1 輻射處理 將兵豆干種子固定于有機(jī)玻璃盤樣品盤上,通過機(jī)械裝置對樣品進(jìn)行旋轉(zhuǎn)。室溫條件下,利用蘭州重離子加速器裝置對干種子進(jìn)行輻射,加速器的初始能量為80.55 MeV/u的12C6+離子。輻射劑量分別為0(CK)、10、30、60 Gy(gray),其中0 Gy為對照,即不進(jìn)行種子處理。通過以下公式計算輻射劑量。

    D[Gy]=1.6×10-9×LET[keV/um]×F[ions/cm2]×ρ-1[cm3/g][3],式中D表示吸收劑量;LET(linear energy transfer)表示傳能線密度;F表示單位面積的粒子;ρ表示密度。

    1.2.2 種子萌發(fā) 將處理后的M1代和M2代種子隨機(jī)取30粒,放入底部墊有2~3層濾紙的大培養(yǎng)皿中,加入無菌水浸濕濾紙和種子,置25℃光照培養(yǎng)箱中,12 h光照培養(yǎng),培養(yǎng)5~7 d,每天早晚各加水1次,根尖長1~2 cm時為最佳取樣狀態(tài)。

    1.2.3 根尖染色體的取樣和觀察 切下根尖,長約1 cm,置于卡諾固定液(無水乙醇與冰醋酸的質(zhì)量比為3∶1)中固定8 h,蒸餾水沖洗干凈后置于70%的乙醇中,4℃下保存?zhèn)溆?。將固定好的根尖? moL/L的HCl溶液中水解3 min,再用1%的混合酶液(1%纖維素酶和1%果膠酶) 水解5 min,取出置載玻片上,滴卡寶品紅染色1~2 min,蓋好蓋玻片壓片。光學(xué)顯微鏡下觀察根尖分生區(qū)的細(xì)胞,并計數(shù)。

    1.2.4 根尖染色體畸變率的計算 不同輻射劑量處理各觀察根尖30個,每個根尖隨機(jī)選擇細(xì)胞約50個,高倍顯微鏡下鏡檢、拍照,計數(shù),統(tǒng)計包括含有染色體橋、微核、滯后染色體、游離染色體等的畸變細(xì)胞所占的比例。

    圖1 12C6+輻射處理兵豆M1代根尖細(xì)胞染色體微核與染色體畸變

    2 結(jié)果與分析

    2.1 M1代兵豆根尖細(xì)胞核與染色體畸變類型及畸變率

    未經(jīng)輻射處理的兵豆根尖細(xì)胞染色體有絲分裂前期、中期、后期和末期,染色體形態(tài)均正常(圖1 A-D)。經(jīng)過12C6+輻射處理的M1代兵豆根尖細(xì)胞,觀察到細(xì)胞有絲分裂前期單微核與雙微核(圖1 E、F箭頭表示)。中期染色體斷裂,分成兩部分(圖1 G);中期滯后染色及染色體斷片(圖1 H、I),染色體未排列在赤道板中央(圖1 J)。有絲分裂后期染色體單橋與染色體雙橋(圖1 K、L)、染色體橋與微核粘連,后期單微核(圖1 M)。分裂期無規(guī)則排列的染色體(圖1 N)。在M1代根尖細(xì)胞中,出現(xiàn)了各種核與染色體畸變類型,如單微核、多微核、染色體橋連、滯后染色體和不均等分裂等。由表1可以看出,M1代根尖細(xì)胞中的染色體畸變與微核畸變率,隨著輻射劑量的增加而明顯增加,在0~60 Gy的輻射強(qiáng)度范圍內(nèi),60 Gy是最佳輻射劑量,出現(xiàn)各種突變的概率最高。微核一般來源于染色體斷片或由細(xì)胞核向外突出并延伸而成。微核率和染色體畸變率是檢測誘變源的生物效應(yīng)和遺傳效應(yīng)廣泛采用的遺傳損失評估指標(biāo),微核率及染色體畸變率的高低反映了致突變效應(yīng)能力的大小,可以快速檢測染色體受損程度[4-5]。

    表1 M1代兵豆根尖細(xì)胞染色體畸形率和微核率①

    表2 M2代兵豆根尖細(xì)胞染色體畸形率和微核率

    2.2 M2代兵豆根尖細(xì)胞核與染色體畸變率

    觀察了兵豆M2代根尖細(xì)胞核及染色體形態(tài)。在M2代中,這種微核畸變率及染色體畸變率明顯減少(表2)??赡苁怯捎谳椛浜蟠旧w重組、DNA自身修復(fù)等作用,減少了輻射對后代的染色體損傷。但仍然有一部分染色體損傷和變異是不可恢復(fù)的,如DNA片段的缺失,堿基增加、顛換、異位及染色體缺失、倒位等,從而造成了后代表型多樣性[6-7]。

    3 小結(jié)

    在0~60 Gy重離子12C6+輻射范圍之內(nèi),輻射誘變能引起兵豆根尖細(xì)胞核及染色體形態(tài)異常,并隨著輻射劑量的增加,微核畸變率及染色體畸變率明顯升高。60 Gy劑量輻射出現(xiàn)各種核及染色體變異的概率最高。

    參考文獻(xiàn):

    [1]MONDAL M M A, PUTEH A B, MALEK M A, et al.Contribution of morpho-physiological traits on yield of lentil ( Lens culinaris Medik L.)[J].Australian Journal of Crop Science, 2013( 7): 1167-1172.

    [2]ZHOU W Q, WU Z L, ZHANG Y C, et al.Stable inheritance of excellent agricultural traits induced by12C6+heavy-ions in lentil( Lens culinaris Medik.) [J].Czech Journal of Genetics and Plant Breeding, 2015, 51( 1):29-35.

    [3]NAGATOMI S, Characteristics of chrysanthemum mutants regenerated from in Vitro explants irradiated with12C5+ion beam[J].Tokyo Internatinal Exhibition Center,1998, 12: 8-10.

    [4]袁成凌,余增亮.低能重離子生物學(xué)研究進(jìn)展[J].輻射研究與輻射工藝學(xué)報,2004,22(1):1-7.

    [5]劉忠祥,徐大鵬,姚澤恩,等.252Cf裂變中子輻射玉米種子生物學(xué)效應(yīng)初步研究[J].華北農(nóng)學(xué)報,2016, 31( 5): 17-77.

    [6]SHIKAZONO N, SUZUKI C, KITAMURA S, et al.Analysis of mutations induced by carbon ions in Arabidopsis thaliana[J].Journal of Experimental Botany,2005, 56: 587-596.

    [7]TANAKA A, SHIKAZONO N, HASE Y.Studies on biological effects of ion beams on lethality,molecular nature of mutation, mutation rate, and spectrum of mutation phenotype for mutation breeding in higher plants[J].Journal of Radiation Research, 2010, 51: 223-233.

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