活體采卵技術(shù)在牛高效快繁中的應(yīng)用

佟桂芝 宋斌 王洪寶 黃紅

摘要：?；铙w采卵（OPU）是借助超聲波或內(nèi)窺鏡觀察，直接從活體母牛卵巢上抽取卵母細(xì)胞的技術(shù)，它與體外受精和胚胎移植（ET）等技術(shù)結(jié)合，可反復(fù)從有較高遺傳價(jià)值良種母牛體內(nèi)采集卵母細(xì)胞生產(chǎn)胚胎，即從高遺傳價(jià)值良種母牛采集卵母細(xì)胞生產(chǎn)胚胎，進(jìn)行胚胎移植具有生產(chǎn)成本低效率高的優(yōu)勢(shì)。

關(guān)鍵詞：母牛；OPU；體外受精；胚胎移植

中圖分類號(hào)：S823.3

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

文章編號(hào)：2095-9737（2018）01-0017-01

活體采卵技術(shù)是20世紀(jì)90年代發(fā)展起來的一項(xiàng)新型胚胎生產(chǎn)技術(shù)。1988年，Pieter首次報(bào)道了牛的B超活體采卵技術(shù)。卵泡資源的高效利用，獲取種源明確的卵母細(xì)胞，結(jié)合體外受精，提供可用卵母細(xì)胞和胚胎。獲得大量遺傳系譜明確的胚胎，降低胚胎生產(chǎn)成本；充分挖掘繁殖潛力；引進(jìn)品種的高效利用；可使用于出生三個(gè)月以上的犢牛、育成牛、成年牛、老齡牛，懷孕三個(gè)月以內(nèi)的牛；超排不起作用的牛以及輸卵管和子宮有疾病失去繁殖能力的牛；為胚胎T程的其他相關(guān)研究如核移植，轉(zhuǎn)基因，性別控制等提供合適的研究材料。

1 牛活體采卵方法

1.1 內(nèi)窺鏡法

操作者將一手臀伸入直腸內(nèi)→將套筒和穿刺棒消毒后送入陰道到穹窿上部→用力推動(dòng)穿刺棒使套筒同時(shí)穿過穹窿進(jìn)入腹腔→抽出穿刺棒送人探棒一直腸內(nèi)的手將卵巢拉至套管前端→打開顯示屏觀察卵巢形態(tài)→搜尋到2～8 cm的卵泡后，推動(dòng)采卵針刺入卵泡內(nèi)將卵母細(xì)胞吸出收集在集卵管內(nèi)→一顯微鏡下檢出卵母細(xì)胞。

優(yōu)點(diǎn)：直觀、清晰地觀察卵巢上的卵泡、黃體以及表面狀態(tài)，可準(zhǔn)確選擇符合要求的卵泡進(jìn)行采集，極少發(fā)生損傷卵巢實(shí)質(zhì)與其他組織，回收率高等。

缺點(diǎn)：工作量大，對(duì)陰道損傷較大，重復(fù)采卵的時(shí)間間隔較長(zhǎng)，操作前需作饑餓處理等。

1.2 超聲波法

母牛作硬膜外麻醉→將→手臂伸入直腸內(nèi)→將探棒涂布耦合劑送至陰道內(nèi)前端→直腸內(nèi)的手將卵巢拉至探頭部位→打開B超儀觀察卵巢形態(tài)→搜尋到2～8 mm的卵泡，將其放置采卵線上→開動(dòng)抽吸泵，推動(dòng)采卵針刺人卵泡內(nèi)，將卵母細(xì)胞吸出。

優(yōu)點(diǎn)：采卵率高，對(duì)卵巢損傷小，對(duì)供體牛的繁殖性能無影響，采卵間隔時(shí)間短等。

缺點(diǎn)：設(shè)備價(jià)格高，對(duì)操作者要求高。

2 影響牛OPU效果的主要因素

2.1 供體牛

除了患有卵巢疾病或妊娠3～4月齡以后的牛，幾乎所有2月齡以上的母牛都可作為供體來使用。妊娠母牛也可作為OPU的供體母牛，且對(duì)妊娠無不良影響。

對(duì)于犢牛的活體采卵，一般預(yù)先激素處理，激素處理不僅能夠提高卵泡數(shù)和卵母細(xì)胞數(shù)，而且能夠提高卵母細(xì)胞的質(zhì)量及后續(xù)胚胎的發(fā)育能力。

2.2 外源激素

用FSH預(yù)處理供體母牛不僅可以增加卵母細(xì)胞的回收率，而且能夠提高卵母細(xì)胞的質(zhì)量。用PMSG處理供體母牛，發(fā)現(xiàn)卵巢的卵泡變大，直徑5—10 mm的中等卵泡較多，有利于采卵，且卵母細(xì)胞的回收率也提高。

2.3 采卵頻率

每周采兩次獲取的卵母細(xì)胞數(shù)多于每周采1次，且卵母細(xì)胞的質(zhì)量較高。采卵頻率與激素的處理相關(guān)：激素處理每周采1次和無激素處理每周采2次，可采卵泡數(shù)無顯著差異。

2.4 其他因素

除了受上述因素影響外，還受其他因素的影響，如供體牛的飼養(yǎng)管理、供體牛所處的發(fā)情周期、繁殖障礙（輸卵管閉塞、子宮機(jī)能不全等）、季節(jié)與氣候、真空泵的壓力等。

采用人工授精：一頭優(yōu)質(zhì)母牛每年只能生產(chǎn)一頭牛犢；利用屠宰場(chǎng)卵巢：無法跟蹤其遺傳性能，系譜不明。利用超排技術(shù)：一頭牛每年最多能生產(chǎn)20枚左右胚胎，年均產(chǎn)犢數(shù)（按50%的受孕率計(jì)算），一頭優(yōu)質(zhì)母牛每年只能生產(chǎn)10頭牛犢；利用OPU技術(shù)：同時(shí)運(yùn)用良種母牛和公牛；一頭牛每年能生產(chǎn)200枚以上胚胎，年均產(chǎn)犢數(shù)（按50%的受孕率計(jì)算），一頭優(yōu)質(zhì)母牛每年只能生產(chǎn)100頭牛犢；能夠跟蹤其遺傳性能；現(xiàn)繁殖技術(shù)中效率最高。

3 應(yīng)用前景

OPU和IVF - ET結(jié)合已經(jīng)成為歐美和大洋洲等畜牧業(yè)發(fā)達(dá)國(guó)家擴(kuò)大良種牛群的重要繁殖技術(shù)，已經(jīng)用于商業(yè)化生產(chǎn)。OPU結(jié)合分離X、Y精子的性別控制技術(shù)可為大規(guī)模工廠化生產(chǎn)體外性控胚胎開辟新途徑。OPU作為一項(xiàng)重要繁殖技術(shù)，對(duì)加速良種牛的繁育速度，優(yōu)化牛群結(jié)構(gòu)，為推動(dòng)畜牧業(yè)及相關(guān)產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展將發(fā)揮重要作用。

種源是畜牧業(yè)發(fā)展的根基和命脈。當(dāng)前我國(guó)畜牧生產(chǎn)中良種覆蓋率僅35%左右，有近85%是從國(guó)外引進(jìn)。畜禽種業(yè)正面臨著國(guó)際跨國(guó)種業(yè)集團(tuán)種源壟斷和產(chǎn)品進(jìn)入的雙重壓力。挖掘與利用動(dòng)物種質(zhì)資源、揭示繁育機(jī)理、創(chuàng)新育種方法、實(shí)現(xiàn)高效快繁已成為當(dāng)前我國(guó)畜牧業(yè)可持續(xù)發(fā)展的頭等大事。