雅安藏茶水提物的降脂活性研究

唐皓迪　顏同文　羅曉琳　吳俊洋　楊天兵　曾茂　郝軍莉　王丹

摘要：為探究雅安藏茶水提物的降脂活性，利用高脂飲食誘導(dǎo)，成功構(gòu)建高脂小鼠模型，按照0.2-0.4mL/（10g·bw）的劑量經(jīng)口灌胃藏茶的水提取物，3個(gè)月后分別檢測(cè)各治療組小鼠血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C以及Glu指標(biāo)，分析肝臟的病理形態(tài)與對(duì)照組進(jìn)行比較。結(jié)果顯示，和高脂空白組相比，治療組小鼠血清中的TC、LDL-C、Glu含量顯著降低（P<0.05）；其中高劑量治療組LDL-C降低極顯著（P<0.01），HDL-C含量顯著上升（P<0.05）；而治療組小鼠血清中TG含量的降低和低劑量治療組HDL-C含量的增高均無(wú)顯著性（P>0.05）。另外，和高脂空白組相比，預(yù)防組小鼠血清中的TC、LDL-C、Glu含量顯著降低（P<0.05），其中TC、LDL-C降低極顯著（P<0.01），HDL-C含量也顯著上升（P<0.05），而TG含量降低不顯著（P>0.05），這與治療組結(jié)果相似。由此可見(jiàn)，藏茶水提物不僅可降低高脂血癥小鼠的血脂、血糖水平，而且對(duì)高脂飲食具有一定的調(diào)節(jié)作用。

關(guān)鍵詞：雅安藏茶：小鼠高脂模型：降脂

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1674-5124（2018）02-0062-05

0引言

隨著人們生活水平的提高，高脂高糖飲食造成的向心性肥胖、非酒精性脂肪肝、異常葡萄糖代謝、高血壓、脂代謝紊亂等代謝綜合征（metabolicsyndrome，MS）的發(fā)病率逐年升高，且在年輕人中最為明顯。由此引起的心腦血管疾病已成為危害人類健康的主要?dú)⑹?，脂代謝與健康的關(guān)系越來(lái)越受到人們的重視。因此，開發(fā)具有降脂功能的飲食，對(duì)于預(yù)防和改善高脂血癥具有重要意義。黑茶是中國(guó)六大茶類之一，因其特有的風(fēng)味、耐沖泡以及保健功能越來(lái)越受到人們的關(guān)注。黑茶中目前最被人熟知且研究最為廣泛的是普洱茶。如肖凱等探討了普洱茶水提取物對(duì)大鼠非酒精性脂肪肝病的干預(yù)作用，其結(jié)果表明，普洱茶水提取物具有明顯降低血脂，改善肝臟脂肪變性的作用。而和普洱茶相比，同樣具有上千年的飲用歷史和深厚文化底蘊(yùn)的雅安藏茶，人們知之甚少。

雅安藏茶，是指產(chǎn)于雅安專供藏區(qū)的一種茶。藏茶屬于最典型的黑茶，具有解膩、助消化等功效。目前，針對(duì)雅安藏茶的研究主要集中在風(fēng)味成分分析、制作工藝改良等方面。如證明，雅安藏茶中富含豐富的茶多酚、兒茶素以及茶黃素、茶紅素、茶褐素等有效成分，并且隨著儲(chǔ)藏時(shí)間的延長(zhǎng)，茶葉中的茶褐素含量逐年增加。而針對(duì)雅安藏茶的降脂效果及其作用機(jī)制的研究相對(duì)較少。因此，本文在構(gòu)建高脂模型的基礎(chǔ)上，探究藏茶的降脂活性，為深入揭示其作用機(jī)制和開發(fā)具有保健功能的藏茶飲料提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1材料與儀器

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

54只6～8周齡，雄性，（20±2）g，SPF級(jí)昆明小鼠，購(gòu)自四川達(dá)碩生物科技有限公司，公司科技部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證編號(hào)：SCXK（川）2008-24。

1.2茶葉水提物制備

稱取雅安藏茶5g，打成粉后加入煮沸的蒸餾水50mL，水溫為90-100℃，靜置30s，過(guò)濾茶渣收集茶水；向茶渣中再次加入煮沸蒸餾水50mL，靜置40s，重復(fù)3次后，將3次收集的茶水混合、備用。

1.3藥品與試劑

動(dòng)物高脂飼料配方為膽固醇1%，膽鹽0.2%，豬油10%，蛋黃粉10%，尿嘧啶0.1%，基礎(chǔ)飼料78.7%。TC、TG、LDL-C、HDL-C、Glu檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.4實(shí)驗(yàn)儀器

SB-JS-2型潔凈工作臺(tái)，上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠；Xmark型酶標(biāo)儀，Bio-RAD公司：CKX41型倒置顯微鏡，日本OLYMPUS公司：SC-3610型低速離心機(jī)，科大創(chuàng)新股份有限公司：JJ-2組織搗碎勻漿機(jī)，常州國(guó)華電器有限公司；LeicacM1860冷凍切片機(jī)，德國(guó)萊卡：石蠟切片機(jī)浙江金華市科迪儀器設(shè)備有限公司，K XW-80A微型漩渦混合儀，上海滬西儀器分析廠；電子天平，上海精科稱量?jī)x器廠；以及96孔血清凝血板，計(jì)數(shù)器，微量加樣器，灌胃針，手術(shù)剪等。

2實(shí)驗(yàn)方法

2.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及處理

首先將54只雄性昆明小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、預(yù)防組、高脂模型組，其中對(duì)照組12只，喂食普通飼料；預(yù)防組10只，喂食高脂飼料，同時(shí)灌胃藏茶水提物；高脂模型組32只，喂食高脂飼料，構(gòu)建飲食誘導(dǎo)高脂模型，時(shí)間為60d。分別從對(duì)照組和高脂模型組中隨機(jī)選出2只小鼠進(jìn)行血脂及肝臟病歷切片檢測(cè)以判斷高脂模型是否構(gòu)建成功。建模成功后，將剩余30只高脂模型小鼠再按照每組10只分為高脂空白組、低劑量治療組、高劑量治療組3個(gè)組，此時(shí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物共有5組，如表1所示。各組分別采用經(jīng)口灌胃給藥法，灌胃生理鹽水、藏茶水提物，1次/d，共90d。

2.2小鼠日常行為

注意觀察并記錄小鼠在實(shí)驗(yàn)期間的進(jìn)食、飲水，行為等變化。實(shí)驗(yàn)期間室內(nèi)通風(fēng)良好，自然晝夜照明，氨濃度<20mg/L。相對(duì)濕度為40%-70%，室溫保持在18～22℃。各組小鼠均自由進(jìn)食、飲水。

2.3小鼠體重監(jiān)測(cè)

實(shí)驗(yàn)初始，每只小鼠進(jìn)行標(biāo)記、稱重；實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，每隔7d稱取、記錄每只小鼠的體重。

2.4血脂、血糖檢測(cè)

末次給食后，小鼠禁食、不禁水，12h后眼球取血，頸椎脫臼處死小鼠。全血室溫靜置3h，待血細(xì)胞析出后以3000r/min離心15min，小心吸取血清樣品，待檢測(cè)。根據(jù)檢測(cè)試劑盒中的說(shuō)明書，利用酶標(biāo)儀分析血清中TG、TC、LDL-C、HDL-C及Glu等指標(biāo)。

2.5肝組織形態(tài)學(xué)觀察

小鼠處死后立刻取出其肝臟最大葉距邊緣5mm處的肝組織，用10%中性甲醛溶液固定、脫水、二甲苯透明，石蠟包埋，切成6μm厚度，HE染色后，在光學(xué)顯微鏡下觀察，記錄。

2.6數(shù)據(jù)分析

使用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件分析實(shí)驗(yàn)，兩組比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，顯著性界定為0.05。計(jì)量資料數(shù)據(jù)以x±s表示。

3結(jié)果與分析

3.1建模期雅安藏茶水提物對(duì)小鼠體重影響

建模期間各組小鼠體重都隨飼養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)而增加。和對(duì)照組相比，高脂組小鼠體重增長(zhǎng)陜速，脂肪層明顯增厚，清晰可辨（如圖1所示），說(shuō)明高脂飲食確可誘導(dǎo)小鼠體重增加：而灌胃了藏茶水提物的預(yù)防組雖使用高脂飲食誘導(dǎo)，小鼠體重增加仍很緩慢，如圖2所示。提示雅安藏茶可能具有降脂、減重作用。

3.2高脂模型組血脂水平分析

高脂飼料誘導(dǎo)60d后，從對(duì)照組和高脂組各隨機(jī)選出2只小鼠，眼眶取血、分離血清，檢測(cè)小鼠血清中的TG、TC、HDL-C指標(biāo)，各組平均值，結(jié)果顯示對(duì)照組血清中的TG、TC、HDL-C含量分別為1.25，2.48，1.76mmol/L；高脂模型組分別為1.72，4.70，1.63mmol/L。高脂組TG和TC含量較對(duì)照組分別增高了37.6%和89.52%，而和對(duì)照組相比，高脂模型組的HDL-C降低了7.38%，如圖3所示。

3.3高脂模型組小鼠肝臟病理形態(tài)的觀察

如圖4所示，對(duì)照組小鼠肝組織肝小葉結(jié)構(gòu)正常，肝細(xì)胞規(guī)則排列，肝細(xì)胞大小正常，胞核位于細(xì)胞中央。高脂組小鼠肝細(xì)胞則以彌漫性小泡性脂變?yōu)橹鳎兄究张荩ㄒ?jiàn)圖中紅圈內(nèi)的黑色箭頭所指），結(jié)合體重增長(zhǎng)曲線和血脂三項(xiàng)分析的結(jié)果，判定高脂小鼠建模成功。

3.4雅安藏茶水提物的降脂、降糖活性研究

各組小鼠灌胃處理90d后，眼眶取血并檢測(cè)各組血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C和Glu的含量，結(jié)果如表2所示。與高脂空白組相比，治療組小鼠血清中的TC、LDL-C和Glu含量顯著降低（P<0.05），其中高劑量治療組LDL-C降低極顯著（P<0.01），同時(shí)HDL-C含量顯著上升（P<0.05），而低劑量治療組HDL-C含量增加不顯著（P>0.05）；高、低劑量治療組TG含量降低與高脂空白組相比均不顯著（P>0.05）。和高脂空白組相比，預(yù)防組血清中的TC、LDL-C和Glu含量顯著降低（P<0.05），其中TC、LDL-C降低極顯著（P<0.01），HDL-C含量也顯著上升（P<0.05），而TG含量降低差異不顯著（P>0.05），與治療組結(jié)果相似。

4結(jié)束語(yǔ)

調(diào)整飲食和改善生活方式是各種高脂血癥治療的基礎(chǔ)，尤其對(duì)原發(fā)性高脂血癥患者，應(yīng)首選飲食治療。因此，開發(fā)具有降脂功能的飲食，對(duì)于預(yù)防和改善高脂血癥有一定的應(yīng)用價(jià)值。本文利用高脂飲食誘導(dǎo)，成功構(gòu)建了小鼠高脂模型，并以此為研究基礎(chǔ)，探究雅安藏茶水提物對(duì)高脂飲食小鼠血脂、血糖的影響。結(jié)果顯示，高脂模型小鼠灌胃雅安藏茶水提物后，其血清中TC、TG、LDL-C、Glu等各項(xiàng)指標(biāo)都較高脂空白組低，其中高劑量治療組血清中的TC和Glu含量的降低具有顯著性（P<0.05），LDL-C含量降低極顯著（P<0.01），而HDL-C含量顯著上升（P<0.05），高劑量治療組結(jié)果優(yōu)于低劑量治療組，這說(shuō)明藏茶水提取物具有降脂、降糖活性。

而預(yù)防組小鼠和高脂空白組小鼠雖同時(shí)喂食高脂飼料，但預(yù)防組小鼠從開始就灌胃雅安藏茶水提物，在雅安藏茶水提物的干預(yù)下，預(yù)防組小鼠的體重、血清中TC、TG、LDL-C、Glu等各項(xiàng)指標(biāo)均較高脂空白組低，其中TC、LDL-c、Glu的降低具有顯著性，HDL-C含量和高脂空白組相比也顯著增加。HDL-C又稱高密度脂蛋白一膽固醇，其作用為轉(zhuǎn)運(yùn)磷脂和膽固醇，其含量與動(dòng)脈管腔狹窄程度呈顯著的負(fù)相關(guān)，目前HDL-C含量減少已被確定是冠心病發(fā)生的危險(xiǎn)因素之一。因此，長(zhǎng)期飲用雅安藏茶不僅有利于改善血脂水平，而且對(duì)于脂代謝異常而引起的心腦血管疾病具有一定的預(yù)防作用。

為進(jìn)一步探究雅安藏茶降脂、降糖的作用機(jī)制，課題組下一步將檢測(cè)各組小鼠肝臟中與糖、脂代謝密切相關(guān)的基因，如ACC、MCD、MCAD、CPT-1、FAS等mRNA的表達(dá)水平。如Shimamura等的研究表明普洱茶提取物能顯著減少小鼠血清中TG水平，同時(shí)降低小鼠肝臟中SREBP-lc和FASmRNA的表達(dá)水平。其結(jié)果表明，普洱茶提取物能夠通過(guò)下調(diào)SREBP-lc及其相關(guān)因子水平減少脂肪生成。另外，還有文獻(xiàn)報(bào)道高脂血癥大鼠腸道出現(xiàn)了菌群失調(diào)，雙歧桿菌、乳酸桿菌和腸球菌數(shù)量明顯減少，腸桿菌數(shù)量則相對(duì)增多，腸道菌群失調(diào)可加重脂質(zhì)代謝紊亂，并且雙歧桿菌、乳酸桿菌和腸球菌數(shù)量的減少可以削弱血中膽固醇被轉(zhuǎn)化利用的過(guò)程，使血脂升高。由此可見(jiàn)，腸道菌群影響著宿主的脂肪代謝和儲(chǔ)存以及能量平衡的調(diào)控，是高脂血癥等相關(guān)代謝疾病發(fā)生的一個(gè)重要中間環(huán)節(jié)。因此，課題組還將利用收集的各組小鼠糞便，從微生態(tài)學(xué)角度揭示腸道菌群在高脂飲食誘導(dǎo)的高脂血癥發(fā)展中的動(dòng)態(tài)變化及其原因，這不僅為以腸道菌群為靶點(diǎn)進(jìn)行的膳食營(yíng)養(yǎng)干預(yù)提供理論參考：同時(shí)為研究雅安藏茶降脂、降糖的作用機(jī)制研究提供理論及實(shí)驗(yàn)依據(jù)。