大豆低聚糖檢測方法優(yōu)化初探

詹曉丹

摘要：大豆作為重要的副食品原材料、油料以及飼料原材料，其中除了含有大量的蛋白質(zhì)和油脂之外，還含有一定量的可溶性糖類，最近的研究表明，這些糖類可以起到促進內(nèi)源性雙歧桿菌活動的作用，可以使內(nèi)源性雙歧桿菌活性增強，起到更好的抑制結(jié)腸內(nèi)腐敗菌生長的積極作用。本實驗對大豆低聚糖國標(biāo)檢測方法中的流動相比例以及液相色譜條件，包括柱溫和檢測器溫度等進行了一定程度的調(diào)整，回歸曲線獲得了較好的線性表現(xiàn)，回收率也達到87%—111%，為實驗室工作人員找尋更加快速、準(zhǔn)確、經(jīng)濟的大豆低聚糖檢測方法提供一些參考和幫助。

關(guān)鍵詞：大豆；低聚糖；高效液相色譜；反相色譜

中圖分類號：S5 65.1

文獻標(biāo)識碼：B

文章編號：2095-9737（2018）03-0014-01

大豆低聚糖一般在酸性條件下的熱穩(wěn)定性較佳，目前我國對于大豆低聚糖的檢測分析一般是使用色譜法，常用方法一般包括定性以及粗略定量的紙色譜法、薄層色譜法及準(zhǔn)確定量的氣相色譜法、離子交換色譜法以及高效液相色譜檢測方法。

目前，我國檢測大豆低聚糖一般采用國家推薦性標(biāo)準(zhǔn)《GB/T 22491-2008大豆低聚糖》中附錄A規(guī)定的高效液相色譜法，采用反相鍵合相色譜進行檢測。但在試驗中發(fā)現(xiàn)，這一國標(biāo)推薦的方法存在檢測時間比較長，基線穩(wěn)定性不佳，數(shù)據(jù)精密度不高，重復(fù)率達不到理想效果，回收率不穩(wěn)定等問題。針對以上所述國標(biāo)方法中存在的種種問題，為了達到縮短檢測時間，使待測組分達到更好的分離效果，同時提高精密度和準(zhǔn)確度的目的，本實驗對大豆低聚糖檢測方法的某些步驟和參數(shù)進行了一定程度的調(diào)整，為實驗室工作人員找尋更加快速、準(zhǔn)確、經(jīng)濟的大豆低聚糖檢測方法提供一些參考和幫助。

1 實驗原理

高效液相反相鍵合相色譜法測定大豆中低聚糖含量的原理如下：色譜的固定相配體交換樹脂選用經(jīng)過高強度磺化處理過的陰離子交換樹脂，具有極強的電負(fù)性，而其上帶有活潑性較強的金屬元素，這些金屬元素極容易失去電子，形成金屬陽離子。金屬陽離子與樹脂上強電負(fù)性的磺酸基發(fā)生作用，由于正負(fù)電荷的吸引力作用，金屬離子能夠牢固的被固定在樹脂上不至于被洗脫。大豆低聚糖分子一般帶有負(fù)電荷，實驗時與表面帶有金屬離子的樹脂發(fā)生作用，低聚糖中的負(fù)電荷與金屬離子的正電荷發(fā)生作用，從而留存于樹脂表面，但低聚糖與金屬離子的相互作用沒有金屬離子與磺化樹脂的作用力那么強，因此在實驗過程中逐步被流動相洗脫，進而達到與其他組分分離的目的。

2 實驗材料與方法

2.1 儀器及試劑

蔗糖標(biāo)準(zhǔn)樣品；棉籽糖標(biāo)準(zhǔn)樣品；水蘇糖標(biāo)準(zhǔn)樣品；乙腈（色譜純）；無水乙醇（色譜純）；分析天平（d=0.O01 g）；高效液相色譜（附示差折光檢測器）；一級實驗室用水。

2.2 實驗方法

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：用蔗糖標(biāo)準(zhǔn)樣品、棉籽糖標(biāo)準(zhǔn)樣品和水蘇糖標(biāo)準(zhǔn)樣品用60%的乙腈溶液配置成0.01 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲備液；再分別配制成一定濃度的蔗糖、棉籽糖、水蘇糖標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，經(jīng)過0. 45 μm濾膜過濾備用。分別使用國標(biāo)方法和優(yōu)化方法進行實驗，依次進樣分別得到各濃度低聚糖的峰面積，以配置濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3 實驗條件

國標(biāo)法參考條件：色譜柱：Kromasil- 100氨基柱；流動相：80%乙腈=20%去離子水；流速：1 mL/min；檢測器：RID示差折光檢測器；色譜柱溫度：30℃；檢測器溫度：30℃；進樣量：10 μL。

優(yōu)化方法參考條件：色譜柱：島津Inertsil氨基柱；流動相：65%乙腈=35%去離子水；流速：1 mL/min；檢測器：RID示差折光檢測器；色譜柱溫度：35℃；檢測器溫度：40℃；進樣量：10 μL。

4 數(shù)據(jù)及分析處理

國標(biāo)方法檢測三種大豆低聚糖的回歸曲線分別為：C=0. 009236A+O. 227： C=0. 009865A+0. 297； C=0. 008988A+0. 346。采用優(yōu)化方法檢測三種大豆低聚糖的回歸曲線分別為：C=0. 009769A+O. 289； C=0. 009932A+0. 381； C=o.009645A+O.312。重復(fù)進樣檢測精密度，國標(biāo)方法精密度平均為RSD=0.82%，優(yōu)化方法平均為0.89%。國標(biāo)方法檢測過程中，出現(xiàn)了倒峰的現(xiàn)象，并且實驗時間較長為30 min，優(yōu)化實驗中降低了流動相中乙腈的含量的情況下，各峰能夠較好的分離并且全部峰都能夠在15 min內(nèi)完成出峰。

5 回收率試驗

在已知低聚糖含量的大豆粉碎樣品中定量加入三種低聚糖的標(biāo)準(zhǔn)品，按照優(yōu)化后的實驗方法進行檢測，計算回收率，蔗糖回收率在89%—96%，棉籽糖的回收率為87%—108%，水蘇糖的回收率為92% -111%均達到回收的要求。

6 結(jié)論

優(yōu)化后的大豆低聚糖檢測方法能夠達到實驗的精度要求，并且改善了大豆低聚糖出峰的分離，并且有效縮短了試驗時間，提高了效率，能夠準(zhǔn)確的測定大豆中各類低聚糖的含量。