PI3K/mTOR抑制劑NVP—BEZ235對乳腺癌小鼠移植瘤生長的抑制作用

王歡歡 丁米娜 姜春如 陳麗艷

摘 要：乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一。NVP-BEZ235是PI3K和mTOR雙重靶向抑制劑，具有抑制多種腫瘤惡性進(jìn)展的作用[1]，但機(jī)制仍不明確。因此，我們利用乳腺癌MCF-7細(xì)胞建立小鼠移植瘤模型，觀察不同濃度NVP-BEZ235對移植瘤生長的影響，并初步探討其機(jī)制。

關(guān)鍵詞：乳腺癌；小鼠；移植瘤

1 材料

裸鼠30只購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司，NVP-BEZ235購自Selleck公司，MCF-7由延邊大學(xué)腫瘤研究中心提供。

2 方法

2.1 MCF-7乳腺癌移植瘤模型的建立與分組給藥

培養(yǎng)乳腺癌MCF-7細(xì)胞，消化離心，制備細(xì)胞懸液，用PBS調(diào)整細(xì)胞密度為5×10.6/mL，每只裸鼠乳腺脂肪墊下注射0.2mL，建立裸鼠乳腺癌移植瘤模型。30只實(shí)驗(yàn)裸鼠隨機(jī)分為3組，（1）對照組：生理鹽水0.1mL，灌胃；（2）NVP-BEZ235高劑量組：60mg/kg/day，灌胃，（3）NVP-BEZ235低劑量組：30mg/kg/day，灌胃。各組均每天一次。

2.2 觀察藥物對移植瘤生長的影響

給藥期間，每2天用游標(biāo)卡尺測量裸鼠腫瘤的最長徑（a）和橫徑（b），計算腫瘤體積V=a×b.2，繪制腫瘤生長曲線。

2.3 蛋白免疫印跡檢測Ki-67、LC3B的表達(dá)

腫瘤組織勻漿提取蛋白，BCA法測定蛋白含量，SDS-PAGE電泳分離，轉(zhuǎn)膜，牛奶封閉，一抗4℃過夜，二抗孵育2h，ECL化學(xué)發(fā)光，凝膠呈像儀檢測結(jié)果，使用Image J軟件進(jìn)行半定量分析。

2.4 統(tǒng)計方法

應(yīng)用SPSS軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，以P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 NVP-BEZ235抑制MCF-7乳腺癌裸鼠移植瘤的生長

接種后第4天各組均見腫瘤生長，成瘤率100%，移植瘤生長基本相同。隨著時間的延長，腫瘤體積逐漸增大，20-28d對照組生長明顯快于給藥組（P均<0.05），高劑量組腫瘤生長最慢，各組腫瘤生長情況見圖1。結(jié)果表明NVP-BEZ235對裸鼠體內(nèi)的腫瘤有明顯抑制作用。

3.2 NVP-BEZ235對裸鼠移植瘤中Ki-67、LC3B的影響

蛋白免疫印跡結(jié)果顯示，NVP-BEZ235給藥組腫瘤組織中增殖相關(guān)蛋白Ki-67、LC3B的表達(dá)明顯低于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05，P<0.05），這表明NVP-BEZ235抑制腫瘤組織增殖可能與誘導(dǎo)細(xì)胞自噬有關(guān)。見圖2。

4 討論

目前研究表明，自噬與腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生自噬是化療藥物抑制腫瘤細(xì)胞增殖的重要機(jī)制之一。我們的前期研究表明，NVP-BEZ235體外應(yīng)用對乳腺癌細(xì)胞具有抑制增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡及自噬的效應(yīng)[2]。因此本論文進(jìn)一步探討了其對MCF-7乳腺癌小鼠移植瘤生長的抑制作用。本研究首先構(gòu)建了MCF-7乳腺癌裸鼠移植瘤模型，并檢測了NVP-BEZ235對移植瘤的生長抑制作用。研究結(jié)果顯示，NVP-BEZ235對MCF-7乳腺癌裸鼠移植瘤具有良好的生長抑制作用，并且能夠下調(diào)移植瘤組織中Ki-67和LC3B的表達(dá)。LC3B是自噬重要的標(biāo)志性蛋白，因此研究結(jié)果提示，NVP-BEZ235可誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞發(fā)生自噬。

綜上所述，NVP-BEZ235能夠有效抑制MCF-7乳腺癌裸鼠移植瘤生長可能與其抑制腫瘤細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞自噬有關(guān)，具體作用機(jī)制有待于進(jìn)一步深入探討。

參考文獻(xiàn)：

[1] Li Y， Zhao H， Wang Y， et al. Isoliquiritigenin induces growth inhibition and apoptosis through downregulating arachidonic acid metabolic network and the deactivation of PI3K/Akt in human breast cancer[J]. Toxicol Appl Pharmacol， 2013，272：37-48.

[2]王鶴儒，于洋，陳麗艷.PI3K/mTOR抑制劑NVP-BEZ235抑制人乳腺癌細(xì)胞增殖及促進(jìn)細(xì)胞自噬[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2016，36（8）：1139-1141.