《病原生物學(xué)》實(shí)驗(yàn)教學(xué)探索

鄒秀月

[摘 要] 通過(guò)病原生物學(xué)系列實(shí)驗(yàn)，樹(shù)立護(hù)士生有菌、無(wú)菌觀(guān)念，培養(yǎng)無(wú)菌操作技術(shù)。實(shí)現(xiàn)課程內(nèi)容與職業(yè)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)接，以職業(yè)需求為導(dǎo)向、以實(shí)踐能力培養(yǎng)為重點(diǎn)，培養(yǎng)技術(shù)技能型護(hù)士。

[關(guān) 鍵 詞] 無(wú)菌觀(guān)念；有菌觀(guān)念；無(wú)菌技術(shù)

[中圖分類(lèi)號(hào)] G712 [文獻(xiàn)標(biāo)志碼] A [文章編號(hào)] 2096-0603（2018）05-0123-01

一、樹(shù)立有菌觀(guān)念

微生物是肉眼看不見(jiàn)，經(jīng)顯微鏡或電子顯微鏡放大后才可見(jiàn)的微小生物。病原生物中最常見(jiàn)的微生物是細(xì)菌，雖然單個(gè)細(xì)菌肉眼看不見(jiàn)，但群體的細(xì)菌是肉眼可見(jiàn)的，如菌落。根據(jù)這個(gè)特點(diǎn)，開(kāi)設(shè)系列實(shí)驗(yàn)，樹(shù)立學(xué)生的有菌意識(shí)。

（一）空氣中細(xì)菌的檢查

將已滅菌好的瓊脂平板開(kāi)蓋，讓無(wú)菌的瓊脂培養(yǎng)基暴露于空氣中10分鐘，然后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。次日，觀(guān)察實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

次日，學(xué)生肉眼觀(guān)察到培養(yǎng)基表面有菌落生長(zhǎng)，這些菌落就是空氣中的細(xì)菌掉落進(jìn)去繁殖出來(lái)的，一個(gè)細(xì)菌繁殖成為一個(gè)菌落，記錄細(xì)菌菌落數(shù)，菌落數(shù)的多少說(shuō)明空氣的清潔度。該實(shí)驗(yàn)證明空氣中確實(shí)有細(xì)菌存在。

（二）皮膚上細(xì)菌的檢查

用一根手指在已滅菌好的瓊脂平板的培養(yǎng)基表面輕輕劃線(xiàn)，然后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。次日，觀(guān)察實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

次日，學(xué)生肉眼觀(guān)察到培養(yǎng)基表面有菌落生長(zhǎng)，這些菌落就是手指上的細(xì)菌繁殖出來(lái)的，一個(gè)細(xì)菌繁殖成為一個(gè)菌落，記錄細(xì)菌菌落數(shù)，菌落數(shù)的多少說(shuō)明手指皮膚的清潔度。該實(shí)驗(yàn)證明手指上確實(shí)有細(xì)菌存在。

（三）咽喉部細(xì)菌的檢查

用咳碟法進(jìn)行試驗(yàn)。取一皿血瓊脂平板，打開(kāi)皿蓋，距離培養(yǎng)基5～10 cm處對(duì)著無(wú)菌的培養(yǎng)基咳嗽3～5次，蓋好皿蓋后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。次日觀(guān)察實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

次日，學(xué)生肉眼觀(guān)察到培養(yǎng)基表面有菌落生長(zhǎng)，這些菌落就是咳嗽時(shí)噴出的咽喉部細(xì)菌繁殖出來(lái)的，一個(gè)細(xì)菌繁殖成為一個(gè)菌落。該實(shí)驗(yàn)證明咽喉部確實(shí)有細(xì)菌存在。

取以上這些實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)出來(lái)的細(xì)菌經(jīng)革蘭染色后，在顯微鏡油鏡下觀(guān)察。學(xué)生觀(guān)察到革蘭染色陽(yáng)性和陰性的各種形態(tài)的細(xì)菌。

通過(guò)這樣一系列實(shí)驗(yàn)，學(xué)生從肉眼看不到細(xì)菌個(gè)體到肉眼看到細(xì)菌群體，有菌觀(guān)念從感性認(rèn)識(shí)上升到理性認(rèn)識(shí)，認(rèn)識(shí)得到升華。人們看不見(jiàn)細(xì)菌不等于它不存在，環(huán)境中和人體上都有大量細(xì)菌存在的，護(hù)士生必須牢固樹(shù)立有菌觀(guān)念。

二、樹(shù)立無(wú)菌觀(guān)念

滅菌是指殺滅所有微生物包括細(xì)菌的芽孢。無(wú)菌是無(wú)任何活的微生物，滅菌后的物體就是無(wú)菌的，無(wú)菌需要滅菌來(lái)實(shí)現(xiàn)。

（一）瓊脂培養(yǎng)基的制備

人工培養(yǎng)細(xì)菌需要制備培養(yǎng)基。培養(yǎng)目的菌必須培養(yǎng)在無(wú)菌的培養(yǎng)基上，因此要想培養(yǎng)細(xì)菌得從制備無(wú)菌的培養(yǎng)基開(kāi)始。

（二）培養(yǎng)細(xì)菌

1.滅菌實(shí)驗(yàn)

按需要量稱(chēng)量各種物質(zhì)配制好培養(yǎng)基，然后進(jìn)行高壓蒸汽法滅菌，以無(wú)菌操作分裝好培養(yǎng)基做好備用。取兩皿培養(yǎng)基，甲皿中轉(zhuǎn)種上細(xì)菌，乙皿不種，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。次日觀(guān)察甲、乙兩皿培養(yǎng)基上細(xì)菌生長(zhǎng)情況。

次日，觀(guān)察到甲皿中出現(xiàn)細(xì)菌菌落，乙皿無(wú)細(xì)菌菌落，說(shuō)明高壓蒸汽法確實(shí)殺滅了培養(yǎng)基中的所有細(xì)菌。

2.滅菌對(duì)照實(shí)驗(yàn)

配制普通瓊脂培養(yǎng)基，甲份進(jìn)行高壓蒸汽法滅菌，乙份不滅菌。將兩份培養(yǎng)基放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。次日，觀(guān)察細(xì)菌生長(zhǎng)情況。

物品要實(shí)現(xiàn)有菌變無(wú)菌需要滅菌，滅菌后的物品才是無(wú)菌的物品。滅菌的方法有多種，病原生物實(shí)驗(yàn)室常用高壓蒸汽滅菌法、燒灼法、煮沸法對(duì)實(shí)驗(yàn)用品進(jìn)行滅菌。臨床用的注射器、輸液器等都是滅菌后獨(dú)立包裝的無(wú)菌包。當(dāng)包裝破損時(shí)，由于環(huán)境中微生物的污染，它們將變成有菌的。因此，使用前必須檢查包裝是否完好。

通過(guò)以上的實(shí)驗(yàn)，提高學(xué)生對(duì)有菌和無(wú)菌的認(rèn)識(shí)，樹(shù)立起有菌和無(wú)菌觀(guān)念。在將來(lái)的工作中，能區(qū)分有菌物品及有菌區(qū)域和無(wú)菌物品及無(wú)菌區(qū)域，避免交叉污染和感染的發(fā)生。

三、學(xué)會(huì)無(wú)菌操作

無(wú)菌操作是指防止微生物進(jìn)入人體或其他物品的操作技術(shù)。在進(jìn)行醫(yī)療技術(shù)操作和微生物實(shí)驗(yàn)時(shí)均需要嚴(yán)格執(zhí)行無(wú)菌操作，防止微生物感染和污染的發(fā)生。

微生物實(shí)驗(yàn)中細(xì)菌轉(zhuǎn)種實(shí)驗(yàn)需要多次進(jìn)行無(wú)菌操作，特別能訓(xùn)練學(xué)生的無(wú)菌操作能力，形成無(wú)菌操作技術(shù)。細(xì)菌轉(zhuǎn)種實(shí)驗(yàn)是學(xué)生樹(shù)立“有菌和無(wú)菌觀(guān)念”，練習(xí)“無(wú)菌操作”最好的實(shí)驗(yàn)?！坝芯?、無(wú)菌、無(wú)菌操作”反復(fù)出現(xiàn)，多次練習(xí)，有利于“有菌、無(wú)菌”觀(guān)念的樹(shù)立，同時(shí)培養(yǎng)“無(wú)菌操作能力。下面以普通瓊脂培養(yǎng)基上轉(zhuǎn)種葡萄球菌為例來(lái)說(shuō)明，具體的實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程見(jiàn)下表。

葡萄球菌轉(zhuǎn)種實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，將待種培養(yǎng)皿放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)，次日觀(guān)察實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可能出現(xiàn)兩種情況：一種是待種培養(yǎng)皿中有菌落生長(zhǎng)，說(shuō)明轉(zhuǎn)種成功；另一種是待種培養(yǎng)皿中無(wú)菌落生長(zhǎng)，說(shuō)明無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖。分析原因，一種是接種環(huán)燒灼后未待其完全冷卻就去取菌種，將菌種燙死；另一種是取菌種時(shí)未取到菌種，從而導(dǎo)致沒(méi)有細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖。

在實(shí)踐教學(xué)中樹(shù)立學(xué)生的有菌、無(wú)菌意識(shí)，形成無(wú)菌技術(shù)，對(duì)詮釋抽象理論教學(xué)不僅有驗(yàn)證作用，而且能讓學(xué)生刻骨銘心地掌握無(wú)菌技術(shù)，并在將來(lái)的醫(yī)療技術(shù)操作中嚴(yán)格執(zhí)行無(wú)菌操作技術(shù)，對(duì)防止醫(yī)源性感染有極其深遠(yuǎn)的意義。

參考文獻(xiàn)：

訾自強(qiáng)，楊秀珍.病原生物與免疫學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2009.