苞葉杜鵑組織培養(yǎng)初步研究

劉敏 陳欣 蔡超 宋斐飛

[摘 要]對(duì)苞葉杜鵑進(jìn)行了組織培養(yǎng)研究，結(jié)果表明：以加入ZT2.0mg/L的WPM培養(yǎng)基效果較好，以莖尖為材料的誘導(dǎo)率較高。

[關(guān)鍵詞]組織培養(yǎng)；苞葉杜鵑

[中圖分類號(hào)]S685.21 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

苞葉杜鵑（Rhododendron redowskianum），又稱云間杜鵑，為杜鵑花科（Ericaceae）、杜鵑花屬（Rhododendron）矮小落葉灌木，株高20cm左右，分枝多，根系發(fā)達(dá)呈墊狀植物。葉互生，長橢圓形，長1-2cm，葉緣具長腺毛?；ㄉ贁?shù)生枝頂，紫紅色，花徑2cm， 花冠五裂，其中一側(cè)裂至基部，至使冠呈左右對(duì)稱狀。花后結(jié)蒴果。苞葉杜鵑在長白山苔原帶具有水土保持和維持生態(tài)平衡的重要作用，為吉林省I類保護(hù)植物。苞葉杜鵑在長白山分布數(shù)量少，在天池附近的旅游區(qū)應(yīng)倍加愛護(hù)，防止踐踏與采摘?；利惪蓯郏裳芯咳斯ぴ耘酁橛^賞花卉。

目前，關(guān)于苞葉杜鵑組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)研究較少，對(duì)此，我們摸索出適合吉林地區(qū)快速繁殖苞葉杜鵑的方法，并建立苞葉杜鵑的苗木生產(chǎn)基地，為園林綠化供應(yīng)苗木。

1 材料和方法

1.1 材料來源

于5月中旬在長白山上，剪取苞葉杜鵑幼嫩枝條，放于水中進(jìn)行室內(nèi)培養(yǎng)，次日接種。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 配置培養(yǎng)基

培養(yǎng)基的配置主要采取以下步驟：

1.2.1.1 溶解瓊脂及蔗糖。用天平準(zhǔn)確稱取8g瓊脂和20g蔗糖，將瓊脂放入小鍋中，加水、加熱溶解，同時(shí)用玻璃棒不斷攪拌，直至沸騰，停止加熱，再把蔗糖放入鍋中，攪拌充分后，將液體倒入大燒杯中。

1.2.1.2 加入WPM培養(yǎng)基母液。分別向大燒杯中加入大量元素、微量元素、鐵鹽、肌醇、有機(jī)溶劑和不同濃度的細(xì)胞分列素（ZT），組合溶液見表1，細(xì)胞分裂素濃度見表2。

1.2.1.3 調(diào)整PH值。將PH值調(diào)到約4.8-5.0。

1.2.1.4 分裝。將已經(jīng)調(diào)好的溶液分裝到洗刷干凈的三角瓶中。

1.2.1.5 培養(yǎng)基滅菌。將三角瓶擺放在高壓滅菌鍋中，接通電源高壓滅菌，當(dāng)溫度達(dá)到121°C，壓力達(dá)到0.105MPa時(shí)，滅菌15min。

1.2.2 苞葉杜鵑組織培養(yǎng)步驟

1.2.2.1 器皿、工具的洗滌。

1.2.2.2 植物材料的表面滅菌。

首先，刷洗、沖洗植物材料。將苞葉杜鵑植株剪成適當(dāng)大小，放在手中加兩滴洗滌精，小心搓洗。放入干凈小燒杯中，再用蒸餾水沖洗。

其次，將清洗干凈的植物材料連同燒杯一起放在工作臺(tái)上，升汞消毒10min，浸泡過程中用干凈玻璃棒不斷攪拌，充分接觸。再用蒸餾水沖洗4-5次，沖洗完畢，便可接種。

1.2.2.3 接種。

整個(gè)過程中實(shí)驗(yàn)環(huán)境及材料均需要無菌操作。將吸水紙鋪在器皿上，將材料用鑷子取出，用剪刀剪成1cm小段，每段上要含有芽，插植到培養(yǎng)基上。

1.2.2.4 培養(yǎng)條件。

將裝有接種材料的三角瓶放到培養(yǎng)室中培養(yǎng)，溫度保持在25°C，采用自然光照。

1.2.2.5 試驗(yàn)觀察。

分別在5月21日、5月29日和6月9日對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行觀察，并記錄染菌、褐化和生長分化情況。

2 結(jié)果與分析

實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3

從表3可以看出，以莖尖誘導(dǎo)無菌芽效果較好，25d后誘導(dǎo)率達(dá)50%，濃度為2.0mg/L的細(xì)胞分裂素（ZT）對(duì)外植體誘導(dǎo)較為適宜，誘導(dǎo)率為56%。

3 結(jié)論與討論

3.1 培養(yǎng)基對(duì)組培的影響

不同植物對(duì)培養(yǎng)基要求不同，大量微量元素、鐵鹽、肌醇、蔗糖的濃度以及pH的變化都會(huì)影響外植體的生長，培養(yǎng)基中NH4+濃度過高，就會(huì)引起植物體褐化；pH的變化則可引起酚類與過氧化酶活性結(jié)合部位的改變，也會(huì)影響植物組織發(fā)生褐化。在實(shí)驗(yàn)過程中充分考慮到苞葉杜鵑喜酸性土壤，因此培養(yǎng)基要調(diào)整其PH值為4.8-5.0。這是苞葉杜鵑組培成功的關(guān)鍵因素之一。

3.2 外植體對(duì)組培的影響

外植體體積過大易污染，不宜采納；而過小，成活率又會(huì)很低。不同的植物、器官和組織，其形態(tài)發(fā)生能力都不相同。此外生理學(xué)的發(fā)育年齡，也對(duì)組織形態(tài)發(fā)生有影響。一般情況幼年比老年的組織形態(tài)發(fā)生能力強(qiáng)，且?guī)Ь?，這也是很重要的規(guī)律之一。

3.3 光照對(duì)組培的影響

光照的作用主要是在形態(tài)形成的誘導(dǎo)方面，它涉及植物細(xì)胞分化的若干重要過程，通過光合作用在特殊的細(xì)胞里積累淀粉，一定量淀粉聚集后，便引起器官發(fā)生。誘導(dǎo)器官形成時(shí)，不需要很強(qiáng)的光，對(duì)多數(shù)植物來說，保持16h光照，8h黑暗是適宜的。而光的波長，對(duì)不同植物的反應(yīng)也有差異。在藍(lán)光下幼苗生長旺盛，根系粗壯；白光下幼苗纖弱；紅光下出苗少。光強(qiáng)上，植物的組培對(duì)此要求則十分嚴(yán)格，2000-3000lx的光強(qiáng)一般可滿足植物光周期中對(duì)光強(qiáng)的要求。

3.4 溫度及其他方面的影響

一些研究表明，大多數(shù)培養(yǎng)中的細(xì)胞，其生長適宜溫度為26-28oC，但是仍有一些例外。有些植物組織培養(yǎng)還需要低溫處理或受到晝夜溫度環(huán)境的影響，而且溫度可能影響到形態(tài)發(fā)生的類型。

此外基因型、消毒是否徹底、母株的生理狀態(tài)、生長季節(jié)等對(duì)苞葉杜鵑的組織培養(yǎng)有一定影響。

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