哈茨木霉對(duì)幾種常見蔬菜病害防治效果探究

畢文慧 岳琳 劉秀琳 董傳銳

摘 要 哈茨木霉是一種重要的蔬菜病害生防真菌，其對(duì)蔬菜病害致病菌具有拮抗作用，可以抑制病原菌的生長(zhǎng)。基于此，通過離體抑菌實(shí)驗(yàn)探究哈茨木霉對(duì)黑斑病、灰霉病、細(xì)菌性軟腐病3種常見蔬菜病害的生防效果。通過生長(zhǎng)抑制率及有效中濃度（EC50）的測(cè)定發(fā)現(xiàn)：哈茨木霉制劑對(duì)灰霉病、黑斑病致病菌抑制效果顯著，在高濃度下生長(zhǎng)抑制率分別為95.38%和88.62%，對(duì)灰霉病的EC50為3.28 g·L-1，對(duì)黑斑病的EC50為10.03 g·L-1，但其對(duì)細(xì)菌性軟腐病抑制效果不明顯，最高生長(zhǎng)抑制率僅為45.39%，EC50為596.07 g·L-1。

關(guān)鍵詞 哈茨木霉；灰霉??；黑斑??；細(xì)菌性軟腐病

中圖分類號(hào)：S476 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2018.11.070

采后蔬菜易受到生理性病害和病理性病害的影響，在貯運(yùn)過程中損耗率可達(dá)40%～50%，其中病理性腐敗是蔬菜采后損耗的主要因素[1]。蔬菜采后病害種類繁多，其中灰霉病、黑斑病和細(xì)菌性軟腐病是較為常見病害。黑斑病易侵染西蘭花、白菜、甘藍(lán)等蔬菜，其致病菌是蕓苔鏈格孢菌[2]；灰霉病致病菌為灰葡萄孢菌[3]，西紅柿、菜豆等蔬菜比較容易感染該病；細(xì)菌性軟腐病致病菌為胡蘿卜軟腐病堅(jiān)固桿菌，多發(fā)生在白菜、青椒、生菜、洋蔥等蔬菜中[4-5]。

目前，對(duì)于蔬菜采后病害的有效防治手段有化學(xué)抑菌劑和低溫保藏。低溫保藏技術(shù)雖然有效，但我國蔬菜冷鏈運(yùn)輸覆蓋率低且運(yùn)輸成本高，難以全面推廣使用[6]。

化學(xué)抑菌劑對(duì)蔬菜病害防治效果優(yōu)良，但存在健康危害、誘導(dǎo)耐藥致病菌等危害，其使用受到嚴(yán)格限制[7]。利用更加安全的生物防治手段，可以在保障食品安全的前提下進(jìn)行蔬菜采后病害防治。哈茨木霉（Trichodcrma harzianum）是目前研究最為深入的一種生防真菌，對(duì)病原菌抑制具有廣譜性[8]。本文主要研究了哈茨木霉對(duì)黑斑病、灰霉病、細(xì)菌性軟腐病的防治效果，為哈茨木霉在采后蔬菜貯運(yùn)過程中的使用提供參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

蕓苔鏈格孢菌（Alternaria brassicicola）、灰葡萄孢菌（Botrytis cinerea）、胡蘿卜軟腐病堅(jiān)固桿菌（Pectobacterium carotovorum），由中國科學(xué)院微生物研究所分離；哈茨木霉（Trichodcrma harzianum），購自美國拜沃股份有限公司；PDA培養(yǎng)基、營養(yǎng)肉汁瓊脂，青島海博生物技術(shù)有限公司。

MJX-100B-Z型霉菌培養(yǎng)箱、SPX-100B-Z型生化培養(yǎng)箱、YXQ-LS立式壓力蒸汽滅菌器（上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠），SW-CJ系列凈化工作臺(tái)（上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司），XH-C漩渦混合器（金壇市白塔新寶儀器廠），F(xiàn)A1004電子天平（上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司），B2O3LED顯微鏡（重慶奧特光學(xué)儀器有限公司），血球計(jì)數(shù)板等。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 孢子（菌）液的制備

分別向活化后的蕓苔鏈格孢菌、灰葡萄孢菌、胡蘿卜軟腐病堅(jiān)固桿菌斜面中加入10 mL無菌水，刮取斜面孢子或菌苔，振蕩60 s混勻，經(jīng)兩層紗布過濾后，調(diào)整孢子液濃度為106個(gè)/mL，菌液濃度為108個(gè)/mL。

1.2.2 菌餅的制備

取上述制備的孢子液100 μL涂布到PDA培養(yǎng)基上，于28 ℃培養(yǎng)2～3 d，用打孔器打取直徑為6.80 mm的菌餅。取上述制備的菌懸液10 μL涂布到營養(yǎng)肉汁瓊脂上，于30℃培養(yǎng)24 h，用打孔器打取直徑為6.80 mm的菌餅。

1.2.3 哈茨木霉的防治效果研究

1）對(duì)黑斑病的防治效果。配制濃度為280 g·L-1、140 g·L-1、70 g·L-1、35g·L-1、17.5 g·L-1、8.75 g·L-1、4.375g·L-1的哈茨木霉懸液，各取100 μL涂布于PDA培養(yǎng)基上，靜置10 min。將蕓苔鏈格孢菌菌餅，有菌面朝下接種在培養(yǎng)基上，于28 ℃下培養(yǎng)7 d，用十字交叉法測(cè)量蕓苔鏈格孢菌菌落直徑。

2）對(duì)灰霉病的防治效果。配制濃度為80 g·L-1、40 g·L-1、20 g·L-1、10 g·L-1、5 g·L-1、2.5 g·L-1、1.25 g·L-1L、0.625 g·L-1的哈茨木霉懸液，各取100 μL涂布于PDA培養(yǎng)基上，靜置10 min。將灰葡萄孢菌菌餅，有菌面朝下接種在培養(yǎng)基上，于28 ℃下培養(yǎng)7 d，用十字交叉法測(cè)量灰葡萄孢菌菌落直徑。

3）對(duì)細(xì)菌性軟腐病的防治效果。配制濃度為280 g·L-1、140 g·L-1、70 g·L-1、35 g·L-1、17.5 g·L-1、8.75 g·L-1、4.375 g·L-1的哈茨木霉懸液，各取100 μL涂布于營養(yǎng)肉汁培養(yǎng)基上，靜置10 min。將胡蘿卜軟腐病堅(jiān)固桿菌菌餅，有菌面朝下接種在培養(yǎng)基上，于30 ℃下培養(yǎng)24 h，用十字交叉法測(cè)量胡蘿卜軟腐病堅(jiān)固桿菌菌落直徑。

1.3 數(shù)據(jù)處理

1.3.1 生長(zhǎng)抑制率的計(jì)算[9]

根據(jù)以下公式計(jì)算出不同濃度的哈茨木霉制劑對(duì)蕓苔鏈格孢菌、灰葡萄孢菌、胡蘿卜軟腐病堅(jiān)固桿菌的生長(zhǎng)抑制率。

1.3.2 有效中濃度（EC50）的計(jì)算[10]

以哈茨木霉?jié)舛鹊膶?duì)數(shù)值為X軸，不同致病菌的抑制率為Y軸，獲得毒力回歸方程，分別計(jì)算哈茨木霉對(duì)黑斑病、灰霉病、軟腐病抑制有效中濃度（EC50）。

2 結(jié)果與分析

2.1 哈茨木霉對(duì)灰霉病防治效果

由圖1可知，哈茨木霉?jié)舛扰c其對(duì)灰霉病致病菌灰葡萄孢菌的抑菌能力呈正相關(guān)。在濃度低于10 g·L-1時(shí)，隨濃度的增加，生長(zhǎng)抑制率快速增長(zhǎng)；當(dāng)哈茨木霉?jié)舛雀哂?0 g·L-1時(shí)，生長(zhǎng)抑制率持續(xù)增長(zhǎng)但是趨勢(shì)變緩。在濃度為80 g·L-1時(shí)，哈茨木霉制劑對(duì)灰葡萄孢菌的生長(zhǎng)抑制率為95.38%，表現(xiàn)出對(duì)灰葡萄孢菌的顯著抑菌效果。

2.2 哈茨木霉對(duì)黑斑病防治效果

由圖2可知，隨著哈茨木霉?jié)舛忍岣?，其?duì)蕓苔鏈格孢菌抑菌作用越顯著。當(dāng)濃度高于20 g·L-1時(shí)，生長(zhǎng)抑制率增長(zhǎng)趨勢(shì)變緩，在濃度為280 g·L-1時(shí)，哈茨木霉制劑對(duì)灰葡萄孢菌的最高生長(zhǎng)抑制率為88.62%，哈茨木霉能有效抑制蕓苔鏈格孢菌的生長(zhǎng)，對(duì)黑斑病有明顯防治效果。

2.3 哈茨木霉對(duì)細(xì)菌性軟腐病防治效果

由圖3可知，哈茨木霉制劑對(duì)胡蘿卜軟腐病堅(jiān)固桿菌的抑菌率隨濃度增大而穩(wěn)定提高。當(dāng)哈茨木霉制劑濃度最高為280 g·L-1時(shí)，哈茨木霉制劑對(duì)胡蘿卜軟腐病堅(jiān)固桿菌的菌絲生長(zhǎng)抑制率僅為45.39%。哈茨木霉制劑對(duì)胡蘿卜軟腐病堅(jiān)固桿菌的整體抑菌效果不顯著，不能有效防止細(xì)菌性軟腐病的發(fā)生。

2.4 哈茨木霉對(duì)三種致病菌的有效中濃度

由表1可見，哈茨木霉?jié)舛鹊膶?duì)數(shù)值（X）與灰葡萄孢菌、蕓苔鏈格孢菌、胡蘿卜軟腐病堅(jiān)固桿菌生長(zhǎng)抑制率（Y）之間的線性相關(guān)性良好，相關(guān)系數(shù)均在0.93以上。根據(jù)哈茨木霉對(duì)3種致病菌的毒力回歸方程，可算出哈茨木霉對(duì)灰葡萄孢菌、蕓苔鏈格孢菌、胡蘿卜軟腐病堅(jiān)固桿菌的EC50值為3.277 9 g·L-1<10.032 3 g·L-1<596.073 6 g·L-1。由EC50值可知，哈茨木霉制劑對(duì)灰霉病的抑制效果非常顯著，對(duì)黑斑病抑制效果次之，對(duì)細(xì)菌性軟腐病的抑制效果較差。

3 結(jié)語

哈茨木霉可通過營養(yǎng)競(jìng)爭(zhēng)、抗生、重寄生與病害致病菌發(fā)生拮抗作用。此外，研究人員發(fā)現(xiàn)，其還能產(chǎn)生乙醛、吡喃酮、木霉素等對(duì)真菌性病害有抑制作用的分泌物[11-12]，因此對(duì)于真菌性病害防治效果更為顯著。賴建等以哈茨木霉發(fā)酵液對(duì)浸泡處理新鮮茄子，在溫度20～25 ℃，濕度90%～94%條件下貯藏，觀察計(jì)算貯藏期茄子的好果率、發(fā)病率和腐爛率，研究發(fā)現(xiàn)貯藏20 d后，茄子發(fā)病率僅為6%～13%，遠(yuǎn)低于未處理的對(duì)照組，其對(duì)茄子的保鮮效果與多菌靈甲基托布津混合液的保鮮效果相當(dāng)[13]。

本次實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，哈茨木霉在濃度為80 g·L-1時(shí)，可有效抑制灰葡萄孢菌，生長(zhǎng)抑制率為95.38%；當(dāng)濃度為280 g·L-1時(shí)可有效抑制蕓苔鏈格孢菌，生長(zhǎng)抑制率為88.62%；但即使是在最高濃度下對(duì)胡蘿卜軟腐病堅(jiān)固桿菌生長(zhǎng)抑制率僅為45.39%。哈茨木霉對(duì)灰霉病和黑斑病有效中濃度（3.277 9 g·L-1和10.03 g·L-1）顯著低于細(xì)菌性軟腐病（596.073 8 g·L-1），其對(duì)于灰霉病、黑斑病防治具有實(shí)際使用價(jià)值，但不適用于細(xì)菌性軟腐病的單獨(dú)防治。

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（責(zé)任編輯：趙中正）