• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    溫度脅迫下煙粉虱MED隱種與亞洲Ⅱ3隱種三個(gè)抗寒基因表達(dá)模式的分析

    2018-05-14 12:17:22申曉娜呂志創(chuàng)李有志劉萬(wàn)學(xué)萬(wàn)方浩
    植物保護(hù) 2018年1期
    關(guān)鍵詞:煙粉抗寒昆蟲

    申曉娜 呂志創(chuàng) 李有志 劉萬(wàn)學(xué) 萬(wàn)方浩

    摘要

    煙粉虱Bemisia tabaci具有強(qiáng)的溫度耐受性,但煙粉虱入侵種MED隱種與本地種亞洲Ⅱ3隱種在我國(guó)的地理分布上存在巨大的差異。因此本研究以煙粉虱MED隱種和亞洲Ⅱ3隱種為研究對(duì)象,采用qRTPCR技術(shù)分別檢測(cè)兩種煙粉虱3個(gè)抗寒基因(erythrocyte binding protein, trehalase,dopadecarboxylase)在5個(gè)梯度溫度脅迫下mRNA水平上的相對(duì)表達(dá)量,分析其在高低溫脅迫過(guò)程中表達(dá)量的變化,探索抗寒基因在煙粉虱MED隱種成功入侵并廣泛分布于各氣候區(qū)域中所起的作用。研究結(jié)果表明這兩種煙粉虱隱種體內(nèi),3個(gè)抗寒基因均顯著受低溫誘導(dǎo)。但相對(duì)于AsiaⅡ3隱種,低溫脅迫下煙粉虱MED隱種體內(nèi)的3種抗寒基因能更快速地做出響應(yīng),且基因上調(diào)或下調(diào)的量也相對(duì)較多。

    關(guān)鍵詞

    煙粉虱; 溫度脅迫; 抗寒基因; qRTPCR; 定量表達(dá)

    中圖分類號(hào):

    S 433.3

    文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼: A

    DOI: 10.16688/j.zwbh.2017189

    Comparative analysis of the expression patterns of three coldresistant gene in

    MED and Asia Ⅱ3 cryptic species of Bemisia tabaci under temperature stress

    SHEN Xiaona1,2, L Zhichuang2, LI Youzhi1, LIU Wanxue2, WAN Fanghao2

    (1. College of Plant Protection, Hunan Agricultural University, Changsha 410128, China;

    2. State Key Laboratory for Biology of Plant Diseases and Insect Pests, Institute of Plant

    Protection, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100193, China)

    Abstract

    Bemisia tabaci has strong temperature tolerance (heat resistance and cold resistance). However, there were significant differences in the distribution of invasive species (MED cryptic species) and native species (Asia Ⅱ 3 cryptic species) in China. Therefore, in this study, we used qRTPCR to detect the mRNA relative expression level of 3 important coldresistant genes encoding the erythrocyte binding protein, trehalase and dopadecarboxylase in the two B.tabaci cryptic species under the stress of five gradient temperatures. The purpose of the study is to explore the roles of coldresistant genes in the successful invasion of B.tabaci MED cryptic species and widespread distribution in different climatic regions by analyzing the change of the relative expression level. The results of qPCR test showed that three coldresistant genes were significantly induced by low temperature in the two B.tabaci cryptic species. Compared with the Asia Ⅱ 3 cryptic species, B.tabaci MED could make adjustments to adapt to the lowtemperature environment more quickly, and the adjustment level was also relatively higher. Therefore, we speculate that it may be one of the important mechanisms that makes MED cryptic species invade into a wide range of cold regions and adapt quickly to survive.

    Key words

    Bemisia tabaci; temperature stress; coldresistance gene; qRTPCR; quantitative expression

    煙粉虱Bemisia tabaci(Gennadius)屬半翅目Hemiptera,粉虱科Aleyrodidae,是一個(gè)包含 36 個(gè)以上隱種的物種復(fù)合體[14],其中煙粉虱 MED (Mediterranean)(Q型)隱種起源于地中海,入侵性強(qiáng),隨著世界范圍內(nèi)的貿(mào)易往來(lái),該隱種借助花卉及其他經(jīng)濟(jì)作物的苗木迅速擴(kuò)散,在世界各地廣泛傳播并暴發(fā)成災(zāi)。2003 年,在中國(guó)云南昆明首次發(fā)現(xiàn)煙粉虱 MED 隱種[5],現(xiàn)幾乎分布于全國(guó)各個(gè)省市[3],包括位于我國(guó)東北嚴(yán)寒地區(qū)的諸多省市。而亞洲Ⅱ3隱種在我國(guó)自然分布的區(qū)域要相對(duì)小很多,目前仍然僅分布在廣東、臺(tái)灣、浙江、湖南、湖北[67],且沒(méi)有向其他地域擴(kuò)散的趨勢(shì)。因此,我們推測(cè)煙粉虱的抗寒能力是導(dǎo)致它們分布不同的重要原因之一,本研究通過(guò)測(cè)定抗寒基因在溫度脅迫下表達(dá)量的差異來(lái)探索抗寒能力對(duì)入侵種和本地種煙粉虱分布的影響。

    昆蟲抗寒性物質(zhì)包括兩類, 即小分子的物質(zhì)和抗凍蛋白(antifreeze proteins, AFPs)。目前已知的小分子抗寒性物質(zhì)有甘油、山梨醇、甘露醇、五碳多元醇(可能是阿拉伯糖醇或核酸醇)、海藻糖、葡萄糖、果糖以及某些昆蟲體內(nèi)的氨基酸和脂肪酸。不同昆蟲積累的物質(zhì)種類和含量是不同的, 但大多數(shù)昆蟲都由幾種抗寒物質(zhì)構(gòu)成一個(gè)物質(zhì)系統(tǒng)[8]。其中海藻糖作為昆蟲的血糖,具有對(duì)熱、冷、營(yíng)養(yǎng)缺乏、缺水、氧化試劑等多種不良刺激的耐受性[910],能夠保護(hù)生物膜的完整性和維持生物活性,從而保護(hù)細(xì)胞免受凍傷[11]。Ueno 等[12]研究發(fā)現(xiàn)果蠅在遇到寒冷環(huán)境時(shí),代謝率會(huì)提高,并且多巴胺含量有變化,表明多巴胺對(duì)果蠅行為變化的影響具有溫度敏感性。而erythrocyte binding protein富含多種氨基酸,可作為氨基酸的代表對(duì)昆蟲抗寒性進(jìn)行研究。此外在異色瓢蟲體內(nèi)也對(duì)這些小分子物質(zhì)進(jìn)行了初步的研究,研究結(jié)果表明這三種物質(zhì)確實(shí)在異色瓢蟲抵御寒冷環(huán)境中起到作用[13]。

    為了更好地理解煙粉虱的溫度抗逆能力,本試驗(yàn)從微觀層面找到煙粉虱這三個(gè)具有代表性的抗寒關(guān)鍵基因,采用qRTPCR技術(shù)分別檢測(cè)煙粉虱MED隱種和亞洲Ⅱ3隱種兩個(gè)種型體內(nèi)3個(gè)重要抗寒基因在短時(shí)高低溫脅迫下mRNA水平上的相對(duì)表達(dá)量,有研究顯示在低于-5℃和高于45℃的溫度脅迫條件下,兩種煙粉虱存活率開(kāi)始顯著降低,即在-5~45℃的溫度脅迫下這兩種煙粉虱均能正常存活,尚未達(dá)到其極端致死溫度[14],因此本試驗(yàn)選擇0、12、35、40℃4個(gè)溫度梯度對(duì)其進(jìn)行脅迫處理,26℃下做相同處理作為對(duì)照。分析其在抵御溫度脅迫時(shí)所起的作用,以及對(duì)比兩種煙粉虱體內(nèi)表達(dá)量的差異,探索煙粉虱MED隱種成功入侵的原因。期望為進(jìn)一步研究煙粉虱的溫度適應(yīng)機(jī)制和制定可持續(xù)控制煙粉虱危害的方法提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 供試?yán)ハx

    采用的煙粉虱 MED 隱種為中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所生物入侵研究室飼養(yǎng)種群,亞洲Ⅱ3隱種為2016年在廣東偶然采得,帶回室內(nèi)于番茄苗上飼養(yǎng)并通過(guò)COI的方法鑒定其生物型為亞洲Ⅱ3隱種,并在室內(nèi)飼養(yǎng)種群,均以番茄Lycopersicum esculentum Mill (‘中雜九號(hào))為寄主植物飼養(yǎng),無(wú)用藥史,溫室飼養(yǎng)溫度為(26±1)℃,相對(duì)濕度 60%~80%,光周期為L(zhǎng)∥D=16 h∥8 h。

    1.2 儀器及試劑

    1.2.1 主要儀器

    Implen超微量紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(NanoPhotometer TM PClass)、高低溫控溫設(shè)備(K6CCNR,德國(guó)Huber)、臺(tái)式低溫離心機(jī)(艾本德)、實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 儀(7500型)(美國(guó)ABI公司)、普通 PCR 儀、電泳儀、瓊脂糖凝膠電泳成像系統(tǒng)均為美國(guó) BioRad 公司的產(chǎn)品。

    1.2.2 主要試劑

    實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑和耗材盒購(gòu)自美國(guó)BioRAD公司、RNA 提取試劑Trizol Regent 購(gòu)自 Invitrogen 公司;反轉(zhuǎn)錄試劑盒(Super Script FirstStrand Synthesis System)、TransStartTaq DNA Polymerase 及 PCR 相關(guān)試劑(dNTPs mix、10×TransStartTaq Buffer)、引物合成與產(chǎn)物測(cè)序由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司完成。

    1.3 試驗(yàn)方法

    1.3.1 低溫脅迫處理

    每個(gè)隱種各取200頭成蟲于1.5 mL離心管中,置于低溫(0、12℃)和高溫(35、40℃)環(huán)境中分別進(jìn)行脅迫處理1、3、5 h,室溫26℃作為對(duì)照,每個(gè)處理做3個(gè)生物學(xué)重復(fù)。處理結(jié)束后立即液氮冷凍5 min,于-80℃保存。

    1.3.2 抗寒基因的引物設(shè)計(jì)與合成

    選擇EF1α、βtub兩個(gè)基因作為內(nèi)參基因,其在煙粉虱體內(nèi)表達(dá)穩(wěn)定,特異性強(qiáng)[13],且研究證明選擇一個(gè)內(nèi)參基因易使表達(dá)分析出現(xiàn)較大誤差,選擇兩個(gè)內(nèi)參基因進(jìn)行相對(duì)定量試驗(yàn)可獲得更為準(zhǔn)確、可信度更高的試驗(yàn)結(jié)果。根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室前期煙粉虱轉(zhuǎn)錄組分析得到的數(shù)據(jù),確定erythrocyte binding protein、trehalase、dopadecarboxylase 3個(gè)基因?yàn)闈撛诘目购P(guān)鍵基因,利用Primer Premier 5.0設(shè)計(jì),Oligo軟件分析定量引物,具體見(jiàn)表 1,引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。

    1.3.3 總RNA 的提取及cDNA第一鏈的合成

    將脅迫處理過(guò)的200頭煙粉虱成蟲提取總RNA,采用Trizol(Invitrogen,USA)一步法進(jìn)行提取,采用紫外比色和1%瓊脂糖凝膠電泳鑒定 RNA 的純度和完整度。根據(jù)熒光定量標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果確定將其定量為1 000 ng(反轉(zhuǎn)錄后可通過(guò)分光光度計(jì)檢測(cè)cDNA濃度微調(diào)其含量至1 000 ng),采用Super Script FirstStrand Synthesis System 試劑盒進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄合成第一鏈cDNA,并于-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.3.4 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR

    實(shí)時(shí)熒光定量PCR試驗(yàn)體系: Mix 10 μL,染料0.4 μL,引物F(10 pmol)0.4 μL,引物R(10 pmol) 0.4 μL,cDNA模板1 μL,補(bǔ)充DEPC水至20 μL。反應(yīng)程序:94℃ 50 s;94℃ 5 s,60℃ 30 s,40個(gè)循環(huán),繪制65~95℃熔解曲線。除生物學(xué)重復(fù)外,每個(gè)脅迫處理得到的cDNA模板做3個(gè)技術(shù)重復(fù)以減小試驗(yàn)誤差。

    1.3.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

    通過(guò)定量 PCR 測(cè)定出5個(gè)基因(包含內(nèi)參)的 CT 值,取3個(gè)技術(shù)重復(fù)CT值的平均值進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析(數(shù)值相差在 0.5 以內(nèi)可用,3 個(gè)數(shù)值中有 2 個(gè)或 3個(gè)接近,數(shù)值可用,否則重做)。使用2-ΔΔ CT法進(jìn)行計(jì)算,2-ΔΔ CT計(jì)算公式[16]:2-ΔΔ CT=2-[(CT 對(duì)照組-CT對(duì)照組(內(nèi)參))-(CT 待測(cè)組-CT待測(cè)組(內(nèi)參))]。

    采用SPSS13.0軟件(SPSS Inc., USA)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,Oneway ANOVA 進(jìn)行數(shù)據(jù)差異性分析,顯著性檢驗(yàn)水平均為P≤0.05。

    2 結(jié)果

    2.1 高低溫脅迫下抗寒基因表達(dá)分析

    對(duì)前期轉(zhuǎn)錄組篩選獲得的3個(gè)重要抗寒基因進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量 PCR,各隱種對(duì)照組測(cè)定的基因表達(dá)量定為1,分析處理組的相對(duì)表達(dá)量。根據(jù)方差分析結(jié)果制作柱形圖,比較高低溫脅迫過(guò)程中兩個(gè)隱種體內(nèi)同一基因的表達(dá)變化趨勢(shì),分析兩個(gè)隱種之間,同一基因在相同脅迫處理下表達(dá)的差異。

    2.1.1 Erythrocyte binding protein基因表達(dá)分析

    2.1.1.1 不同溫度脅迫下Erythrocyte binding protein基因相對(duì)表達(dá)量的變化趨勢(shì)

    低溫脅迫5 h內(nèi),兩個(gè)隱種體內(nèi)erythrocyte binding protein基因的表達(dá)均發(fā)生上調(diào)(圖1a,1b);在高溫脅迫5 h內(nèi),兩個(gè)隱種體內(nèi)erythrocyte binding protein基因的表達(dá)趨勢(shì)基本一致,均先上調(diào)后下調(diào)(35℃脅迫處理下,僅入侵種MED隱種發(fā)生了顯著的變化,如圖1a,1b)。

    2.1.1.2 相同脅迫條件下煙粉虱兩個(gè)隱種體內(nèi)Erythrocyte binding protein基因相對(duì)表達(dá)量的對(duì)比分析

    由2.1.1.1結(jié)果可知低溫脅迫下兩個(gè)隱種體內(nèi)erythrocyte binding protein基因的表達(dá)均發(fā)生上調(diào),但通過(guò)兩者的對(duì)比分析,我們發(fā)現(xiàn)在煙粉虱MED隱種體內(nèi),erythrocyte binding protein基因僅在脅迫1 h時(shí)就發(fā)生了顯著的上調(diào),而亞洲Ⅱ3隱種在脅迫3 h時(shí)才出現(xiàn)了上調(diào),且上調(diào)的相對(duì)表達(dá)量低于煙粉虱MED隱種1 h時(shí)的表達(dá)量,如圖2a,2b;高溫脅迫下則無(wú)此現(xiàn)象發(fā)生,如圖2c,2d。

    2.1.2 Trehalase基因表達(dá)分析

    2.1.2.1 不同溫度脅迫下trehalase基因相對(duì)表達(dá)量的變化趨勢(shì)

    低溫脅迫5 h內(nèi),兩個(gè)隱種體內(nèi)trehalase基因表達(dá)均下調(diào),如圖3a,3b;在高溫脅迫5 h內(nèi),兩個(gè)種群體內(nèi)trehalase基因的表達(dá)趨勢(shì)基本一致,均發(fā)生一定的下調(diào),如圖3a,3b。

    2.1.2.2 相同脅迫條件下煙粉虱兩個(gè)隱種體內(nèi)trehalase基因相對(duì)表達(dá)量的對(duì)比分析

    與erythrocyte binding protein基因相同的是煙粉虱MED隱種體內(nèi)的trehalase基因在脅迫1 h時(shí)發(fā)生了顯著的下調(diào),而亞洲Ⅱ3隱種在脅迫3 h時(shí)才出現(xiàn)了下調(diào),且下調(diào)的相對(duì)表達(dá)量低于煙粉虱MED隱種1 h時(shí)的表達(dá)量,如圖4a,圖4b;高溫脅迫下則無(wú)此現(xiàn)象發(fā)生,如圖4c,4d。

    2.1.3 Dopa decarboxylase基因表達(dá)分析

    2.1.3.1 不同溫度脅迫下Dopa decarboxylase基因相對(duì)表達(dá)量的變化趨勢(shì)

    低溫脅迫5 h內(nèi),兩個(gè)隱種體內(nèi)dopa decarboxylase基因的表達(dá)均先上調(diào)后再發(fā)生下調(diào)(圖5a,5b)。在高溫脅迫5 h內(nèi),兩個(gè)隱種體內(nèi)dopa decarboxylase基因的表達(dá)趨勢(shì)也基本保持一致,均發(fā)生一定的上調(diào)(5a,5b)。

    2.1.3.2 相同脅迫條件下煙粉虱兩個(gè)隱種dopa decarboxylase體內(nèi)相對(duì)表達(dá)量的對(duì)比分析

    與前兩者不同的是低溫脅迫5 h內(nèi),dopa decarboxylase基因發(fā)生上調(diào)的時(shí)間基本一致,再發(fā)生下調(diào)時(shí)間與erythrocyte binding protein、trehalase基因的規(guī)律是一致的,即煙粉虱MED種群體內(nèi)dopa decarboxylase基因在3 h就開(kāi)始下調(diào),而亞洲Ⅱ3隱種則需在5 h才開(kāi)始下調(diào);而且相對(duì)于本地種(亞洲Ⅱ3隱種),入侵種(煙粉虱MED隱種)能更快速地做出調(diào)節(jié)來(lái)適應(yīng)低溫環(huán)境,如圖6a,6b;高溫脅迫下則無(wú)此現(xiàn)象發(fā)生,如圖6c,6d。

    3 討論

    低溫脅迫是對(duì)昆蟲耐寒性的檢驗(yàn),昆蟲耐寒性是對(duì)低溫環(huán)境長(zhǎng)期適應(yīng)中通過(guò)本身的遺傳變異和自然選擇獲得的一種適應(yīng)性。短時(shí)低溫脅迫是指昆蟲在較短時(shí)間內(nèi)承受突然降溫帶來(lái)的沖擊,并對(duì)其產(chǎn)生反應(yīng),短時(shí)低溫脅迫并不是極端寒冷下的耐寒能力,而是在 0℃左右開(kāi)始被激發(fā),這與季節(jié)性低溫脅迫及長(zhǎng)期低溫脅迫完全不同。短時(shí)低溫脅迫時(shí),細(xì)胞膜和細(xì)胞器最先受到損害,低溫使其膜結(jié)構(gòu)改變,流動(dòng)性變差,失去滲透性,并導(dǎo)致離子的重新組合[17],還會(huì)損傷線粒體的功能。在昆蟲生長(zhǎng)發(fā)育的各個(gè)時(shí)期,均有短時(shí)低溫脅迫的發(fā)生,此方面的報(bào)道最早來(lái)自紅尾肉蠅Sarcophaga crassipalpis、榆葉甲Xanthogaleruca luteola、乳草蝽 Oncopeltus fasciatus[1819],目前已經(jīng)對(duì)彈尾目[20]、鞘翅目[21]、雙翅目[2223]、半翅目[24]、纓翅目[25]以及蜱螨亞綱[2637]進(jìn)行了研究。例如在鱗翅目的幼蟲至成蟲均有短時(shí)低溫脅迫的發(fā)生,甚至是卵期,且不同昆蟲種類及發(fā)育階段條件下快速低溫脅迫產(chǎn)生的效應(yīng)是不同的。而短時(shí)高溫脅迫也能協(xié)助了解基因在環(huán)境脅迫下的變化,從而更完整地掌握許多與溫度調(diào)控相關(guān)基因的調(diào)控機(jī)制。

    煙粉虱MED隱種是世界上危害最大的入侵物種之一,在入侵過(guò)程中對(duì)中國(guó)以及其他多個(gè)國(guó)家和地區(qū)的許多農(nóng)作物造成毀滅性危害。一項(xiàng)在中國(guó)和澳大利亞完成的研究揭示,這一害蟲的交配行為能幫助其入侵土著煙粉虱種群的領(lǐng)地,將危害性不大的土著煙粉虱滅絕并予以取代[28]。所以了解入侵機(jī)制對(duì)害蟲管理很重要,因?yàn)檫@能幫助研究人員就外來(lái)害蟲入侵以及取代土著近緣生物的范圍和速度作出準(zhǔn)確預(yù)警。近幾年來(lái),在我國(guó)東北逐漸發(fā)現(xiàn)煙粉虱MED隱種的危害,說(shuō)明該物種正在適應(yīng)更低的氣溫逐漸向我國(guó)北部嚴(yán)寒地區(qū)入侵,而我國(guó)本地種亞洲Ⅱ3隱種,目前仍僅存在于浙江、廣州一帶[67],沒(méi)有向其他地區(qū)擴(kuò)散的趨勢(shì),因此,研究煙粉虱耐寒機(jī)制對(duì)研究其入侵機(jī)制至關(guān)重要,研究?jī)蓚€(gè)隱種之間的差異表達(dá)對(duì)探索煙粉虱MED隱種如何成功入侵有很大的幫助。在抵御外界逆境時(shí),熱激蛋白、TRP等基因[2930]會(huì)通過(guò)調(diào)節(jié)昆蟲體內(nèi)某種物質(zhì)含量從而抵御多種逆境,因此本研究也通過(guò)短時(shí)高溫脅迫來(lái)了解這3種基因在短時(shí)高溫下表達(dá)量的變化趨勢(shì),從而幫助我們完整地了解3種抗寒基因在調(diào)控溫度適應(yīng)機(jī)制時(shí)所產(chǎn)生的具體作用。

    前期研究發(fā)現(xiàn)熱激蛋白(heatshock proteins,HSPs)在抗寒過(guò)程中發(fā)揮著重要的功能,除了熱激蛋白對(duì)抗寒過(guò)程具有調(diào)控作用外,本研究發(fā)現(xiàn)一些激素類物質(zhì)合成和降解的基因也在煙粉虱抗寒過(guò)程中發(fā)揮著作用,如dopa decarboxylase、trehalase和erythrocyte binding protein。海藻糖作為昆蟲的血糖,具有對(duì)熱、冷、營(yíng)養(yǎng)缺乏、缺水、氧化試劑等多種不良刺激的耐受性[910],能夠保護(hù)生物膜的完整性和維持生物活性,從而保護(hù)細(xì)胞免受凍傷[11]。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)煙粉虱入侵種和本地種的海藻糖酶基因一直在調(diào)控整個(gè)高低溫脅迫過(guò)程(圖3),表明海藻糖酶基因能夠通過(guò)控制煙粉虱的海藻糖含量來(lái)調(diào)控其抗逆過(guò)程。Ueno 等[12]研究發(fā)現(xiàn)果蠅在遇到寒冷環(huán)境時(shí),代謝率會(huì)提高,并且多巴胺含量有變化,表明多巴胺對(duì)果蠅行為變化的影響具有溫度敏感性。本試驗(yàn)中,多巴脫酸酶基因明顯表達(dá)調(diào)控?zé)煼凼肭址N整個(gè)抗寒過(guò)程(圖4),這說(shuō)明多巴胺確實(shí)在煙粉虱MED隱種抵御寒冷環(huán)境中起到一定的作用。此外,本研究發(fā)現(xiàn)erythrocyte binding protein基因在煙粉虱兩個(gè)隱種的整個(gè)抗逆過(guò)程中也發(fā)揮了重要的作用。對(duì)比抗寒基因在兩個(gè)隱種體內(nèi)表達(dá)的異同,發(fā)現(xiàn)短時(shí)低溫脅迫下,兩個(gè)隱種體內(nèi)的三個(gè)抗寒基因均受低溫誘導(dǎo),相對(duì)于本地種(亞洲Ⅱ3隱種),入侵種(煙粉虱MED隱種)能更快地對(duì)低溫環(huán)境做出響應(yīng),推測(cè)其能調(diào)控相關(guān)抗寒物質(zhì)含量來(lái)抵御低溫環(huán)境,進(jìn)一步推測(cè)這可能是其能快速適應(yīng)不同氣候環(huán)境的重要機(jī)制之一。而在短時(shí)高溫脅迫下,抗寒基因在兩個(gè)隱種體內(nèi)發(fā)揮了相似的作用,即能受高溫誘導(dǎo)做出響應(yīng),推測(cè)其能適當(dāng)調(diào)控高溫帶來(lái)的損傷。

    參考文獻(xiàn)

    [1] PERRING T M.The Bemisia tabaci species complex [J]. Crop Protection, 2001, 20(9):725737.

    [2] BARRO P D, DINSDALE A. Bemisia tabaci:A statement of species status [C]∥Abstract of the International Bemisia Workshop, 2009:119.

    [3] HU Jian, BARRO P D, ZHAO Hua, et al. An extensive field survey combined with a phylogenetic analysis reveals rapid and widespread invasion of two alien whiteflies in China [J]. PLoS ONE, 2011, 6(1):e16061.

    [4] 劉樹生. 煙粉虱是一個(gè)物種復(fù)合體[J]. 中國(guó)生物防治學(xué)報(bào), 2012, 28(4):466.

    [5] 褚棟, 張友軍, 叢斌,等. 云南Q型煙粉虱種群的鑒定[J]. 應(yīng)用昆蟲學(xué)報(bào), 2005, 42(1):5456.

    [6] LI Zhengxi. Molecular phylogenetic analysis reveals at least five genetic races of Bemisia tabaci, in China [J]. Phytoparasitica, 2006, 34(5):431440.

    [7] 劉銀泉,劉樹生.煙粉虱的分類地位及在中國(guó)的分布[J].生物安全學(xué)報(bào),2012, 21(4):247255.

    [8] 陳豪, 梁革梅, 鄒朗云,等. 昆蟲抗寒性的研究進(jìn)展[J]. 植物保護(hù), 2010, 36(2):1824.

    [9] ELBEIN A D, PAN Y T, PASTUSZAK I, et al. New insights on trehalose: a multifunctional molecule[J]. Glycobiology, 2003, 13(4): 17R27R.

    [10]ARGELLES J C.Physiological roles of trehalose in bacteria and yeasts: acomparative analysis [J]. Archives of Microbiology, 2000, 174(4): 217224.

    [11]周潔.海藻糖對(duì)酵母抗凍能力的影響[D].無(wú)錫:江南大學(xué),2005.

    [12]UENO T, TOMITA J, KUME S, et al. Dopamine modulates metabolic rate and temperature sensitivity in Drosophila melanogaster [J]. PLoS ONE, 2012, 7(2): e31513.

    [13]鄔夢(mèng)靜,徐青葉,劉雅,等.異色瓢蟲低溫脅迫下過(guò)冷卻點(diǎn)變化及抗寒基因表達(dá)分析[J].中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué),2016,49(4):677685.

    [14]馬方舟.煙粉虱MED隱種溫度耐受性的遺傳與進(jìn)化特征[D]. 北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院,2014.

    [15]DAI T M, L Z C, LIU W X, et al. Selection and validation of reference genes for qRTPCR analysis during biological invasions: The thermal adaptability of Bemisia tabaci MED[J]. PLoS ONE, 2017, 12(3):e0173821.

    [16]紀(jì)冬, 辛紹杰. 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 的發(fā)展和數(shù)據(jù)分析[J]. 生物技術(shù)通訊, 2009, 20(4): 598600.

    [17]DENLINGER D L, LEE R E.Low temperature biology of insects [M].Cambridge University Press, 2010.

    [18]LEE R E, CHEN C P, DENLINGER D L. A rapid cold hardening process in insects [J]. Science, 1987, 238(4832): 14151417.

    [19]CHEN C P, DENLINGER D L, LEE R E.Coldshock injury and rapid cold hardening in the flesh fly Sarcophaga crassipalpis [J]. Physiological Zoology, 1987, 60(3):297304.

    [20]CHEN H, LIANG G, ZOU L, et al. Research progresses in the cold hardiness of insects [J]. Plant Protection, 2010, 36(2):1824.

    [21]WORLAND M R, CONVEY P. Rapid cold hardening in Antarctic microarthropods [J]. Functional Ecology, 2001, 15: 515524.

    [22]SHINTANI Y, ISHIKAWA Y. Relationship between rapid coldhardening and cold acclimation in the eggs of the yellowspotted longicorn beetle, Psacothea hilaris [J]. Journal of Insect Physiology, 2007, 53:10551062.

    [23]CZAJKA M C, LEE R E.A rapid cold hardening response protecting against coldshock injury in Drosophila melanogaster[J]. Journal of Experimental Biology, 1990, 148: 245254.

    [24]YI S X, LEE R E.Rapid coldhardening blocks coldinduced apoptosis by inhibiting the activation of procaspases in the flesh fly Sarcophaga crassipalpis [J].Apoptosis,2011,16:249255.

    [25]POWELL S J, BALE J S.Cold shock injury and ecological costs of rapid cold hardening in the grain aphid Sitobion avenae (Hemiptera:Aphididae)[J]. Journal of Insect Physiology, 2004, 50: 277284.

    [26]LARSEN K J, LEE R E.Cold tolerance including rapid coldhardening and inoculative freezing of fall migrant monarch butterflies in Ohio [J]. Journal of Insect Physiology, 1994, 40(10): 859864.

    [27]QIANG Chengkui, DU Yuzhou, YU Lingya, et al. Effect of rapid cold hardening on the cold tolerance of the larvae of the rice stem borer, Chilo suppressalis (Walker)[J]. Agricultural Sciences in China, 2008, 7(3): 321328.

    [28]劉樹生. 非對(duì)稱交配互作驅(qū)動(dòng)B型煙粉虱的廣泛入侵及對(duì)土著煙粉虱的取代[J]. 中國(guó)基礎(chǔ)科學(xué), 2008, 10(2):2021.

    [29]李倩. 三種粉虱瞬時(shí)感受器離子通道基因的克隆、表達(dá)及在高溫脅迫中的功能驗(yàn)證[D]. 南寧:廣西大學(xué), 2014.

    [30]DENLINGER D, RINEHART J, LI A. Heat shock proteins are critical for insect winter survival[J]. Comparative Biochemistry & Physiology Part A Molecular & Integrative Physiology, 2007, 146(4):S151S152.

    (責(zé)任編輯:田 喆)

    猜你喜歡
    煙粉抗寒昆蟲
    煙粉虱MEAM1和MED成蟲在辣椒上傳播番茄褪綠病毒的特性
    RFID昆蟲閱讀放大鏡
    玩具世界(2022年3期)2022-09-20 01:48:20
    抗寒桂花香飄果博會(huì)
    蘋果矮化砧木抗寒育種研究進(jìn)展
    河北果樹(2020年4期)2020-11-26 06:04:28
    借昆蟲上課
    甘肅教育(2020年2期)2020-09-11 08:01:48
    近10年我國(guó)煙粉虱發(fā)生為害及防治研究進(jìn)展
    我最喜歡的昆蟲——知了
    昆蟲的冬天
    3種茜草科植物的抗寒特性
    給豬喂哪些飼料可抗寒
    三级毛片av免费| 午夜91福利影院| 一进一出抽搐动态| а√天堂www在线а√下载 | 久9热在线精品视频| 亚洲,欧美精品.| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 丝瓜视频免费看黄片| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 麻豆乱淫一区二区| 色老头精品视频在线观看| 在线观看66精品国产| 9热在线视频观看99| 午夜激情av网站| 高清在线国产一区| 操美女的视频在线观看| 欧美日韩一级在线毛片| 免费在线观看亚洲国产| 亚洲人成伊人成综合网2020| 日本vs欧美在线观看视频| x7x7x7水蜜桃| 成人国语在线视频| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 一区二区日韩欧美中文字幕| 精品人妻在线不人妻| 亚洲欧美色中文字幕在线| 婷婷成人精品国产| 午夜两性在线视频| 欧美不卡视频在线免费观看 | 亚洲视频免费观看视频| 免费不卡黄色视频| 韩国精品一区二区三区| 无限看片的www在线观看| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 国产99久久九九免费精品| 在线观看免费高清a一片| 韩国av一区二区三区四区| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 成人永久免费在线观看视频| 欧美乱码精品一区二区三区| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 国产精品1区2区在线观看. | 无遮挡黄片免费观看| 国产在线观看jvid| 精品一品国产午夜福利视频| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 哪里可以看免费的av片| 久久久精品欧美日韩精品| 成年女人永久免费观看视频| 极品教师在线免费播放| 欧美在线一区亚洲| 精品久久久久久久末码| 国产亚洲精品久久久com| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 午夜激情福利司机影院| 欧美日韩一级在线毛片| 日韩高清综合在线| 高清毛片免费观看视频网站| 国产成人影院久久av| 亚洲欧美日韩高清专用| av女优亚洲男人天堂| 日韩亚洲欧美综合| 一边摸一边抽搐一进一小说| 亚洲成av人片免费观看| 99在线视频只有这里精品首页| tocl精华| 久99久视频精品免费| 国产v大片淫在线免费观看| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 国内精品久久久久精免费| 一区二区三区国产精品乱码| 色老头精品视频在线观看| 国产黄片美女视频| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 黄色日韩在线| 国产黄片美女视频| 日韩免费av在线播放| 国内揄拍国产精品人妻在线| 亚洲av美国av| 国产精品日韩av在线免费观看| 俄罗斯特黄特色一大片| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 极品教师在线免费播放| 69av精品久久久久久| 免费看a级黄色片| 国产精品av视频在线免费观看| 亚洲国产欧美人成| 男女视频在线观看网站免费| 欧美色视频一区免费| 色综合欧美亚洲国产小说| 久久久精品大字幕| 在线国产一区二区在线| 欧美乱色亚洲激情| 在线观看66精品国产| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 久久精品国产自在天天线| 床上黄色一级片| 极品教师在线免费播放| 中亚洲国语对白在线视频| 久久午夜亚洲精品久久| 国产麻豆成人av免费视频| 国产成人影院久久av| 激情在线观看视频在线高清| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 久久久国产成人免费| 国产高清视频在线观看网站| 九色成人免费人妻av| 成人午夜高清在线视频| 亚洲最大成人手机在线| 欧美3d第一页| 精品一区二区三区视频在线 | 国产乱人视频| www日本黄色视频网| 精品乱码久久久久久99久播| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 久久九九热精品免费| 成年免费大片在线观看| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 国内精品一区二区在线观看| 国产精品综合久久久久久久免费| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 波多野结衣高清无吗| 五月伊人婷婷丁香| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 午夜精品在线福利| 国产成人欧美在线观看| 亚洲人成网站高清观看| 欧美日韩国产亚洲二区| 麻豆成人av在线观看| 精品人妻1区二区| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 一二三四社区在线视频社区8| 国产黄色小视频在线观看| 日本一二三区视频观看| 很黄的视频免费| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 国产探花在线观看一区二区| 婷婷亚洲欧美| 欧美+亚洲+日韩+国产| 一a级毛片在线观看| 国产一区二区在线av高清观看| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 成人性生交大片免费视频hd| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 国产精品一区二区免费欧美| 成人永久免费在线观看视频| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 亚洲成人中文字幕在线播放| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 极品教师在线免费播放| 午夜福利视频1000在线观看| 狂野欧美激情性xxxx| 国产av麻豆久久久久久久| 一区二区三区激情视频| 3wmmmm亚洲av在线观看| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 最近最新免费中文字幕在线| 久久久久性生活片| xxx96com| 欧美日韩精品网址| 午夜福利18| 久久精品综合一区二区三区| 99国产精品一区二区蜜桃av| 熟女人妻精品中文字幕| 亚洲av不卡在线观看| 日韩欧美在线乱码| 国内精品美女久久久久久| 国产伦精品一区二区三区视频9 | 99精品久久久久人妻精品| 欧美成人免费av一区二区三区| 啦啦啦韩国在线观看视频| 国产毛片a区久久久久| 12—13女人毛片做爰片一| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 少妇裸体淫交视频免费看高清| bbb黄色大片| 亚洲在线观看片| 白带黄色成豆腐渣| 日韩精品青青久久久久久| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 老司机福利观看| 最新美女视频免费是黄的| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 精品不卡国产一区二区三区| 精品久久久久久,| 一二三四社区在线视频社区8| 免费人成视频x8x8入口观看| 亚洲一区高清亚洲精品| 国产精品野战在线观看| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 欧美bdsm另类| 欧美性猛交黑人性爽| 啪啪无遮挡十八禁网站| 日本黄色片子视频| 中文字幕久久专区| 精品不卡国产一区二区三区| 免费看a级黄色片| 国产av不卡久久| 日本a在线网址| 亚洲人成电影免费在线| 亚洲人成网站高清观看| 一个人看视频在线观看www免费 | 国产精品久久视频播放| 国产单亲对白刺激| 午夜精品一区二区三区免费看| 757午夜福利合集在线观看| 在线观看av片永久免费下载| 国产免费一级a男人的天堂| 国内揄拍国产精品人妻在线| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 99久久精品国产亚洲精品| 国产欧美日韩精品一区二区| 久久国产精品影院| 国产真人三级小视频在线观看| 九色成人免费人妻av| 亚洲最大成人手机在线| 天堂影院成人在线观看| 天天一区二区日本电影三级| 国产三级在线视频| 亚洲国产欧美人成| 欧美日韩福利视频一区二区| www.熟女人妻精品国产| 国产精品99久久99久久久不卡| 亚洲精品成人久久久久久| av在线天堂中文字幕| 国产美女午夜福利| 久久久久久久久中文| 国产乱人视频| 九九热线精品视视频播放| 亚洲人与动物交配视频| 怎么达到女性高潮| 国产午夜福利久久久久久| 国产精品av视频在线免费观看| 成人午夜高清在线视频| 成熟少妇高潮喷水视频| 国产探花极品一区二区| 啦啦啦免费观看视频1| 亚洲无线在线观看| 制服丝袜大香蕉在线| 99精品久久久久人妻精品| 中文字幕久久专区| 国产一区二区三区视频了| 国产91精品成人一区二区三区| 欧美成人性av电影在线观看| 国产中年淑女户外野战色| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 免费看光身美女| 国产不卡一卡二| 69av精品久久久久久| 欧美国产日韩亚洲一区| 国产乱人伦免费视频| 日韩人妻高清精品专区| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 麻豆成人午夜福利视频| 午夜精品一区二区三区免费看| 又紧又爽又黄一区二区| 亚洲激情在线av| 欧美成狂野欧美在线观看| 九色国产91popny在线| 麻豆久久精品国产亚洲av| 久久久久久久午夜电影| 亚洲成人久久爱视频| 成人永久免费在线观看视频| 一级a爱片免费观看的视频| 超碰av人人做人人爽久久 | 国产色婷婷99| 国产精品综合久久久久久久免费| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 久久久国产成人免费| 日韩大尺度精品在线看网址| 国产乱人伦免费视频| 精品国产三级普通话版| 18禁美女被吸乳视频| 成年女人毛片免费观看观看9| 午夜日韩欧美国产| 久久欧美精品欧美久久欧美| 欧美日韩乱码在线| 91麻豆av在线| 国内精品一区二区在线观看| www日本黄色视频网| 午夜亚洲福利在线播放| 免费看日本二区| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 亚洲一区二区三区不卡视频| 亚洲欧美日韩无卡精品| 免费观看人在逋| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 少妇熟女aⅴ在线视频| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| www.www免费av| 久久人妻av系列| 欧美三级亚洲精品| 美女黄网站色视频| 久久午夜亚洲精品久久| 91麻豆av在线| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 午夜a级毛片| 国产精华一区二区三区| 男女那种视频在线观看| 国产午夜福利久久久久久| 有码 亚洲区| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 中文资源天堂在线| 在线播放国产精品三级| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 日本黄大片高清| 国产精品三级大全| 国产淫片久久久久久久久 | 亚洲欧美激情综合另类| 欧美+日韩+精品| 美女免费视频网站| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 亚洲色图av天堂| 在线视频色国产色| 天天躁日日操中文字幕| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美 | 99久久无色码亚洲精品果冻| 亚洲国产中文字幕在线视频| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 国产精品久久久人人做人人爽| 黄片大片在线免费观看| 国内精品久久久久精免费| 日本免费一区二区三区高清不卡| 床上黄色一级片| 精品无人区乱码1区二区| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| av国产免费在线观看| 18美女黄网站色大片免费观看| 国产在线精品亚洲第一网站| 一进一出抽搐gif免费好疼| 国产三级黄色录像| 亚洲五月婷婷丁香| 精品一区二区三区av网在线观看| 欧美一区二区精品小视频在线| 18禁在线播放成人免费| 欧美成人免费av一区二区三区| 白带黄色成豆腐渣| 日本精品一区二区三区蜜桃| 很黄的视频免费| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 国产精品av视频在线免费观看| 男人和女人高潮做爰伦理| 丁香六月欧美| 日本五十路高清| 欧美一区二区亚洲| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 久久香蕉精品热| 亚洲熟妇熟女久久| 国产97色在线日韩免费| 一个人看的www免费观看视频| 黄片小视频在线播放| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 精品国产三级普通话版| 麻豆成人午夜福利视频| 欧美日本视频| 国产高清激情床上av| 欧美乱妇无乱码| 日韩欧美在线乱码| 久久亚洲精品不卡| 日韩亚洲欧美综合| 国产精品亚洲美女久久久| 亚洲片人在线观看| 男人和女人高潮做爰伦理| 黑人欧美特级aaaaaa片| 97碰自拍视频| 欧美黑人欧美精品刺激| 国产真实乱freesex| 免费观看精品视频网站| 在线视频色国产色| 国产精品 国内视频| 免费观看精品视频网站| av国产免费在线观看| 真人一进一出gif抽搐免费| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 国产一区在线观看成人免费| 精品久久久久久久末码| 窝窝影院91人妻| 精华霜和精华液先用哪个| 日本一二三区视频观看| 国产精品电影一区二区三区| 在线视频色国产色| 午夜免费激情av| 亚洲中文日韩欧美视频| 亚洲国产精品999在线| 日韩高清综合在线| 久久久久精品国产欧美久久久| 神马国产精品三级电影在线观看| 亚洲五月天丁香| 久久久久久久久中文| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 少妇人妻精品综合一区二区 | 他把我摸到了高潮在线观看| 女警被强在线播放| 国产精品乱码一区二三区的特点| 亚洲激情在线av| 美女高潮的动态| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 国产一区二区激情短视频| 亚洲国产中文字幕在线视频| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 亚洲黑人精品在线| 亚洲中文日韩欧美视频| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 最近在线观看免费完整版| 网址你懂的国产日韩在线| 国产亚洲欧美在线一区二区| 日本在线视频免费播放| 又粗又爽又猛毛片免费看| 夜夜爽天天搞| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 男女午夜视频在线观看| 男人的好看免费观看在线视频| 久久久久免费精品人妻一区二区| 国产精品久久久人人做人人爽| 欧美色视频一区免费| 婷婷亚洲欧美| 麻豆国产97在线/欧美| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 午夜免费激情av| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 久久久久性生活片| 动漫黄色视频在线观看| www.999成人在线观看| 天天添夜夜摸| 婷婷丁香在线五月| 精品一区二区三区人妻视频| 亚洲av一区综合| 成人精品一区二区免费| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 麻豆国产av国片精品| 免费无遮挡裸体视频| 国产成人福利小说| 亚洲精品乱码久久久v下载方式 | 久久九九热精品免费| 激情在线观看视频在线高清| 欧美一区二区国产精品久久精品| 成人18禁在线播放| 午夜影院日韩av| 久久性视频一级片| 757午夜福利合集在线观看| 久久久久久大精品| 成人18禁在线播放| 亚洲精品日韩av片在线观看 | 天堂影院成人在线观看| 欧美日本亚洲视频在线播放| a在线观看视频网站| 无限看片的www在线观看| www.999成人在线观看| 精品午夜福利视频在线观看一区| 神马国产精品三级电影在线观看| 日韩亚洲欧美综合| 国产黄片美女视频| 九九热线精品视视频播放| 国产成人a区在线观看| 久久亚洲精品不卡| 色视频www国产| 亚洲 国产 在线| av在线天堂中文字幕| 国产av麻豆久久久久久久| 国产精品久久久人人做人人爽| 欧美中文日本在线观看视频| 亚洲成人久久性| 啪啪无遮挡十八禁网站| 9191精品国产免费久久| 欧美黄色片欧美黄色片| 亚洲人成网站在线播| 97碰自拍视频| 午夜精品在线福利| 精品不卡国产一区二区三区| 免费人成视频x8x8入口观看| 韩国av一区二区三区四区| 99在线人妻在线中文字幕| 亚洲国产精品久久男人天堂| 在线视频色国产色| 欧美日韩一级在线毛片| 日韩中文字幕欧美一区二区| 久久6这里有精品| 久久精品国产综合久久久| 九色成人免费人妻av| 一本精品99久久精品77| www日本黄色视频网| 操出白浆在线播放| 熟女电影av网| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 亚洲无线在线观看| 九色国产91popny在线| 亚洲片人在线观看| 最新在线观看一区二区三区| 91字幕亚洲| 好男人在线观看高清免费视频| 亚洲专区国产一区二区| 一夜夜www| 特级一级黄色大片| 欧美一区二区亚洲| 国产精品野战在线观看| 久久久久久久久久黄片| 色尼玛亚洲综合影院| 少妇丰满av| 最新在线观看一区二区三区| av天堂在线播放| 毛片女人毛片| 日韩精品中文字幕看吧| 亚洲av电影在线进入| 一区二区三区国产精品乱码| 亚洲片人在线观看| 狂野欧美激情性xxxx| 国产三级在线视频| 日韩有码中文字幕| 黄色日韩在线| 床上黄色一级片| 日本三级黄在线观看| 国产不卡一卡二| 亚洲久久久久久中文字幕| 国产男靠女视频免费网站| 久久性视频一级片| 精品国产亚洲在线| 男人的好看免费观看在线视频| 国产精品99久久99久久久不卡| 男女视频在线观看网站免费| 少妇高潮的动态图| 两个人视频免费观看高清| 国产精品亚洲美女久久久| 亚洲性夜色夜夜综合| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 国产精品一及| 两个人看的免费小视频| 国产精品av视频在线免费观看| 色av中文字幕| 久久人人精品亚洲av| 亚洲人成伊人成综合网2020| 我的老师免费观看完整版| 日本一二三区视频观看| 亚洲av二区三区四区| 老鸭窝网址在线观看| 国产乱人伦免费视频| 国产黄色小视频在线观看| 又黄又粗又硬又大视频| 俄罗斯特黄特色一大片| 国产熟女xx| 午夜亚洲福利在线播放| 又黄又粗又硬又大视频| 极品教师在线免费播放| 亚洲午夜理论影院| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 久久久国产成人免费| 我的老师免费观看完整版| 精品一区二区三区视频在线 | 俺也久久电影网| av在线蜜桃| 国产美女午夜福利| 精品人妻1区二区| 亚洲人成伊人成综合网2020| 757午夜福利合集在线观看| а√天堂www在线а√下载| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 欧美日韩黄片免| 99在线视频只有这里精品首页| 日韩欧美 国产精品| 在线观看日韩欧美| 此物有八面人人有两片| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 国产一级毛片七仙女欲春2| 一本一本综合久久| 麻豆久久精品国产亚洲av| 国产真实乱freesex| 欧美+亚洲+日韩+国产| 亚洲成a人片在线一区二区| 午夜福利18| 色av中文字幕| 国产伦精品一区二区三区视频9 | 欧美最新免费一区二区三区 | 不卡一级毛片| 日本一二三区视频观看| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 久久久国产成人免费| 此物有八面人人有两片| 最新在线观看一区二区三区| 国产真人三级小视频在线观看| 国产久久久一区二区三区| 18禁国产床啪视频网站| 精品久久久久久久久久免费视频| 一二三四社区在线视频社区8| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 国产精品一区二区三区四区久久| 真人做人爱边吃奶动态| 久久久久久国产a免费观看| 亚洲午夜理论影院| 制服丝袜大香蕉在线| 天天一区二区日本电影三级| 男女视频在线观看网站免费| 又紧又爽又黄一区二区| 国产美女午夜福利| 精品一区二区三区人妻视频| 美女 人体艺术 gogo| 五月伊人婷婷丁香| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 五月玫瑰六月丁香| 国产精品野战在线观看| 免费观看人在逋| 网址你懂的国产日韩在线| 一本久久中文字幕| 国产乱人视频| 欧美黄色淫秽网站| 日韩精品青青久久久久久|